Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Durvafelszínű- Endoplazmatikus Retikulum dER Proteinek szintézise és válogatása Dr. habil. KŐHIDAI László egyetemi docens Semmelweis Egyetem, Genetikai,

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "Durvafelszínű- Endoplazmatikus Retikulum dER Proteinek szintézise és válogatása Dr. habil. KŐHIDAI László egyetemi docens Semmelweis Egyetem, Genetikai,"— Előadás másolata:

1 durvafelszínű- Endoplazmatikus Retikulum dER Proteinek szintézise és válogatása Dr. habil. KŐHIDAI László egyetemi docens Semmelweis Egyetem, Genetikai, Sejt- és Immunbiológiai Intézet október 2.

2 Endoplamatikus = sejten belüli; retikulum = hálózat kiterjedt membrán-rendszer kiterjedt membrán-rendszer a sejt membránjának kb. 50%-át teszi ki a sejt membránjának kb. 50%-át teszi ki csöves + lemezes = ciszternák csöves + lemezes = ciszternák a sejtmagmembrán külső lemezének folytatása a sejtmagmembrán külső lemezének folytatása két típus: durva felszínű ER (riboszómák) két típus: durva felszínű ER (riboszómák) sima felszínű ER

3 rER rER

4 s-ER (sima felszínű ER) szerkezet: csöves funkció: szintézis: phospholipidek, cholesterin, szintézis: phospholipidek, cholesterin, ceramid ceramid szintézis: szteroidok szintézis: szteroidok Ca 2+ tárolása és szabályozás Ca 2+ tárolása és szabályozás méregtelenítés – cyt P450 méregtelenítés – cyt P450

5 A dER felszínéhez kapcsolódó riboszómák pancreas exocrin sejtjében (TEM) Palade, G.E. 1974

6 mRNS peptid poliriboszóma

7 Riboszóma – mRNS – Poliriboszóma

8 A riboszóma molekuláris felépítése 60S rRNS + peptidek rRNS

9 Riboszóma alegységek (prokaryota)

10 Prokaryota és eukaryota riboszómák összehasonlítása (1)

11 Prokaryota és eukaryota riboszómák összehasonlítása (2)

12 A riboszóma valódi szerkezete ?

13 t-RNSaminosavaktiválóenzim riboszóma antikodon kodon

14 A tRNS identitását meghatározó elemek

15

16 Iniciáció

17 Elongáció

18

19

20 Khorana, H.G. Nirenberg, M.W. 1968

21

22 A peptid kötés kialakítása peptidyl transferase peptide bond

23 Termináció

24

25

26

27 Peptidek internalizálódása a dER-be

28

29 Szekréciós proteinek szintézise a dER-en

30 Az SFR (SRP) szerkezete általános általános 300 bázisnyi RNS 300 bázisnyi RNS 6 protein 6 protein P54 - szignál peptid P54 - szignál peptid P9, P14 – riboszóma P9, P14 – riboszóma kötés kötés P68, P72 – peptid P68, P72 – peptid mozgatása mozgatása

31 Szekréciós proteinek szintézise a dER-en

32

33 A transzlocon-csatorna elektron mikroszkópos képe

34 Riboszóma-translocon-ER membrán kapcsolódása

35 Translocon komplex TRAM – (= translocating chain-associated TRAM – (= translocating chain-associated membrane protein) köti a szignál szekvenciát Sec61p – a translocon csatorna fő összetevője; Sec61p – a translocon csatorna fő összetevője; a gyűrű-alakú struktúra felépítője a gyűrű-alakú struktúra felépítője Sec 61  és Sec 61  kötődik a Sec 61p-hez Sec 61  és Sec 61  kötődik a Sec 61p-hez és így alakul ki a Sec 61 komplex A Sec 61 komplex kötődik a riboszómához, A Sec 61 komplex kötődik a riboszómához, részt vesz a transzmembrane transzferben

36 A GDP/GTP ciklus és a GTP hidrolízise – A szerkretorikus protein kapcsolódása a transloconhoz

37 A dER-en szintetizálódó, integrans membránproteinek elhelyezkedése a membránban

38

39

40 Az inzulin receptor szintézise és inzerciója az ER membránba N-terminus az ER lumen felé C-terminus a citoszól felé C-terminus a citoszól felé A szignál szekvencia levágódik A szignál szekvencia levágódik Stop-transzfer membrán-kihorgonyzó Stop-transzfer membrán-kihorgonyzó szignál szignál

41 Asialoglikoprotein receptor szntézise és inzerciója az ER membránba C-terminus ER lumen felé C-terminus ER lumen felé N-terminus a citoszól felé N-terminus a citoszól felé Nincs N-terminális ER szignál szekvencia Nincs N-terminális ER szignál szekvencia az el nem távolított integral szignál az el nem távolított integral szignál membrán kihorgonyzóként működik membrán kihorgonyzóként működik

42 A több transzmembrán, a-helikális szegmenttel rendelkező proteinek szintézise és inzerciója - El nem távolított szignál membrán kihorgonyzóként működik - Stop-transzfer membránkihorgonyzó szekvenciák -El nem távolított szignál membrán kihorgonyzóként működik stb. stb.

