Bioaktív komponensek kimutatása növényi mintákból

Az előadások a következő témára: "Bioaktív komponensek kimutatása növényi mintákból"— Előadás másolata:

1 Bioaktív komponensek kimutatása növényi mintákból
Dr. Remenyik Judit PhD (Kertészettudományi és Növényi biotechnológia Tanszék Biokémiai és molekuláris diagnosztikai laboratórium)

2 Mérés menete Mintavétel Minta tárolás Minta előkészítés Mérés

3 Mintavétel Adott fajra, fajtára jellemző legyen Adott termőhelyre jellemző legyen Nagy számú/ nagy tömegű egyed gyűjtése Homogenizálás A minta tárolása A minta szállítása

4 A minta tárolása Minden esetben a mérendő komponenstől függ! +8 °C -20°C Liophilizálás - 70 °C

5 A minta előkészítése Homogenizálás Feltárás Kioldás Szűrés , tisztítás

6 Bioaktív komponensek Cukor tartalom- egyszerű cukrok (glükóz, fruktóz szacharóz ) Savtartalom (almasav, citromsav) Fehérje tartalom Rost tartalom (oldhatatlan, oldható) Szárazanyag Nitrát tartalom

7 Bioaktív komponensek Antioxidáns sűrűség meghatározás
Vízoldékony- és zsíroldékony antioxidánsok Vízoldékony antioxidánsok: C-vitamin Antioxidáns fehérjék (enzimek) Vízoldékony színanyagok (antocianinok, flavonoidok) B-vitaminok Galluszsav

8 Bioaktív komponensek 2. Zsíroldékony antioxidánsok Karotinoidok
Tokoferolok Szabad zsírsavak d. Izoprén származékok e. Klorofollok Polifenolok A-vitamin

9 Laboratoriumunkban vizsgált komponensek

10 Laboratoriumunkban vizsgált komponensek

11 Laboratoriumunkban vizsgált komponensek

12 Laboratoriumunkban vizsgált komponensek
α-tokoferol: R1,R2,R3=CH3 ß-tokoferol: R1,R3=CH3; R2=H γ-tokoferol: R2,R3=CH3; R1=H δ-tokoferol:R3=CH3; R1,R2=H

13 Antioxidáns kapacitás mérése kemiluminométerrel

14 A mérés elve 1.A fotoérzékeny vegyületet hν energiával besugározzuk.
S+ hv→ S.+ + O2.- A O2.- reagálnak a minta antioxidáns anyagaival. 2.A detektor vegyület lép ezután reakcióba a maradék O2.- . O2.- + D → hv 3. A kisugárzott energiát méri a detektor.

15 Minták adatanalízise (ACW)

16 Minták adatanalízise (ACL)

17 Spektrofotometria A fényintenzitás változását mérjük. Az UV-VIS tartományban az anyagok szelektíven adszorbeálják a fényt. A= ε*c*l A mérést minden estben az adszorpciós maximumon mérjük. Hibalehetőségek: Fényszóródás, oldószerpárolgás A ε nem helyes meghatározása .

18 Mérés 1. C-vitamin tartalom meghatározása
3.4. A C-vitamin (L-aszkorbinsav)

19 A mérés alapja Erősen redukáló hatású Fe3+ → Fe2+ Fe2+ színes komplexet képeznek az α,α, dipiridil reagenssel Fotometriás meghatározás Látszólagos C-vitamin tartalom Reduktonok Valódi C-vitamin tartalom

20 NAGYHATÉKONYSÁGÚ FOLYADÉKKROMATOGRÁFIA MŰSZER
oszlop: (kolonna)  felépítése: minta  töltet: szilikagél (módosított), adszorbens, ioncserélő, gél,… szűrő előkolonna:  hőfok: szobahőmérséklet (!) 25 °C mozgófázis: folyadék  oldószerek, oldószer-keverékek főkolonna HPLC-készülék felépítése: 4. oszlop detektor 1. eluens (mozgófázis) 2. pumpa 3. mintaadagoló (minta) 5. detektor 6. rekorder  nagy nyomás biztosításához pumpa:  „pulzálás-mentes” (több pumpa) mintabevitel:  fecskendő  szelepes megoldás detektor:  UV spektrofotometriás, fluoreszcencia, vezetőképességi, tömegspektrometriás,.. UV-detektor I. oszlopkromatográfia: 1. klasszikus, 2. GC, 3. HPLC, ionkr. II. rétegkromatográfia : papírkr vékonyrétegkr.

21 A kromatogram értékelése