Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

BAKTÉRIUMOK TENYÉSZTÉSE. A növekedést befolyásoló tényezők Tápanyagok –Szénforrás (CH, AS szénlánca), nitrogénforrás (pepton, ammónia) !! –növekedési.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "BAKTÉRIUMOK TENYÉSZTÉSE. A növekedést befolyásoló tényezők Tápanyagok –Szénforrás (CH, AS szénlánca), nitrogénforrás (pepton, ammónia) !! –növekedési."— Előadás másolata:

1 BAKTÉRIUMOK TENYÉSZTÉSE

2 A növekedést befolyásoló tényezők Tápanyagok –Szénforrás (CH, AS szénlánca), nitrogénforrás (pepton, ammónia) !! –növekedési faktorok, vitaminok, nyomelemek Hőmérséklet –pszichrofil ( 50 Thermus aquaticus) pH –acidofil (Lactobacillus) – alkalofil (Vibrio cholerae), legtöbb 7,2-7,6

3 Oxigénigény Obligát aerob (csak O 2 jelenlétében M. tuberculosis) / fakultatív anaerob / obligát anaerob (Clostridiumok, toxikus az O 2, ) CO 2 atmoszféra mértéke –légköri = 0.03% –Mikroaerofil (alacsony O 2, magas CO 2, C. jejuni ), aerotoleráns (0 2 jelenlétében is fermentál S.pyogenes) Toxikus oxigénformák közömbösítésének képessége: Szuperoxid diszmutáz (2 O2- O H+ H+  H2O2 H2O2 + O2)O2) Kataláz (2 H2O2 H2O2  2 H 2 O + O2)O2)

4 Táplálkozási típusok - I Autotróf –szervetlenből szervest építenek fel –ehhez energiaforrás: fény (fotoautotrófok) oxidáció (kemoautotrófok) pl. szulfid  szulfát, nitrit  nitrát –kórtani jelentőségük nincs

5 Táplálkozási típusok - II Heterotróf –szerves tápanyagot igényelnek –C-forrás: glükóz, tejsav, keményítő, … –N-forrás: aminosavak, … –majdnem az összes patogén ide tartozik Paratróf –csak élő sejtekben tudnak szaporodni –pl. lepra kórokozója (egértalpban), rickettsiák

6 Energianyerés típusai Légzés (aerobok!) –van kataláz és szuperoxid-diszmutáz enzim –szénhidrát anyagcsere: glükóz  piroszőlősav  citrátkör  légzési lánc  sok ATP + CO 2 + H 2 O –terminális elektron-akceptor = O 2 Fermentáció (anaerobok!) –nincs enzim a káros oxidációs termékek semlegesítésére glükóz  etanol + tejsav  kevés ATP + CO 2 + H 2

7 Baktériumok növekedési görbéje Idő Log sejtszám IV III II I I. Lag fázis (adaptáció) II. Log fázis (exponenciális növekedés) III. Stacioner fázis (élő sejtszám változatlan) IV. Deklinációs fázis (hanyatlás, fogyás) Generációs idő 20/40 perc de M. tuberculosis 20h !!

8 Táptalajok - I Halmazállapot szerint –folyékony (húslé, buillon) –szilárd (lemez, magas, ferde agar, Koch találta ki) Petri csésze! Előállítás szerint –természetes (epe, tej, húslé,...) –mesterséges Funkció szerint –„normál” –szelektív (pl antibiotikummal gátlódik ami nem érdekel minket) –differenciáló ( biokém tul alapján elkülöníthetőek a hasonló baktériumok) –dúsító STERILITÁS !!!

9 Táptalajok - II Bouillon Ferde és magas agar Dúsítók: húsos és szérum bouillon

10 Táptalajok - III Egyszerű lemez agar Véres agar Csokoládé agar

11 Telepmorfológiai jellemzők telep nagysága telep fénye (tükröződő, opál, áttetsző) telep alak (ép szélű, csipkézett, köldökös, kerek, platószerű) telep állaga (sima, száraz, gumiszerű, elfolyós) telep színe (pigment termelés) hemolízis:  és  tenyészet szaga (hársfa, fokhagyma)

12 Hogy ezeket lássuk, IZOLÁLT TELEPEK-re van szükségünk: Telepmorfológiai jellemzők

13 Mintatenyészetek - I Escherichia coli agar táptalajon –semmi különös jellemző, átlagos telepek Klebsiella agar táptalajon –nagy poliszaccharid tok  nyálkás telepek

14 Mintatenyészetek - II Bacillus cereus agar táptalajon –erősen nyálkás, csipkézett szélű, felhő-szerű („medúzafő-szerű”) tenyészet, ritka az izolált telep

15 Mintatenyészetek - III Proteus mirabilis agar táptalajon –rajzás !

16 Mintatenyészetek - IV Intracelluláris pigmenttermelés Staphylococcus aureus –arany pigment Staphylococcus epidermidis –fehér pigment Serratia marcescens –vérvörös pigment

17 Mintatenyészetek - V Extracelluláris pigmenttermelés Pseudomonas auruginosa –többféle pigment, extracellulárisan  az egész táptalaj elszíneződik –a zöld pigment dominál táptalajon

