11 Autoantitestek vizsgáló módszerei; Adatbázisok (ÁOK)

22 ? ? ? Immunoglobulin szerkezet ? Nevezze meg a kérdőjellel jelölt részeket!

33 Immunoglobulin osztályok

44 Effektor funkciók ADCC

55 Autoantitestek Természetes – IgM> IgG, IgA – Alacsony affinitás – Magas szérum koncentrációt is elérhet – Polireaktív – CD5 + B1 sejtek Patológiás – IgG, IgA v. IgM – Nagy affinitás – Magas szérum cc. – Specifikusabb – B2 sejtek

66 Natural autoantibodies reactive with glycosaminoglycans in rheumatoid arthritis. György B et al. Arthritis Res Ther. 2008;10(5):R110. Természetes autoantitestek szintje variábilis és magas is lehet egészséges és kóros állapotokban is

77 INTRACELLULÁRIS Hősokk fehérjék hsp65, hsp70, hsp90, ubiquitin Enzimek aldoláz, citokróm- c, SOD, NADPH oxidáz Citoplazma komponensei, citoszkeletális elemek aktin, miozin, tubulin, mioglobin, myelin bázikus protein Sejtmag komponensek DNS, hisztonok MEMBRÁN Sejt membrán komponensek β2-microglobulin, β2 spectrin, acetilkolin receptor EXTRACELLULÁRIS Citokinek IL-1, TNF, IFN Hormonok thyreoglobin, inzulin Plazma fehérjék albumin, IgG, transzferrin Természetes autoantitestek által felismert antigének („immunológiai homunculus”)

88 Autoantitestek termelődése pl. dsDNS, hiszton, kromatin His-RS: histidyl-tRNA synthetase APRIL: a proliferation-inducing ligand BAFF: B-cell activating factor (BLyS, CD268)

99 A patológiás autoantitestek kimutatásának jelentősége 1. A betegségek patomechanizmusának jobb megértésében 2. A diagnózisban, beleértve szindrómák együttes előfordulását (overlap) 3. Prognózisban, rizikócsoportok megjelölésében 4. A betegség aktivitásának megítélésében 5. Terápia eredményességének megítélésében

10 Autoimmun betegségek Szisztémás SLE RA Scleroderma Dermato/polymyositis Kevert kötőszöveti betegség Sjögren szindróma Szerv specifikus Myasthenia gravis Hashimoto thyreoiditis Basedow-kór Coeliakia IDDM Addison-kór Primer biliáris cirrózis Goodpasture-szindróma (haemorrhagias pulmo-renalis szindróma)

11 Anti‐nukleáris AAT (ANA): sejtmag különböző komponensei ellen termelt AAT gyüjtőneve ‐ kettősszálú DNS -‐ ENA‐6 család (=extractable nuclear antigen) ‐ Centromer (Cenp‐B) Anti‐neutrofil citoplazma AAT (ANCA) : ‐ MPO (myeloperoxidáz) ‐ PR3 (proteináz3) Foszfolipid szindróma autoantitestjei: ‐ cardiolipin, ‐ b2‐glycoprotein‐1 ‐ foszfatidil szerin, ‐ proteinS, proteinC, ‐ prothrombin elleni AAT Szisztemás betegséget jelző autoantitest (AAT) panelek

12 Immunológiai vizsgálat kérőlap

13 Szisztémás lupus erythematosus Immunkomplex betegségek prototípusa Prevalencia nők körében 1:800-1:1000 Utóbbi években az ismert SLE-s betegek száma nőtt világszerte

14 Szisztémás lupus erythematosus Gyakoribb autoantitestek: Anti DNS (kettős szálú DNS) Rheumatoid faktor (RF) Vvt elleni Thrombocita elleni Beta 2 glikoprotein I elleni Anti C1q Gyakori a cryoglobulinaemia: azaz olyan általában immunglobulinokból álló komplexek, melyek alacsony hőmérsékleten kicsapódnak a szérumból Számos különböző autoantitest Színes klinikai kép (Lásd előző ábra)

15 Ideális laboratóriumi aktivációs marker a betegség aktivitásának megítélésére Anti-DNS AAT és komplement szint együttes változása: Prognosztikus faktor Terápia hatékonyságának követésére alkalmas

16 Milyen módszerekkel lehet az egyes autoantitesteket kimutatni?

17 Screening tesztek: – Direkt immunhisztokémia a betegből vett szövetmintán – Indirekt immunhisztokémia: humán Hep2 sejttenyészeten (az autoantitest specifikus mintázatot ad a sejten belül (nukleáris, nukleoláris, centromer, citoplazmatikus, mitokondriális stb. mintázat) pl. antinukleáris antitest (ANA) pozitivitás meghatározására Antigén specifikus vizsgálatok: A screening teszt eredménye és a klinikai kép alapján antigén specifikus ELISA, Western blot, vagy radiális immundiffúzió módszerével.  Cryoglobulinok kimutatása. Autoantitestek kimutatására használt főbb módszerek SLE-ben

18 Direkt immunhisztokémia Immunkomplexek kimutatás veseszövetben A fenti szövet EM képe Immunfluoreszcens festés komplement ellenes ellenanyaggal. Az immunkomplexek a dermális – epidermális határnál rakódnak le.

