Egészségügyi ügyvitelszervezői szak Vér alakos elemei Vérkenet készítés Kulcsszavak: vér, vérkenet, vörösvértestek, fehérvérsejtek, thrombocyták, vérképző őssejt Zsiros Viktória Egészségügyi ügyvitelszervezői szak 2015.12.08.

A vér A vér a kötőszövettel rokon szövetként is felfogható: Sejtjei között intercelluláris állomány van jelen (vérplazma).

A vér funkciói Tápanyagok, O2, bomlástermékek, CO2szállítása Hormonok szállítása Homeosztázis szabályozása (hőszabályozás, puffer kapacitás) Fertőzések, idegen sejtek és fehérjék, transzformált sejtek elleni védelem Véralvadás A vér speciális, folyékony sejtközötti állománnyal rendelkező szövetnek is tekinthető. 3

A vér összetétele Alakos elemek Plazma Eritrociták (vörösvértestek) 99% -át teszik ki a sejteknek oxigén és szén-dioxid szállítás Leukociták (fehér vérsejtek) fertőzés elleni védelem stb. Trombociták (vérlemezkék) véralvadás Plazma 55% -át teszi ki a vérnek Víz (a plazma 90%-a) Elektrolitok Plazmafehérjék: Albuminok Globulinok Fibrinogén (A fibrinogénmentes vérplazmát vérsavónak (vérszérum) nevezzük. Ennek az az oka, hogy a vérszérum, szemben a plazmával, nem alvad meg.) A vér által szállított anyagok Tápanyagok Bomlástermékek Légzési gázok Hormonok 4

A vér vizsgálata régóta fontos az orvosi diagnosztikában. A vér kémiai, biokémiai vizsgálatán kívül az egyes vérsejtek sajátosságai, számuk, festődésük és molekuláris jellemzőik jól mutatják a szervezetben lezajló normális és pathológiás folyamatokat. Felnőtt ember normál vérképe db/1 μl: Vörösvértestek: erythrocyták 4,5-5 millió (ebből 0,5% a reticulocyta) Fehérvérsetjtek: leukocyták 5-7000 ezen belül: neutrophil granulocyta: 60-70% eosinophil granulocyta: 2-3% basophil granulocyta: 0-0,5% lymphocyta: 20-30% Vérlemezkék: thrombocyták 150-200 000

6

A vér alakos elemei Erythrocyták Trombocyták Leukocyták

Vörösvértestek (erythrocyták) Jellegzetességei: nincs sejtmagjuk bikonkáv alakjuk van, ami speciális sejtvázat igényel (spektrin, aktin) méretük: lásd ábra Szerepük: oxigén és szén-dioxid szállítás (hemoglobinhoz kötötten) Élettartam: 120 nap (lebontás: máj, lép) 8

Vérlemezkék (thrombocyták) Jellegzetességei: sejtmag nélküli citoplazma-fragmentumok, melyek a csontvelői megakaryocytákból válnak le élettartamuk: 8-11 nap számuk: 250-300 000/mm3 méretük: 2-5 µm Szerepük: véralvadás 9

Fehérvérsejtek (leukocyták) Granulocyták (polymorphonucleáris sejtek) neutrophil granulocyták eosinophil granulocyták basophil granulocyták Agranulocyták (monomorphonukleáris sejtek) lymphocyták monocyták A szervezet védekező rendszerének tagjai, a vérben „utazó” sejtek, majd a szövetekben, nyirokszervekben látják el feladataikat.

Polimorphonuclearis leukocyták (granulocyták)

Neutrofil granulocita Jellegzetességei: méretük 10-15 µm lebenyes sejtmag (2-5 lebeny) a granulumok aprók és jellegtelen színűek Gyakoriság: a leggyakoribb fehérvérsejt, 60-70% Szerepük: kórokozók fagocitálása és elpusztítása 12

Eozinofil granulocita Jellegzetességei: méretük 10-15 µm tipikusan kétlebenyű sejtmag A granulumok eozinofilek tartalmuk: hisztamin, jellemzőek a fehérje kristályok EM-ban Gyakoriság: a fehér vérsejtek 1-6 %-át teszik ki Szerepük: Ag-Ab komplexek eltakarítása gyakoriak a tápcsatornában, légutakban (paraziták elleni védekezés) 13

Bazofil granulocita Jellegzetességei: méretük 10-15 µm kétlebenyű sejtmag nagyszámú durva, erősen bazofil granulum (hisztamin, heparán-szulfát) utóbbi okozza a granulumok festődési tulajdonságait, toluidinkékkel metakromáziás festődés Gyakoriság: a fehér vérsejtek 0-1 % teszik ki Szerepük: allergiás reakciók effektor sejtjei 14