18

19 Mintatenyészetek - VI - hemolízis  -hemolízis: –Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Bacillus cereus –teljes feltisztulás  -hemolízis: –Streptococcus pneumoniae, zöldítő streptococcusok –zöld terület a telepek körül Véres agaronCsokoládé agaron Csak véres agaron

20 Anaerob tenyésztés I - Fizikai módszerek O 2 kiforralása O 2 kiszívása (vákuum – anaerosztát) Szúrt tenyészet magas agaron (karácsonyfa)

21 Anaerob tenyésztés II - Kémiai módszerek 1. Redoxpotenciál csökkentése –Holman médium (apróra darált húsdarabkák) –tioglikolátos médium –indikátor jelzi az átlevegősödést –lezárás paraffin gyűrűvel

22 Anaerob tenyésztés II - Kémiai módszerek 2. Preis módszer –erősen O 2 -igényes reakció játszódik le a tenyésztési térben –GasPak: a tenyészetek behelyezése után a felszakított zacskókban levő reagensek reagálni tudnak egymással, elvonva az oxigént (CO 2 fejlesztés)

23 Anaerob tenyésztés III - Biológiai módszer Fortner eljárás –elavult!! –A két részre osztott Petri csésze egyik térfelén erősen aerob baktériumot (pl. Serratia) tenyésztünk, ami elvonja az összes oxigént

24 Hemokultúra - I Vér vagy más steril minta tenyésztésére Milyen esetben alkalmazzuk: –meningitis, endocarditis, bacteraemia, szisztémás fertőzés gyanúja, peritonitis, FUO (=ismeretlen eredetű láz), mesterséges lélegeztetés során kialakuló fertőzés, kórokozó váltás terápia alatt, implantáció utáni láz, … Inkubációs idő: 7-10 nap –de: 80-90%-ban már az első 24 óra alatt pozitív lesz!

25 Hemokultúra - II Fontos szabályok –Legalább két minta kell: kül. helyekről, kül. időben ! –Frissen szúrt vénából !! –legjobb a láz kezdetén –elegendő mennyiséget kell levenni (2-30 ml) Sterilitás!! Antibiotikum kezelés alatt: –ab-kötő gyöngyökkel Aerob / anaerob palackpár

26 Hemokultúra - III

27 Transzport médiumok - I Transzport közeg –példa: Stuart médium –a baktériumok maximum 48 óráig túlélnek, de nem szaporodnak –0,2%-os agar –Tárolás szobahőn! –anaerobok is túlélnek

28 Transzport médiumok - II Transzport táptalajok –A baktériumok szaporodnak is benne, mire a laborba érnek –Példák: Uriline, Uricult, Gonoline, stb. –Műanyag lemez két oldalán két vagy három különböző táptalaj (szelektívek is)

29 Biofilm - I Jelentősége –vízben élő mikroorganizmusok 99,9%-a biofilmként él a felszíneken –élő szervezetben: felületek kolonizációja (natív és beültetett) Kialakulása –előkészítő réteg (slime képzés): elektrolitok (Ca 2+, Mg 2+ ), fehérjék, stb. –baktériumok letapadása, konzorcium létrehozása –biofilm leszakadása (disszemináció) planktonikus

30 Biofilm - II Kimutatása –elektronmikroszkóppal –üvegcső falán, festéssel Antibiotikum rezisztencia nagyobb –penetráció gátolt –szaporodás lassúbb –géntranszfer sokkal intenzívebb (+leszakadáskor elviszik!)

31 Antibiotikum rezisztencia: biofilm versus planktonikus fázis BaktériumAntibiotikumMIC [mg/L] a planktonikus fázisban MIC [mg/L] a biofilmben Staph. aureusvancomycin220 Pseudomonas aeruginosa imipenem11024 E. coliampicillin2512 P. pseudomalleiceftazidim8800 Str. sanguisdoxycyclin Donlan, Clin Microbiol Rev. 2002; 15(2): 167–193.

32 Biofilm - III Kórképek biofilmmel: –natív szívbillentyű endocarditis (Streptococcus, S. aureus, Enterococcus, Candida, Aspergillus) –beültetett eszközök: érpálya kanülök (pl. centrális vénás, perifériás), húgyúti katéterek (Enterococcus, Gram -, Pseudomonas, Serratia, Citrobacter), műbillentyű, intrauterin eszközök, fogászati implantátumok (titánium), kontakt lencse, beültetett szemlencse, csípőprotézis, térdprotézis, … –krónikus bakteriális prostatitis –CF (cisztikus fibrózis): Pseudomonas aeruginosa, S. aureus, Burkholderia, H. influenzae (alginát képzés!) –periodontitis, fog plaque


Letölteni ppt "BAKTÉRIUMOK TENYÉSZTÉSE. A növekedést befolyásoló tényezők Tápanyagok –Szénforrás (CH, AS szénlánca), nitrogénforrás (pepton, ammónia) !! –növekedési."

Hasonló előadás


Google Hirdetések