1 Polimeráz-láncreakció termékeinek vizsgálata agaróz gélelektroforézissel.

Az előadások a következő témára: "1 Polimeráz-láncreakció termékeinek vizsgálata agaróz gélelektroforézissel."— Előadás másolata:

1 1 Polimeráz-láncreakció termékeinek vizsgálata agaróz gélelektroforézissel

2 2 1. A gélkamra előkészítése

3 3 1.1 Rakjunk 1 g agarózt és 33 ml TAE- Bufferhoz egy 100 ml-es Erlenmeyer lombikba! 1.2 Melegítsük az elegyet melegítőben, rázzuk meg, majd ismét melegítsük egy rövid ideig! 1.3Hagyjuk, hogy az agaróz oldat 55°C-ra hűljön, majd öntsük ki a gélt!

4 DNA-Fingerprint4

5 5 1.4A gél megszilárdulása után vegyük ki a fém rudakat az elektrofrézises kamrából! 1.5Töltsük 270 ml TAE-Buffer oldatot az elektrofrézises kamrába, hogy befedje a gélt! 1.6Húzzuk ki a fésűt! 1. A gélkamra előkészítése

6 6 2. Minták előkészítése a gélelektrofrézishez

7 7 2.1Vegyük ki a 6 darab PCR kémcsövet a melegítőböl. 2.2 Helyezzük a PCR kémcsöveket a 6 darab kijelölt kémcső adapterbe!

8 DNA-Fingerprint8

9 9 2.3Rakjunk pipettával 10 µl Orange G festéket (LD) mind a 6 darab PCR kémcsőbe, majd az ujjaink segítségével gyengén rázzuk össze, hogy ez által elkeveredjenek! 2. Minták előkészítése a gélelektrofrézishez

10 10 3. A gélben lévő rések kitöltése

11 11 3. A gélben lévő rések kitöltése 3.1 Töltsük ki a gélben lévő réseket balról- jobbra ezekkel: - 20 µl MWR (molekuláris súlyszabályozó) - 20 µl -GMO kontrol PMM-el (1) - 20 µl -GMO kontrol GMM-el (2) - 20 µl ételminta (T) PMM-el (3) - 20 µl ételminta (T) GMM-el (4) - 20 µl +GMO-DNS PMM-el (5) - 20 µl +GMO-DNS GMM-el (6)

12 12 4. Elektrofrézis folyamatának végbemenetele

13 13

14 14 4. Elektrofrézis folyamatának végbemenetele 4.1 Zárjuk be az elekrofrézises kamrát és inditsuk el a folyamatot 120 V feszültségen! 4.2 Állítsuk meg a gélelektrofrézist, mikor a Orange G színű szennyeződés 1 cm-re megközelíti a gél végét!

15 15 5. DNS összetevők láthatóvá tétele

16 16 5. DNS összetevők láthatóvá tétele 5.1 Nyissuk ki az elektrofrézises kamrát és vegyük ki a gélt! Vigyázzunk, hiszen a gél nagyon csúszós! (A TAE buffert később is fel tudjuk használni, így azt is tegyük el)! 5.2 Rakjuk a gélt egy festékes tálcára majd adjunk 70 ml festékes oldatot (50x) aztán 2 percen keresztül gyengén rázzuk!

17 17 5.3 2 perc után távolítsuk el a festékes oldatot! Majd szabaduljunk meg a maradék szennyeződéstől forró csapvíz (40-50°C) segítségével: 20 percen keresztül tisztítsuk! Mind eközben gyengén rázd! Rakjuk el a használt festéket a későbbi felhasználás érdekében! 5. DNS összetevők láthatóvá tétele

18 18 6. Kiértékelés

19 19 6. Kiértékelés 6.1 Azonosítsuk a DNS részeket a gélben a molekuláris súlyszabályozó segítségével! Vizsgáljuk meg ezeken az értékeken: 100 bp, 200 bp, 500 bp, 700 bp, 1000 bp!

20 20 6.2 Genetikailag módosítottak e az életmintánk? Beszélgessünk egy kicsit az eredményekről! 6. Kiértékelés