Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Újdonságok és aktualitások a laboratóriumi vizsgálatok terén Nagy Attila laboratóriumvezető Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "Újdonságok és aktualitások a laboratóriumi vizsgálatok terén Nagy Attila laboratóriumvezető Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft."— Előadás másolata:

1 Újdonságok és aktualitások a laboratóriumi vizsgálatok terén Nagy Attila laboratóriumvezető Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft.

2 1. Mikrobiológiai vizsgálatok 2. Fitáz vizsgálatok 3. Aflatoxin vizsgálatok Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.1 TARTALOMJEGYZÉK

3 PCR alapú mikrobiológiai gyorsvizsgálatok a legújabb, 2012-ben kifejlesztett készülék és technológia PCR technológia: a sejt DNS-ét sokszorosítjuk és mérjük A jelenleg elérhető vizsgálatok: Salmonella spp, E. coli O157, Listeria spp. (L. monocytogenes, L. seeligeri, L. innocua, L. grayi, L. welshimeri) Listeria monocytogenes 2013 novembertől Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.2 MIKROBIOLÓGIAI VIZSGÁLATOK (PCR)

4 PCR vizsgálat előnyei gyorsaság, jó ár/érték arány pontosság, robosztusság Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.3 MIKROBIOLÓGIAI VIZSGÁLATOK (PCR) HagyományosPCRHagyományosPCR Vizsgálati idő Vizsgálati költség Salmonella3 v. 5 nap1,1 nap3 000 Ft4 000 Ft E. coli2 nap1,1 nap2 000 Ft5 000 Ft Listeria7 v. 11 nap1,1 nap Ft*5 000 Ft

5 Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.4 MIKROBIOLÓGIAI VIZSGÁLATOK (PCR)

6 Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.5 MIKROBIOLÓGIAI VIZSGÁLATOK (PCR) A módszer elvi működése 1.DNS sokszorosítás és pirofoszfát képzés 2.Pirofosztát átlakítása ATP-vé 3.ATP bontás luciferáz enzimmel, fény generálás 4.Mérés

7 Pontos, specifikus A fajspecifikus és a patogenitásért felelős DNS szakaszok sokszorozódnak A módszer robosztus (kevésbé érzékeny az inhibitorokra és az interferenciákra) Érzékeny módszer: egy sejtet ill. annak DNS-ét is képes kimutatni Validált módszer (AOAC) Gyors, költséghatékony Gyors DNS sokszorozódás Gyors mérés Egyszerű, üzembiztos készülék és berendezések Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.6 MIKROBIOLÓGIAI VIZSGÁLATOK (PCR)

8 Összemérési tapasztalatok Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.7 MIKROBIOLÓGIAI VIZSGÁLATOK (PCR) MintaeredménymintaszámhagyományosPCR Bélsár mintapozitív999 Bélsár mintanegatív555 Környezethigiéniai vizsgálatpozitív111 Környezethigiéniai vizsgálatnegatív11 Fűszerezett, nyers baromfihúspozitív222 Fűszerezett, nyers baromfihúsnegatív000 Húspéppozitív111 Összesen29

9 Vizsgálati tapasztalatok Salmonella 400 vizsgálat Listeria 150 vizsgálat A partnerek elismerik a módszer előnyeit: Gyorsaság Költséghatékonyság Pontosság Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.8 MIKROBIOLÓGIAI VIZSGÁLATOK (PCR)

10 A Rapid vizsgálatok előnyei gyorsaság, jó ár/érték arány pontos, robosztus, validált (AFNOR) módszerek Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.9 MIKROBIOLÓGIAI VIZSGÁLATOK (RAPID) HagyományosRapidHagyományosRapid Vizsgálati idő Vizsgálati költség Listeria7 v. 11 nap3 v 4 nap Ft*4 000 Ft S. aureus3 nap1 nap Ft*2 000 Ft

11 Tempo készülék beszerzése Rapid mennyiségi meghatározás a következő mikrobákra: Clostridium perfringens, Aerob mezofil összes élő csíraszám, Enterobaktériumszám, E.coli-Coliform szám, Penész szám) Víz mintavétele és mikrobiológiai vizsgálata Membránszűréses technológia Pseudomonas aeruginosa, E.coli, Coliform, Enterococcus szám, Aerob mezofil összes élő csíraszám, Clostridium Az új módszerek akkreditálása Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.10 MIKROBIOLÓGIAI VIZSGÁLATOK (2014: A KÖVETKEZŐ LÉPÉSEK)

12 A fitáz enzim vizsgálatának oka A Kaposvári Egyetemmel közös project keretében vizsgáljuk az enzim hatásosságát, működését A takarmány-alapanyagok természetes foszfor-tartalmának nagy része (az inozithez) kötött formában van jelen (ez a fitin), így általában nehezen felvehető az állatok számára A fitáz enzim bontja a fitint, így felszabadítja ezt a foszfort, ezzel elősegíti a takarmány-alapanyagokban lévő természetes foszfor jobb hasznosulását Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.11 FITÁZ VIZSGÁLATOK

13 A fitinsavas kötéseket a madarak és az emlősök saját enzimjeikkel nem tudják bontani. A fitin-kötésű foszfor és egyéb ásványi anyagok emészthetősége meglehetősen alacsony. A fitinsav bizonyos fehérjékkel is komplexet tud képezni, ami kihat az emésztőenzimek aktivitására és a táplálóanyagok emészthetőségére. Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.12 FITÁZ VIZSGÁLATOK