19 Immunhisztokémia a beteg bőrszövetén Immunkomplexek lerakódása SLE beteg bőrében ( betegek 30-40%-a)

20 Homogén magfestődés Pl.Anti- dsDNA vagy anti-hiszton Pl:SLE Indirekt immunfluoreszcencia szerepe a diagnózisban (Hep2 sejtekben) Foltos magfestődés Anti- RNP(ribonukleoprotein) pl. SLE, Sjögren, vagy normál is! Perifériás „Rimmed „ magfestődés Pl.anti-hiszton Pl. SLE Nukleoláris magfestődés Pl. anti-Topoizomeráz I Pl. Scleroderma

21 Az autoantitestek prognosztikus ereje SLE-ben 1. Bizonyos antinukleáris és anti-Ro (SSA) antitestek akár 10 évvel az első tünetek előtt. 2. Anti-natív vagy dsDNA antitestek: átlag 2,5 évvel a tünetek előtt, a betegek 55%-ában. 3. Anti-ribonukleoprotein és anti-Smith (röviden anti-Sm): néhány hónappal a tünetek előtt. 4. Anti-kromatin at: Hasznosabb, mint az anti-DNS pl. veseérintettség predikciójában. Prognosztikus: kórfolyamat lefolyásának előrejelzésére

22 Cryoglobulinemia 1. Keringő immunoglobulin, mely 37 fok alatti hömérsékleten precipitálódik, felmelegítve ismét feloldódik 2. Autoimmunbetegségeken kívül malignus haematológiai betegségekben (Pl. myeloma multiplex) illetve fertözésekben (pl. hepatitis C) is jelen lehet. Alcsoportjai: I.monoclonalis IgG, II.polyclonalis IgG és monoclonalis IgM, III.polyclonalis IgM rheumafaktor 3. Meghatározás régen: 37 °C-on serumot szeparáljuk, majd 4 °C 2–7 napig tartjuk, ha precipitátum képzödik, 4 °C-on centrifugáljuk, a felülúszót eltávolítjuk és fiziológiás só oldattal pótoljuk. Ha 37 °C-on a precipitátum feloldódik, cryoglobulin volt Ma: immunelektroforézis vagy immunfixáció, mellyel a cryoglobulin alosztályát is meg lehet határozni

23 Rheumatoid arthritis Felnőtt lakosság körében 1:100 prevalencia Az izület destrukciójával járó autoimmun betegség Szinoviális membrán gyulladása Autoantitestek: ANA, anti- ciklikus citrullinált peptid, rheumatoid faktor (RF)

24 (Nincs citrullin tRNS,) Polipeptidekben az arginin alakulhat citrullinná poszttranszlációsan; peptidilarginin deimináz (PAD) enzimek segítségével Citrullinálódhat pl: fibrin, vimentin, enoláz stb. Citrullináció

25 Anti-ciklikus citrullinált peptid (anti-CCP) Az anti-CCP kimutatása különösen korai RA-ban hasznos: Diagnosztikus és prognosztikus faktor A betegség során szintje többnyire nem változik Nem korrelál a betegség aktivitásával

26 Rheumatoid faktor (RF) RA: ~a betegek 80%-a szeropozitív RF: ha magasabb az értéke, destruktívabb kórlefolyást valószínűsít Kimutatása: nefelometria vagy latex agglutinációs teszt IgM RF

27 A latex agglutinációs teszt elve Latex gyöngy + antigén beteg mintájából Agglutináció

28 BEMUTATÁS: RF (Reumatoid faktor) Humatex latex agglutinációs teszt

29 Anti-CCP és RF a klinikai tünetek előtt

30 Anti CCP és IgM-RF szenzitivitása és specificitása Anti-cyclic citrullinated peptide (anti-CCP) Immunoglobulin M rheumatoid factor (IgM-RF) Szenzitivitás % (95% CI)67 (62–72) 69 (65–73) Specificitás % (95% CI)95 (94–97) 85 (82–88) metaanalízis, 37 közlemény anti-CCP és 50 közlemény RF