43 Poszt-transzlációs modifikációk Proteolítikus bontás Proteolítikus bontás Glikoziláció Glikoziláció Aciláció Aciláció Metiláció Metiláció Foszforiláció Foszforiláció Szulfatálás Szulfatálás Preniláció Preniláció C-vitamin függő modifikációk C-vitamin függő modifikációk K-vitamin függő modifikációk K-vitamin függő modifikációk Szelenoproteinek Szelenoproteinek

44

45

46 Proteolítikus bontás Szignál peptid eltávolítása Szignál peptid eltávolítása preproproteinek preproproteinekpreproteinek Szignál peptidáz Szignál peptidáz

47 A célbajuttató szignálszekvenciák jellemzői Cél organellum Jellegzetes hely a proteinen Szignál eltávolítás A szignál jellege dERN-terminal főként hidrofób aminosav, gyakran egy vagy több bázikus aminosav követi MitochondriumN-terminal+ 3-5 nem egymásutánni Arg vagy Lys reziduum, gyakran Ser és Thr; sohasem Glu vagy Asp SzíntestN-terminal+ Nincs általános motívuma, gyakran gazdag Ser,Thr- ban, kevés Glu és Asp PeroxisomaC-terminal-Ser-Lys-Leu NucleusInternal- 5 bázisos aminosav clustere vagy két rövidebb cluster melyet 10 aminosav választ el 5 bázisos aminosav clustere vagy két rövidebb cluster melyet 10 aminosav választ el

48 Glikoproteinek Jellegzetes cukrok: glukóz, galaktóz, mannóz, fukóz, GalNAc, GlcNAc, NANA GalNAc, GlcNAc, NANA O-glikozidos kötés – Ser, Thr hidroxil csoportjai, hidr-Lys N-glickozidos kötés – konszenzus szekvencia N-X-S(T) (DE nem P) Major N-kötött csoportok: magas mannóz tartalmú típus, hibrid típus, komplex típus (szialsav)

49 GlikozilációdER N-kötődés a GlcNAc-hoz dER O-kötődés a GalNAc-hoz

50 O-kötött cukrok: Cukrok kötve - UDP, GDP (mannose), CMP (NANA) glycosprotein glycosylttransferase N-kötött cukrok: Egy lipid összekötőt (dolichol phosphate) feltételez

51 N-Glikoziláció

52

53 Glikozilfoszfatidil inozitol (GPI) – által kihorgonyzott peptidek A GPI-kihorgonyzott peptidek a felszíni membrán külső oldalára kerülnek

54 Protein hajtogatódás (folding): Protein Disulphide Isomerase (PDI) A nem megfelelően A nem megfelelően kialakított diszulfid kialakított diszulfid kötések felbontása kötések felbontása Segít elérni a Segít elérni a legstabilabb szerkezetet legstabilabb szerkezetet

55 Protein folding: Bip Bip = binding protein = Hsc70 Bip = binding protein = Hsc70 a Hsp-70 család tagja (chaperonok) a Hsp-70 család tagja (chaperonok) az ER lumenében található az ER lumenében található reverzibilisen kötődik a transloconhoz reverzibilisen kötődik a transloconhoz Szerepe: Szerepe: - elősegíti a helyes szerkezet kialakulását a naszcens peptidben a naszcens peptidben (Bip-ATP Bip-ADP) (Bip-ATP Bip-ADP) - szükséges a translocon-on való átjutáshoz - megelőzi a prteinek aggregálódását és a helytelen hajtogatódást helytelen hajtogatódást - segít lezárni a translocon pórusát

56 Protein folding: Peptidyl-prolyl isomerase: a peptidyl-prolyl kötések körüli elfordulást segíti elő segíti elő Oligosaccharide protein transferase: szénhidrát láncokat juttat az új peptidre amint azok belépnek az ER lumenébe Calnexin, calreticulin: a glikoproteinek CHO csoportjaival lép kapcsolatba

57 Protein szignálok: Az ER és a Golgi integráns, szolubilis proteinjeinek Az ER és a Golgi integráns, szolubilis proteinjeinek helyben tartását a KDEL-receptorok segítik elő. helyben tartását a KDEL-receptorok segítik elő. Ezek felismerik a KDEL szignált Ezek felismerik a KDEL szignált (Lys-Asp-Glu-Leu - C-terminus). (Lys-Asp-Glu-Leu - C-terminus). ER membrán proteinek - KKXX (dilysin motívum) ER membrán proteinek - KKXX (dilysin motívum) a C-terminuson. a C-terminuson. Egyéb ER membrán proteineken di-arginin Egyéb ER membrán proteineken di-arginin motívum van az N-terminuson. motívum van az N-terminuson.

58 Chase-pulse technika

59 Antibiotikumok A protein szintézis különböző lépéseit gátolják Actinomycin D- transzkripció (komplex DNS-sel) Actinomycin D- transzkripció (komplex DNS-sel) Rifamycin- transzkripció (RNS polymerase) Rifamycin- transzkripció (RNS polymerase) Amanitin- transzkripció (RNS polymerase II) Amanitin- transzkripció (RNS polymerase II) Streptomycin- iniciáció Streptomycin- iniciáció Tetracycline- aminoacyl-tRNS - A lókusz Tetracycline- aminoacyl-tRNS - A lókusz Erythromycin- tRNA transzlokációja az A-ról a P lókuszra Erythromycin- tRNA transzlokációja az A-ról a P lókuszra Cycloheximide- “ (csak eukaryotákban) Cycloheximide- “ (csak eukaryotákban) Chloramphenicol- peptid kötés Chloramphenicol- peptid kötés Puromycin- termináció Puromycin- termináció Penicillins és Cephalosporinok - a bakt. sejtfal szintézise (proteoglycan-ok) (proteoglycan-ok)

60 actinomycinrifamycinamanitin streptomycin A tetracyclin chloramphenicol A P erythromycin, cycloheximide A puromycin

61


Letölteni ppt "Durvafelszínű- Endoplazmatikus Retikulum dER Proteinek szintézise és válogatása Dr. habil. KŐHIDAI László egyetemi docens Semmelweis Egyetem, Genetikai,"

Hasonló előadás


Google Hirdetések