Szükségünk lesz valamilyen spreadsheet / táblázat kezelő programra Pl. OpenOffice, MS Excel (A példa a MS Excel 2003 változatával készült) A bemutatott példa olyan adatsorokat használ amiben a sztenderd és az ismeretlen minta is sorozathígításon esett át. Mindkét adatsor teljes szigmoid görbét ad, és mindkettő egyenes szakaszára egyenes illeszthető. A két egyenes x (hígítás) tengelyen mért távolsága segítségével számoljuk ki a koncentráció különbséget, és ebből a sztenderd ismeretében kiszámolható az ismeretlené is. A bemutatott példa leegyszerűsíthető, ha az ismeretlenből kiválasztunk egy darab alkalmas pontot.

Számoljuk ki az ismeretlen minta anti-BSA tartalmát! A standard minta koncentrációja 100μg/ml.

Írjuk be a következőket: a hígítás logaritmusát,… a párhuzamos standardok átlagát,… és a párhuzamos minták átlagát kiszámoló képletet!

Kattintsunk a diagramm varázslóra Jelöljük ki a képleteket tartalmazó sort, és a kijelölés jobb alsó sarkában levő kis négyzetet megfogva húzzuk (másoljuk) le a többi sorba. Kattintsunk a diagramm varázslóra

Válasszuk ki a „Pont (XY)” diagramtípust Válasszuk az adatsor fület Hozzáadás

Írjuk be az ábrázolandó adatsor nevét Jelöljük ki a hígítás értékeit Adjuk meg a hígítás értékeit Adjuk meg a standard OD értékeit Jelöljük ki a standard OD értékeit

Végezzük el ezeket a műveleteket az ismeretlen minta adataival is

A standard 5. -8. pontjaira és az ismeretlen 2. -5 A standard 5.-8. pontjaira és az ismeretlen 2.-5. pontjaira egyenes illeszthető

A standard lineáris szakaszának adatai Az ismeretlen lineáris szakaszának adatai Ezeket az adatokat felhasználva ábrázolni tudjuk a lineáris részt, pl. az előzőekben bemutatott módon egy külön diagrammon. (Vigyázzunk, hogy a megfelelő hígítási értékeket válasszuk ki az adatok ábrázolásánál!)

Kijelölve az egyenest kiválsztjuk a trendvonal illesztése pontot (A jobb egérgombbal) Kijelölve az egyenest kiválsztjuk a trendvonal illesztése pontot

Egyenlet megjelenítése Lineáris trendvonal (Egyebek) Egyenlet megjelenítése

Ugyan ezt megcsináljuk az ismeretlennel is A standard egyenlete Ugyan ezt megcsináljuk az ismeretlennel is Vegyük észre, hogy azonos hígítási lépések mellett a vonalak meredeksége elvileg azonos kell legyen, tehát a meredekség értékeinek is kb. azonosnak kell lennie – elvileg ki is átlagolhatjuk és ugyan azt használhatjuk mindkettőre!

Az egyenletekkel kiszámíthatjuk, hogy egy adott OD érték mellé milyen hígítások tartoznak (ha a két egyenes párhuzamos (azonos a meredekségük) mindegy milyen OD értéket választunk, ha van eltérés válasszunk kb. az egyenesek közepének megfelelőt) ismeretlen: y = -0.6078x + 3.8421 standard: y = -0.6189x + 5.6945 pl. OD 1.5  x=3.85 OD 1.5  x=6.78 Az 53.85=491 –szeres hígítású ismeretlen felel meg… …az 56.78=54830 –szoros hígítású standardnak. Az ismeretlen 54830/491= kb.112x hígabb a 100µg/ml-es standardnál 0.89 μg/ml

Megjegyzés A bemutatott számítás egy demonstratív példa! Ennél egyszerűbben is eljuthatunk a megoldáshoz! (pl. elég a standard hígítási egyenes egyenletét kiszámolni, és ezt összevetni egy megfelelően kiválasztott ismeretlen minta OD értékével)