Új molekuláris biológiai módszerek

Slides:



Advertisements
Hasonló előadás
BIOTECHNOLÓGIA D MsC gyakorlat
Advertisements

A mutagenezis célja, haszna Mutáció Az egyed megjelenése (fenotípusa) megváltozHAT Ebből visszakövetkeztethetünk a mutációt szenvedett gén funkciójára.
Készítette: Bacher József
Delta Bio 2000 Kft. Ügyvezető: Dr. Haracska Lajos
A polimeráz láncreakció Gurbi Bianka március 4. Emelt Biotechnológiai Számítások.
DNS replikáció Szükséges funkciók Iniciáció
DNS replikáció DNS RNS Fehérje
DNS replikáció: tökéletes másolat osztódáskor
A DNS Szekvenálás 2008 Géntechnikák labor.
Oligonukleotid szintézis
A NUKLEINSAVAK MANIPULÁCIÓJA SORÁN HASZNÁLATOS ENZIMEK
SiRNAs: APPLICATIONS IN FUNCTIONAL GENOMICS AND POTENTIAL AS THERAPEUTICS Yair Dorsett and Thomas Tuschl Nature 318 | APRIL 2004 | VOLUME 3 (
Az intergénikus régiók és a genom architektúrájának kapcsolata Craig E Nelson, Bradley M Hersh és Sean B Carrol (Genome Biology 2004, 5:R25) Bihari Péter.
Antibiotikumok fejlesztése a genomika segítségével
Strukturális genomika Gyakorlati feladatok. SNP-k és vizsgálatuk Mi az SNP?
Egyéb öröklődési típusok és epigenetika Láng Orsolya október 20.
Molekuláris genetika Falus András.
Kedvenc Természettudósom:
Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen Azonosító.
génszabályozás eukariótákban
Génexpresszió (génkifejeződés)
Polimeráz láncreakció (PCR)
MUTÁCIÓ ÉS KIMUTATÁSI MÓDSZEREI
Antigén receptorok Genetikai, Sejt- és Immunbiológiai Intézet.
Fejezetek a sejtbiológiából Teloméra és telomeráz. Sejtmagvacska
Epigenetika és életmód
Ahhoz, hogy dolgozni tudjunk égy adott génnel, vagy szekvenciával nagy mennyiségű DNS-re van szükségünk, ezért valamilyen módon „klónozni” kell, a gén.
Készítette: Leidecker Orsolya
2009. november 26. Transzgének expressziós profiljának felvétele Transzgének expressziós profiljának felvétele Kukoricabogár- és herbicid-rezisztens növények.
Készítette: Sólyom Katalin Április 22.
DNS amplifikáció pl . DNS szekvenálásnál nagy jelentősége van
Transzgénikus állatok
Készítette: Vancsó Ildikó
Az izomdystrophiák molekuláris genetikai vizsgálata
Arabidopsis thaliana tip120 inszerciós mutáns jellemzése
Arabidopsis thaliana tip120/cand1 T-DNS inszerciós mutáns jellemzése.
AZ ELLENANYAG SOKFÉLESÉG GENETIKAI HÁTTERE. AZ ELLENANYAGOK SZERKEZETE KOMPLEMENT AKTIVÁCIÓ SEJTHEZ KÖTŐDÉS LEBOMLÁS TRANSZPORT Könnyű lánc (L) Nehéz.
23-mer 12-mer A közbeeső DNS hurok kivágódik A heptamerek és nonamerek visszafelé illeszkednek Az RSS által kialakított alakzat a rekombinázok célpontja.
Nukleinsavak és a fehérjék bioszintézise
Génsebészet Cseh Zsófia.
ELŐNYÖK ÉS LIMITÁCIÓK MOLEKULÁRIS MIKROBIOLÓGIAI VIZSGÁLATI MÓDSZEREK ALKALMAZHATÓSÁGA A BIOREMEDIÁCIÓBAN Balázs Margit.
1, GÉNKÖNYVTÁRAK ALKALMAZÁSA
IN VITRO MUTAGENEZIS Buday László.
A P elemek mobilitásának szabályozása
A P elem technikák: deléció izolálása P elem remobilizációval
A P elem technikák: enhanszerek és szupresszorok azonosítása
A P elem technikák: enhanszerek és gének csapdázása
A P elem technikák: génmanipuláció tetszés szerint
Készítette: Czigléczki Gábor
Replikáció, transzkripció, transzláció
Sejtmag II. Dr. habil. Kőhidai László
A a Aktivált B-sejt érett naiv B-sejt Memória B-sejt B-SEJT DIFFERENCIÁCIÓ A PERIFÉRIÁN SZOMATIKUS HIPERMUTÁCIÓ IZOTÍPUS VÁLTÁS Ag.
AZ ELLENANYAG SOKFÉLESÉG GENETIKAI HÁTTERE. AZ ELLENANYAGOK SZERKEZETE KOMPLEMENT AKTIVÁCIÓ SEJTHEZ KÖTŐDÉS LEBOMLÁS TRANSZPORT Könnyű lánc (L) Nehéz.
Sejtek genetikai módosítása (gének bevitele vagy eltávolítása)
Molekuláris klónozás a gyakorlatban. CRISPR/Cas rendszerek Adaptív bakteriális immunitás Idegen nukleinsavak ellen ( pl. vírusok) Ezek integrálása a genomba,
DNS szintézis, replikáció Információ hordozó szerep bizonyítéka Avery-Grifith kísérlet Bakterifágos kísérlet.
Vakcinák. Edward Jenner Fekete himlő Tehén himlő Fekete himlő Tehén himlő
Új molekuláris biológiai módszerek
Polimeráz Láncreakció:PCR, DNS ujjlenyomat
RNS TUMORVÍRUSOK (Retrovírusok)
Replikáció Wunderlich Lívius 2015.
Új molekuláris biológiai módszerek labor
Molekuláris biológiai módszerek
Génexpresszió szabályozása miRNS/siRNS/PIWI
Molekuláris biológiai módszerek
Új molekuláris biológiai módszerek
Molekuláris biológiai módszerek
A génexpresszió és az ezzel kapcsolatos struktúrák
Új molekuláris biológiai módszerek
EPIGENETIKA OLYAN JELENSÉGEKKEL FOGLALKOZIK, AMELYEK KÖVETKEZTÉBEN
Előadás másolata:

