STERILEZÉS, DEZINFICIÁLÁS

Kórokozók érzékenysége HIV: 10% hypo, 70% etanol vagy i-propanol, 2-4% aldehid, 6% H2O2, mosószeres mosás! HBV: 10% hypo Prion: erősebb autoklávozás (1 óra), 5% hypo, 1M NaOH

Baktériumokat károsító hatás Bakteriosztatikus – nem pusztítja el , csak szaporodásukat gátolja, hatás megszűnte után újból növekedés Baktericid – elpusztítja a mikróbákat Baktericid hatású szerek: időegység alatt mikrobák azonos hányadát pusztítja el, tehát az élő baktérium szám exponenciálisan csökken

I - STERILEZÉS

Csíraszám csökkenése

Sterilezés hővel Nukleinsav, membránkárosító hatás (Hideghatás – csak bakteriosztatikus hatás) Nyílt láng – pl kacsanál is Hőlégsterilezés („száraz hő”) 160oC 2 óra, vagy 140oC 3 óra üvegáruhoz „Nedves hő”- gyorsabb, hatásosabb Denaturálják a mikrobiális fehérjéket Legtöbb mesophil nem spórás 60° 30 perc de S. aureus, S. fecalis 60 perc, Legtöbb betegséget okozó bakt. és gomba 80° 10perc de C. botulinium 100° 5,5 óra!!

2. Autokláv (túlnyomás, telített gőz) 1. Kifőzés – de max 100°C Spóra, hepatits nem puszul el 2. Autokláv (túlnyomás, telített gőz) nyomás alatti telített vízgőz elősegíti a hő bejutását a sterilezendő anyagba nyomás növelésével emelkedik a hőmérséklet is +1 Atm  121 oC, 20-30 percig ( bár 10 perc alatt hatásos) + 2 Atm - 134 °C steril próba: színváltó csíkkal bakt. spórával (=B. stearothermophilus)

Autokláv - ipari méretek

Autokláv - labor méretek Autokláv fogászati eszközökhöz

Az autokláv működése - 1

Az autokláv működése -2

Az autoklávozás szakaszai

Sterilezés egyéb lehetőségei Szűrés pirogén anyagok (LPS) eltávolítása hővel sterilezett folyadékokból nem hővel sterilezhetők csíramentesítése, ill levegő HEPA szűrővel Nitrocellulóz szűrőn, (mikr. adszorpciója) szita hatás Tulnyomáson , megfelelő pórusmérettel akár vírusok is! Besugárzás UV– citozin : hidratáció, timin uracil :dimerizáció Germicid lámpák, inkább boxokban, kisebb munkaterületekre (sötét terület) Y – nagy áthatoló képességű, szabad (hidroxilion) gyökök keletkeznek- replikáció gátlódik. Egyszer használatos eszközök : injekciós tű, fecskendő Gázzal - β-propiolakton alkiláló hatás: protein és ns károsító Műanyagok sterilezése, de szellőztetni kell

Plazmasterilezés Mechanikus hatások Elektromos vagy mágneses erőtérrel a H2O2 plazmaállapotba kerül, szabadgyökök kölcsönhatásba lépnek a mikroorganizmussal. Végén O2 ill víz lesz belőle Hőre és nedvességre érzékeny anyagok Vírus, spóra, bakt. Mechanikus hatások Többször 10mPa, de csak elmélet, ill ultrahang is, fagyasztás olvasztás többször…

Szűrés

Membránszűrés (tápfolyadékok)

Besugárzás

Gázsterilezés

II - CSÍRASZÁM ÁTMENETI CSÖKKENTÉSE

Hőkezeléssel Pasztőrözés: 65oC 30 perc, vagy 85oC 5 perc (tej) de TBC kórokozó túléli Tyndallozás (frakcionált hőkezelés): 85oC 30 percig – 37oC egy éjszakáig (3x) - spórákból vegetatív alakok lesznek