31 Sjögren szindróma Szemszárazság Szájszárazság  caries, ínygyulladás

32 Sjögren tünetei Szemszárzság és következményei (pl. keratoconjunctivitis sicca) Szájszárazság és következményei: xerostomia gingivitis caries repedezett ajkak torok irritáció szájpenész nehézkes beszéd és nyelés (A) Tongue with atrophic papillae and dry and deeply fissured epithelium that replaces functional glandular epithelium; cheilitis is evident bilaterally. A possible cause of these manifestations might be xerostomia, either alone or in combination with fungal infection. (B) Missing teeth and multiple caries

33 Genetikai hajlam + EBV fertőzés és autoantitest termelő B-sejt aktiváció Sjögren diagnózisa és oka Diagnozis könnymennyiség mérése nyálmirigy biopszia Jellemző ANA mintázat: anti-Ro (SS-A) vagy anti-La (SS-B) a vérben (SSA/Ro számos autoimmun betegségre jellemző, de legyakrabb az SS) Feltételezett oka: Genetikai hajlam +EBF feretőzés és autoimmun termelő B-sejt proliferáció

34 Szervspecifikus autoimmun betegségek Graves-Basedow- kór: TSH receptor elleni AT Myasthenia gravis: ACh receptor, MuSK, ryanodin receptor, titin AT Pemphigus: desmoglein elleni AT

35 Autoimmun thyroiditis: Pajzsmirigy elleni AAT (thyreoglobulin, TPO) Coeliakia: szöveti transzglutamináz (tTG), gliadin, endomysium, desmin, simaizom ellenes antitestek Diabetes mellitus: glutamic acid decarboxylase (GAD), tirozin-foszfatáz (IA2) ellenes antitestek Primer biliaris cirrhosis: anti-mitochondriális AAT (pyruvate dehydrogenase complex) Myasthenia gravis: anti-acetilkolin receptor AAT, anti-muscle specific kinase (MuSK) AAT, anti-ryanodin receptor AAT, anti-titin AAT Goodpasture szindróma: glomerulus basalis membrán (GBM) elleni AAT Szervspecifikus autoantitestek (AAT)

36 Radio-receptor immunoassay (RRA) Pl. anti-AChR AAT, anti-MuSK AATv. anti-TSHR AATkimutatása (pmol vagy annál kevesebb)

37 Labor: anti-dsDNS AT: emelkedett RF: emelkedett anti-kardiolipin AT emelkedett 27 éves nő keresi fel a nőgyógyászati szakrendelést: graviditás 4. hónap, spontán abortusz ízületei fájnak, szájában fekélyek alakultak ki mindkét oldalon lábszárközépig ujjbenyomatot tartó ödéma arcon pillangóalakú bőrpír Eset 2. Diagnózis?

38 Eset éves nő keresi fel a reumatológiai ambulanciát: fő panasza: kezek, lábak, vállak hónapok óta tartó fájdalma MCP, PIP sor és MTP ízületek érzékenyek, duzzadtak Labor: We:110; CRP:40; anti-CCP:1200; RF:580 Kéz és láb RTG: foltos osteoporosis, erosiók Diagnózis?

39 Eset 4.

40 Néhány autoimmun betegségek kivizsgálásának menete Feltételezett autoimmun betegség klinikai tünetek alapján SLE szerű tünetek pl.: „pillangószerű” arcpír Pleuritis Nephritis Izületi fájdalmak Szív panaszok Neurológiai tünetek Antinukleáris antitest (ANA) Anti-dsDNS, anti-Smith antitest, kromatin ellenes antitest, anti-C1q antitest + SLE Estére fokozódó izomgyengeség, kettőslátás, nyelészavar Acetil-kolin receptor ellenes antitest + Myasthenia gravis Szemszárazság. szájszárazság Anti-SSA illetve anti-SSB ellenes antitest + Sjögren szindróma Reggel tapasztalt izületi merevség, fájdalom, duzzanat, mozgáskorlátozottság Emelkedett süllyedés, C- reaktiv protein, ANA, RF pozitivitás, anti- ciklikus citrullinált peptid (CCP) ellenes antitest+ Rheumatoid arthritis

41 Az informatika néhány immunológiai alkalmazása (ÁOK)

42 tes/entrez Immunológiai irodalmi források

43

44 Általános szakirodalom

45

46 our.htm our.htm Immunológia folyóiratok

47 Adatbázisok html

48

49

50

51 Kereskedelmi antitest források

52

53 Immune Epitope Database

54

55 Immunológiai Internet források link.htm link.htm

56

57

58 peptide.html peptide.html Szintetikus peptidek kereskedelmi forrásai (T sejt epitóp mapping)

59 ge.php?page=bcellmapping ge.php?page=bcellmapping B sejt epitóp predikció

60

61 Immunrendszer működésének szimulációja hysiogames/conflictimmunity.html hysiogames/conflictimmunity.html

Pl. Der p 1 peanut Allergén adatbázisok

63 Magyar források