Új molekuláris biológiai módszerek Mutagenezis 2015

Random mutagenezis: Kémiai ágensek, radioaktivitás Irányított mutagenezis: Deléciók Inszerciók Pontmutáció (mutáns primer kell)

Kunkel módszer T4 DNS polimeráz T4 DNS ligáz dUTP-ase Uracil N-glycosylase

Metiláción alapuló módszer Dam methylase + törzs csak a metiláltat hasítja

Restrikciós hely tönkretétele

Mutáció PCR-rel: a megaprimer módszer

Mutáció PCR-rel: láncköz primerek használata

Random mutációk készítése PCR-rel Taq polimeráz: nem túl jó fidelitás Mn2+ ionok tovább rontják Eltérő koncentrációjú dNTP-k 1-1 mM dCTP és dTTP 0,2 mM dGTP ás dATP 2-2 µM primer Alacsony ciklusszám (15)

Deléciók generálása: BAL 31, vagy Exo III és S1 nukleázokkal

PCR deléciós és inszerciós primerekkel deletálandó szakasz inzertálandó PCR deléciós és inszerciós primerekkel

Deléció generálása PCR-rel zsákutca ! PCR a külső primerekkel deléciós termék kivágandó szakasz A B C D PCR fűtés, hűtés + Klenow + dNTP-k Deléció generálása PCR-rel

Génkiütés állatokban (egérben) STEM sejtek blasztociszta

Ha a kimérák gonádjaiban megtalálható a kiütött gén, akkor tudunk homozigótát létrehozni

Nehézségek: Letális mutációk: Csak embrionális vizsgálat, vagy kondícionális mutánsiok Nehezen kiüthető gének: Heterokromatin, kiterjedt metiláció, repetitív szekvenciák. Nincs, vagy más a hatása egérben: Nem tudunk emberre következtetni.

Új molekuláris biológiai módszerek Géncsendesítés 2015

A géncsendesítés elmélete Védekezés vírusok ellen Génexpresszió szabályozása pri-miRNA pre-miRNS miRNS siRNS emésztődés „dicer” enzimmel szétválás a komplex kialakulásakor tökéletes párosodás tökéletlen párosodás RISC komplex transzláció gátlás mRNS-hasítás A géncsendesítés elmélete RN-ázok sejtmag

RNA-induced silencing complex

RNS-alapú interferencia: Gyors, könnyű, olcsó. Jól transzfektálható sejt kell. Standard dsRNS (olcsó) Módosított dsRNS (specifikus, stabil, gyengébb védekezés) DNS-alapú interferencia (vektor): Regulálható, vírussal bejuttatható, stabil kiütött sejtvonalak RNS Pol. II. hajtott (szövetspecifikus, jobb esély a sikerre) RNS Pol. III. hajtott (nagyon erős) Lassú hatás (protein féléletidő) Transzfekció hatékonyság siRNS hatékonyság (poolok) Folyamatos kontroll: + és – kontrollok (GFP, scrambled) Több siRNS ugyanarra a génre Northern (qPCR), Western, toxicitás

Tervezés: On-line segéd- programokkal RNA-induced silencing complex