Limulus-test A név egy alsóbbrendű tengeri rák latin nevéből ered; Limulus polyphemus. A Limulus-test segítségével a Gram-negatív baktériumok által termelt.

Az előadások a következő témára: "Limulus-test A név egy alsóbbrendű tengeri rák latin nevéből ered; Limulus polyphemus. A Limulus-test segítségével a Gram-negatív baktériumok által termelt."— Előadás másolata:

1 Limulus-test A név egy alsóbbrendű tengeri rák latin nevéből ered; Limulus polyphemus. A Limulus-test segítségével a Gram-negatív baktériumok által termelt a különlegesen magas hőellenállóképességű lipopolysaccharid (LPS) mennyiségét mutatjuk ki.

2 Limulus polyphaemus Max. size 50 cm

3 Endotoxin Az endotoxin egy lipopolysaccharid, amely a Gram-negatív baktériumok sejtfalának külső rétegéből ered. Az endotoxin akkor szabadul fel, amikor a baktérium elpusztul és sejtjeik autolizálnak.

4 Limulus reakció Endotoxin (Gram negatív baktérium)
+ Limulus polyphaemus haemolympha (haemocianin+Cu komplex) Eredmény: az elegy folyékonyból gél állapotba vált (mennyiségi meghatározás hígítással)

5 Az impedanciamérés formái
1. Elektromos vezetőképesség direkt mérése 2. Nagy sótartalmú táptalajoknál az elektródák felületén kialakult elektromos kettősréteg feszültségének (kapacitancia) mérése. 3. Indirekt mérés (gombáknál)- a mérőcellába KOH-ot öntünk és ebbe egy kisebb kémcsövet helyezünk a leoltott táptalajjal. A mikrobák által termelt szén-dioxid reakcióba lép a KOH-val és KCO3 keletkezik, ezáltal csökken a vezetőképesség (lefelé menő görbe).

6 Vezetőképesség (konduktancia) mérés
Elekromos ellenállás: R (Ω) méri, hogy egy anyag milyen erősen áll ellen az elektromos áram folyásának . R ( ohm ) = U (V) / I (A) Vezetőképesség - az ellenállás reciproka 1/R (1/Ω ) A vezetőképesség erősen függ a hőmérséklettől !

7 A vezetőképesség mérést a gyors mikrobiológiai diagnosztikában használják. Szaporodásuk alatt a mikrobák a táptalaj komponenseiből (pepton, aminosav, szénhidrát) szerves savakat és széndioxidot termelnek, amelyek növelik a levestáptalaj vezetőképességét és ezt egy szoftver segítségével folyamatosan regisztráljunk. A legkisebb mérhető vezetőképesség változáshoz eltelt idő a Detektációs Idő, amely fordítottan arányos a vizsgált mintában lévő mikoorganizmusok kiindulási koncentrációjával.

8 Impedanciamérő berendezés

9 Mérőcella szerkezete

10

11 Az impedancia-mérés módszerei
1. Jelenléti, vagy hiány próba 2. Mikrobák számának meghatározása kalibrációt követően

12 Detection of Salmonella Genus

13

14

15

16 Novel selective synthetic medium for detection of coliform bacteria and Escerichia coli
Pseudomonas Aeruginosa Coliform bacteria Lactose NH4+

17 Comparison of BBL broth and synthetic (X) broth after inoculation with test bacteria.

18 Novel selective synthetic medium for detection of Pseudomonas earuginosa
Acetamide Pseudomonas Aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Acetamide CH3 COO- + NH4+ Pseudomonas aeruginosa szelektív Z leves Acetamidot tartalmaz Szénforrás: ecetsav N forrás: NH4+

19 Pure culture of Ps. aeruginosa in ten fold dilution

20 Ps. aeruginosa in tap water

21 Az impedancia mérés előnyei
1. Nem kell hígítási sorozatot készíteni (szilárd anyagoknál elegendő az alaphígítás) 2. A mérés automatizált 3. Jelentősen csökken a vizsgálat időtartama 4. Munkaerő és költség megtakarítás 5. Eredménynek automatikus dokumentálása

22 Redox-potenciál mérése (mV)

23 A redox-potenciál változás elve
A biológiai oxidációnál - légzés - csökken a tápközeg redox-potenciál értéke Nem csak az oxigén elfogyasztása, hanem redukáló anyagok keletkezése (H2S) is csökketi a redox-potenciált Tipikus oxidáció-redukió a biológiai rendszerekben: [Oxidáció] + [H+] + n e-  [Redukció]

24 MicroTester - folyamatos redox-potenciál mérő A redox-potenciál értéke egy referencia (kalomel) és egy mérőelektróda (szén, vagy platina) között mérhető mV-mértékegységben.

25 Test cell for redox potential measurement

26 Redox-potenciál mérő berendezés

27

28 Jellemző redox-görbe a mikroba növekedése során

29 Különféle baktériumok redox-görbéi

30

31 A redox-potenciál mérés előnyei
1. Egyszerű mérési technika 2. Nincs erős hőfok-függés (lsd. vezetőképesség) 3. Gyors eljárás, különösen magas mikroba számnál 4. Bármely összetételű táptalajnál használható (impedancia mérésnél csak különösen alacsony vezetőképességű táptalajok használhatók) 5. Különösen alkalmas membránszűrés esetén 6. Jól használható tápközegek optimalizálására 7. Olcsóbb, mint a tenyésztéses eljárás

32

33 P e t r i f i l m M™ Petrifilm™ Plates improve labor productivity and reduce overall costs.

34