A PMP22 gén mutációs analízise

Az előadások a következő témára: "A PMP22 gén mutációs analízise"— Előadás másolata:

1 A PMP22 gén mutációs analízise
Szerzők: Reško Péter, Radvánszky János, Pálffy Roland, Témavezető: Doc. RNDr. Kádaši Lajos, PhD.

2 Öröklődő perifériás neuropátiák
Motorikus és szenzorikus zavarok Morfológiai elváltozások Előfordulásuk együttes gyakorisága 1:2500 Charcot-Marie-Tooth betegség 1A altípusa (CMT1A) nyomásos bénulásokra hajlamosító örökletes neuropátia (HNPP)

3 A betegségek tünetei CMT1A
a végtagok lassan előrehaladó elgyengülése és atrófiája Érzékelési zavarok a végtagokban csökkent inreflexek és lábfej deformitások (pes cavus, kalapácsujj) idegi impulzusok terjedési sebességének csökkenése axonok demyelinációja és remyelinációja során keletkező hipertrófiás Schwann sejtek, ún. „onion bulbs“

4 A betegségek tünetei HNPP
visszatérő, fájdalommentes idegi bénulások, melyek érzékelési károsodást, elgyengülést és atrófiát okoznak idegi impulzusok terjedési sebességének csökkenése axonok demyelinációja és remyelinációja során keletkező hurkaszerű képződmények, ún. „tomaculae“ esetenként pes cavus, csökkent inreflexek és a boka reflexeinek hiánya

5 Genetikai háttér perifériás myelin protein 22 (PMP22) CMT1A HNPP
PMP22 duplikációja (~70%) és különböző pontmutációk HNPP PMP22 deléciója (~85%) és olyan pontmutációk, melyek következtében a protein teljesen elveszíti a működőképességét

6 Genetikai háttér A 17-es kromoszómán található két repetíció (CMT1A-REP) közötti egyenlőtlen meiotikus crossing-over Végeredménye egy reciprok 1,5 Mb nagyságú duplikáció és deléció amely tartalmazza a PMP22 gént

7 Genetikai háttér

8 Genetikai háttér

9 Diagnosztika PMP22 génkópiáinak pontos kvantifikációja
Southern hibridizáció, kvantitatív PSL, FISH, PCR-en alapuló módszerek, MLPA rekombináció-specifikus DNS fragmensek azonosítása PFGE, PCR-en alapuló módszerek

10 Diagnostika Real-time PCR
Relatív kvantifikáció → komparatív CT módszer referens gén (humán szérum albumin – HSA) cél gén és referens gén azonos amplifikációs hatékonysága kalibrátor

11 Eredmények

12 a ∆∆Ct metódus átlagértéke az egyes csoportoknál
Eredmények deléciót hordozó páciensek egészséges egyedek duplikációt hordozó páciensek a ∆∆Ct metódus átlagértéke az egyes csoportoknál

13 Eredmények Az egyes diagnosztikai csoportok részére meghatározott ∆∆Ct eredmény intervallumok: deléció – 0,65 alatt; egészséges egyed – 0,75-1,25; duplikáció – 1,35 fölött Megbízható diagnózis az esetek 87,2%-ában Duplikáció azonosítása a CMT1A gyanús páciensek 38,5%-ánál

14 Köszönöm a figyelmet!