14 A fitáz enzim alkalmazásának céljai Gazdasági szerep A takarmányokban lévő foszfortartalom jobb hasznosítása, így a gazdaságosság növelése, a takarmány-értékesülés javítása A fitáz enzim alkalmazásával a hasznosulás mértéke elérheti a 44–46%-ot. Környezetvédelmi szerep: A fitáz enzim alkalmazása révén a trágyával ürített foszfor mennyiségének %-kal való csökkentése is megvalósulhat Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.13 FITÁZ VIZSGÁLATOK

15 Honnan származik a fitáz A növényi magvak is tartalmaznak bizonyos mennyiségű fitáz enzimet, de (a búzát, a tritikálét és bizonyos mértékben az árpát leszámítva) annak mennyisége elhanyagolható. A növényi eredetű fitáz a takarmány emésztése során nem tud hatékonyan érvényesülni, mivel aktivitásának optimuma pH 5,5 Az iparilag felhasznált fitázt többnyire gombákból (Aspergillus niger, Peniphora lycii) állítják elő fermentációs úton A gomba eredetű fitáznak a pH 5,5-en kívül van egy alacsonyabb aktivitási optimuma is, és ezért hatása érvényesülhet a begyben, a mirigyes- és a zúzógyomorban is Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.14 FITÁZ VIZSGÁLATOK

16 Hogyan vizsgáltuk a fitázt Szabványos módszer: MSZ EN ISO 30024:2010, Először meghatároztuk az alkalmazott fitáz enzim aktivitását pH 1,5-8,5 tartományban. Az enzim aktivitás vizsgálata során az alábbi definíciót használtuk: Fitáz egység (FTU): 1 FTU az az enzimmennyiség, ami pH 5,5- ön és 37°C-on a Na-fitát szubsztrátumból 1 μmol szervetlen Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.15 FITÁZ VIZSGÁLATOK

17 A fitáz aktivitásának pH-függése Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.16 FITÁZ VIZSGÁLATOK

18 A fitáz aktivitásának pH-függése (irodalmi adat) Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.17 FITÁZ VIZSGÁLATOK

19 A fitáz enzim hatása kukoricában Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.18 FITÁZ VIZSGÁLATOK

20 A fitáz enzim hatása szójában Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.19 FITÁZ VIZSGÁLATOK

21 A fitáz enzim által felszabadított foszfor mennyisége és részaránya Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.20 FITÁZ VIZSGÁLATOK Teljes foszfor- tartalom Fitinsav eredetű foszfor Fitinsav eredetű foszfor aránya Felsza- badult foszfor (3 óra) Felsza- badult foszfor (3 óra) kukorica2,84 g/kg1,47 g/kg52 %1,3 g/kg88 % szója7,09 g/kg2,85 g/kg40 %2,0 g/kg70 %

22 1999 óta vizsgálunk aflatoxinokat HPLC-FLD módszerrel a takarmány- és élelmiszeripar részére, az aflatoxinok (B1, B2, G1, G2) mérése a kezdetek óta akkreditált Jelenleg HPLC-FLD és ELISA módszerrel vizsgálunk aflatoxinokat 2012-ben akkreditáltattuk az aflatoxin M1 módszert Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.21 AFLATOXIN VIZSGÁLATOK

23 Az aflatoxinokat az Aspergillus flavus termeli Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.22 AFLATOXIN VIZSGÁLATOK

24 1959-ben Angliában 100 ezer pulyka hullott el A takarmány alapanyagként használt földimogyoró dara vékonyréteg kromatográfiás vizsgálatánál négy jól elkülönülő foltot kaptak B1, B2, G1, G2 megkülönböztetéssel (Fluoreszcencia színük alapján: B-blue, G-green) A toxikus darából egy fonalas gombát izoláltak, amely táptalajra oltva is termelte a toxikus anyagokat A gombát Aspergillus flavusként azonosították, a toxikus anyagoknak az aflatoxin nevet adták, a megbetegedést aflatoxikózisnak Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.23 AFLATOXIN VIZSGÁLATOK

25 Horvátország: aflatoxin termelők azonosítása kukoricáról (2004, 2005) Észak-Olaszország, 2003: Aflatoxint termelő Aspergillus flavus és EU határérték feletti aflatoxin kontamináció detektálása kukoricán Szlovénia, Szerbia: EU limit feletti aflatoxin M1 szint tejben( 2007, 2009) Románia: 1997: minden vizsgált kukoricaminta aflatoxin-mentes volt : a vizsgált tételek 30%-ában delektáltak aflatoxinokat, 20%-ban a határérték felett Bulgária, Ukrajna (2010) Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.24 AFLATOXIN VIZSGÁLATOK

26 Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.25 AFLATOXIN VIZSGÁLATOK

27 Szűrővizsgálat: tesztcsík, fluorimetria, ELISA Megerősítő vizsgálat: HPLC, LC-MS/MS Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.26 AFLATOXIN VIZSGÁLATOK

28 ELISA gyors, olcsó szűrővizsgálat sok minta dolgozható fel vele a módszer kevésbé pontos határérték kb. feléig alkalmazható egyszerűen kivitelezhető HPLC drágább vizsgálat megerősítő vizsgálat, döntő módszer lassabban kivitelezhető komoly szakértelmet igényel Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.27 AFLATOXIN VIZSGÁLATOK

29 Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.28 AFLATOXIN VIZSGÁLATOK

30 Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.29 AFLATOXIN VIZSGÁLATOK


Letölteni ppt "Újdonságok és aktualitások a laboratóriumi vizsgálatok terén Nagy Attila laboratóriumvezető Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft."

Hasonló előadás


Google Hirdetések