Buccalis kenet a connexin-26 gén 35delG mutációjának non-invazív szűrésére kisgyermekeken Torkos Attila 1,2, Magnus Teschner 2, Peter Erfurt 2, Gerrit.

Az előadások a következő témára: "Buccalis kenet a connexin-26 gén 35delG mutációjának non-invazív szűrésére kisgyermekeken Torkos Attila 1,2, Magnus Teschner 2, Peter Erfurt 2, Gerrit."— Előadás másolata:

1 Buccalis kenet a connexin-26 gén 35delG mutációjának non-invazív szűrésére kisgyermekeken Torkos Attila 1,2, Magnus Teschner 2, Peter Erfurt 2, Gerrit Paasche 2, Thomas Lenarz 2, Timo Stöver 2 1 Gyermekgyógyászati Klinika Fül-orr-gége osztály, Szegedi Tudományegyetem 2 Fül-Orr-Gégészeti és Fej-Nyaksebészeti Klinika, Hannoveri Orvostudományi Egyetem

2 Veleszületett süketség ~ 60 %-ban genetikai oka van. Szűrése a mai napig a vérből (leukocytákból) kivont DNS genetikai vizsgálatán alapult, de…

3 … milyen érzés ezt látni?

4 Szájnyálkahártya-kenet Megfelelő alternatíva?

5 Az eljárás alkalmazhatóságának bemutatása vérből és buccalis kenetből származó DNS kvantitatív és kvalitatív összehasonlításával

6 Beteganyag és módszerek 1. 60 cochleáris implantáció előtti kivizsgáláson megjelent hallássérült beteg (1-72 év, átlag: 15,8 év) 1. csoport: 3 év alattiak (29 beteg) 2. csoport: 3 év felettiek (31 beteg)

7 Beteganyag és módszerek 2. vérvétel (EDTÁ-s kémcsőbe) buccalis kenetvétel (éhgyomor!): steril vattás pálcával, melyet utána 400 µl PBS-be (foszfát-só puffer) helyezünk

8 Beteganyag és módszerek 3. genomiális DNS kivonása a vérmintákból és a nyálkahártya-kenetekből

9 Beteganyag és módszerek 4. kvantitatív DNS analízis UV fotometriával a vérből származó DNS mennyiségek statisztikai összehasonlítása az 1. és 2. csoport közt a nyálkahártyából származó DNS mennyiségek statisztikai összehasonlítása az 1. és 2. csoport közt

10 Beteganyag és módszerek 5. kvalitatív DNS analízis – a módszer alkalmazhatóságának bemutatása a connexin-26 gén 35delG mutációjának kimutatása révén: 1.a connexin-26 gén szelektív sokszorosítása polimeráz láncreakcióval végzett hely-specifikus mutagenezis révén 2.a kapott termék emésztése Bsi Y1 restrikciós endonukleázzal 3.agaróz gélelektroforézis 4.a vér- és nyálkahártya-leletek egymással való összevetése minden egyes betegnél

11 Eredmények 1. Kvantitatív DNS analízis Az 1. és 2. csoport egyazon forrásból izolált DNS koncentrációi közt nincs szignifikáns különbség, amely arra utal, hogy a források DNS tartalma nem korfüggő. A genetikai vizsgálathoz elegendő mennyiségű DNS vonható ki a buccalis kenetekből. 1. csoport2. csoportKétmintás T-próba DNS koncentráció vérből (átlag±s.e.) (µg/ml) 15,9 ± 1,814,6 ± 1,9p = 0,63 DNS koncentráció nyálkahártyából (átlag±s.e.) (µg/ml) 9,5 ± 1,48,6 ± 1,4p = 0,67

12 Eredmények 2. Kvalitatív DNS analízis Az egyes betegek vérmintájának és a buccalis kenetének a 35delG mutációra vonatkozó lelete minden esetben azonos volt. A genetikai vizsgálathoz megfelelő minőségű DNS vonható ki a buccalis kenetekből.

13 Következtetés A szájnyálkahártya-kenet megbízható DNS forrás genetikai vizsgálatok számára, mely elkerülhetővé teszi a vérvételt a kisgyermekek hallásgenetikai szűrésénél.

14