Fertőtlenítőszerekkel Bőrfertőtlenítés (=antisepticumok) Bőr élő mikróbáinak számát csökkentjük. Szőrtüszőkből újra kolonizálódik. Élettelen felszín fertőtlenítése (=dezinficiálás) Hatáserősség függ: koncentráció, behatási idő, pH fenoléhoz hasonlítják (=fenol-koefficiens) természetes anyagok (vér, genny, stb.) inaktiválhatják, közömbösíthetik a fertőtlenítőszer hatását !Fontos h minél kisebb koncentrációban gátolja a mikr. és ne legyen toxikus, bomlékony, hatása sokáig tartson

Fenolkoefficiens meghatározása Baktérium 1:50 1:60 1:70 1:80 1:90 1:100 Fenol Baktérium 1:100 1:200 1:300 1:400 1:500 1:600 X

Kioltás 5 és 10 perc inkubáció után fenol X 1:50 1:70 1:60 1:90 1:80 1:100 1:300 1:200 1:400 1:500 1:600 fenol X 1:50 1:70 1:60 1:90 1:80 1:100 1:300 1:200 1:400 1:500 1:600

Leolvasás 24 óra múlva 5 perc 10 perc Értékelés: 200/70 = 2,85 fenol X 1:70 1:60 1:90 1:80 1:100 1:50 1:300 1:200 1:400 1:500 1:600 fenol X 1:50 1:70 1:60 1:90 1:80 1:100 1:300 1:200 1:400 1:500 1:600 Értékelés: 200/70 = 2,85

Fertőtlenítőszerek Sejtmembrán károsítása detergensek – felületaktív anyagok (anionos, kationos) támadáspont a bakt. membránja alkoholok (70%-os ethanol, i-propanol) dezorganizálják a lipid struktúrát, fehérje denat. és vízelvonó hatás Spórák és gombák ellen kevéssé hatásosak fenoltartalmú szerek (fenol, klórhexidin) membránhoz kötött oxidázokat és dehidrogenázokat inaktiválja

Fertőtlenítőszerek Denaturálószerek Erős ásványi savak (HCl, H2SO4) Szerves savak (ecetsav, citromsav, tejsav) Élelmiszeriparban gyakran használják tartósításra Nehézfémsók: (enzimek működését gátlók) Ezüst-sók (Ag-acetát szemcsepp újszülötteknék, N. gonorrhoeae okozta blenorrhoea kialakulása ellen) Hg-sók (főleg szerves) As-vegyületek

Fertőtlenítőszerek Oxidálószerek Szabad SH- csoportokat oxidálják Halogének (jód, klór - hipo) H2O2, KMnO4 Festékek (bőrecsetelésre) Anilin festékek: brillantzöld, malachitzöld, kristályibolya!! – szelektív táptalajokba is keverik biz. baktériumok gátlására

Fertőtlenítőszerek Alkiláló ágensek Fehérjék alkilezése formaldehid (formalin), glutáraldehid

Dezinficiensek lehetséges támadáspontjai

Dezinficiensek hatása a baktériumokra

III - KONZERVÁLÁS

Élelmiszerek Konzervek – autoklávban sterilizálják lekvár, savanyúság 1-3% NaCl, 40% > cukor, benzoesav, szalicil

Gyógyszeriparban injekció, orrcsepp, szemcsepp benzoesav, fenolszármazékok besugárzás

Steril gyógyszerkészítmények ellenőrzése anaerob táptalaj (tioglikolát vagy Holman) gomba táptalaj

„Limulus amebocyte lysate” (LAL) teszt Cél – endotoxin kimutatás injekciós készítményekből elsősorban ill egyéb gyógyszeralapanyagokból Biológiai háttér – a patkórák, Limulus polyphemus vére endotoxin hatására megalvad – az alvadásért felelős enzim a vér amoebocytáinak granulumaiban található  lizátum: enzim Proenzim Koaguláz Koagulogén Koagulin LPS Reakció Detektálás – koagulin (alvadék) – turbidimetria

Pozitív reakció: ha az inkubálási idő letelte után a csövet megfordítva a gél állagú anyag megtartja formáját. Minden más esetben negatív

Mikrobiális korrózió BIOFILM !!!