A granulocyták összehasonlítása 15

(Monomorphonukleáris leukocyták) Agranulocyták (Monomorphonukleáris leukocyták)

Monociták Jellegzetességei: méretük 15-20 µm vese alakú sejtmag citoplazmája szürkéskék HE festésnél szövetekben makrofággá differenciálódik Gyakoriság: a fehér vérsejtek 2-6 %-át teszik ki Szerepük: kötőszövetben makrofággá alakulnak 17

Lymphocyták Jellegzetességei: méretük 5-7 µm kerek sejtmag, kevés citoplazma Gyakoriság: a fehér vérsejtek 20-40 %-át teszik ki Szerepük: celluláris és humorális immunválasz Típusok: B- és T-limfocita NK-sejtek (pl.: tumorsejtek ellen) Az akivált lymphocytában megnő a dER mennyisége. 18

Plazmasejt sémás rajza (bal) és EM képe (jobb).

A vérsejtek eredete Minden vérsejt közös csontvelői ősből származik, mely az ún. őssejtfaktor (Stem Cell Factor-SCF) hatására különböző sejttípusok létrehozására válik elkötelezetté. A prekurzor sejtek citokinek hatására (kolóniastimuláló faktorok) osztódnak és érnek. Ezeket a faktorokat a csontvelőben jelenlevő strómasejtek termelik. 20

Vérkenet a diagnosztikában Rutineljárás! Kvalitatív vérkép: a fehérvérsejtek sejttípus szerinti összetétele/ százalékos megoszlásának elemzése (patológiás elváltozások azonosítása) Kvantitatív vérkép: vörös,- és fehérvérsejtek számának meghatározása

Kvalitatív elemzés Hemolitikus anaemia Az erythropoesis nagymérvű fokozódása egy határig kompenzálja a vörösvértestek fokozott pusztulását. A granulopoiesis és az erythropoiesis aránya a csontvelőben 1 alattira csökken (normálisan 2-3:1 a granulopoiesis javára), aminek az erythropoiesis fokozódása az oka. Csontvelő-kenet. Krónikus lymphoid leukaemia (CLL) a: monomorf közepes nagyságú lymphocyták keskeny citoplazmaszegéllyel, b: Grumprecht rögök láthatók, ez utóbbiak a szétesett lymphocyták maradványai, CLL-re jellemzőnek tekinthetők. Perifériás vérkenet. SE. I Belgyógyászati Klinika: Haematólógiai diasor http://www.bel1.sote.hu/info.aspx?sp=32&web_id=

Kvantitatív elemzés Bürker-kamra segítségével adott térfogategységben lévő sejtek számát határozzuk meg A vörösvértestek számolására a kis négyzetek (oldalaik 1/20 mm-esek) szolgálnak → területük 1/400 mm2 → fölöttük lévő térfogat 1/4000 mm3 A fehérvérsejtek számolására a nagyobb négyzetek szolgálnak (oldalaik 1/5 mm-esek)→területe 1/25 mm2→fölötte lévő hasáb térfogata 1/250 mm3 A kamra aljzata és a fedőlemez közötti rés 0,1 mm 1/20 mm 1/5 mm

Gyakorlatunk célja Vérkenet készítése Megfestése May-Grünwald-Giemsa oldattal Mikroszkópos megtekintése, egyes sejttípusok megkülönböztetése

Vérkenet készítés lépései Vérvétel ujjbegyből A középső ujj végét alkohollal alaposan fertőtlenítjük. Hüvelykujjunk segítségével a középső ujjpercnél elszorítjuk a vérkeringést; ettől az ujjvég kipirosodik (ha ujjbegyünk nem pirosodik ki, segíthet, ha a fertőtlenítés előtt kezünket lefelé lógatva rázogatjuk, vagy kezünket meleg vízbe áztatjuk). Az egyszer használatos tűről tekeréssel eltávolítjuk a tűt védő sapkát, majd az ujjunkat alulról megtámasztva határozott mozdulattal megszúrjuk. A tűt célszerű nem az ujjbegy közepére, hanem kissé az oldalára illeszteni, így a pici sebből valamivel bővebb vérzést kapunk. A használt tűt azonnal bedobjuk a megfelelő tárolóba. A kiserkenő vér első cseppjét letöröljük (ez nagy mennyiségű egyéb szövetnedvet is tartalmaz), majd megkezdjük a vér levételét. A vérzés lankadása esetén masszírozással serkenthetjük azt.

Vérkenet készítés 1 2 Egy másik tárgylemezt szögben tartva a csepp felé húzzuk A tárgylemezre kis mennyiségű vért cseppentünk ki 3 4 A második tárgylemezt előre mozgatva, maga mögött vékony rétegben teríti szét a vért. A két tárgylemez határán a vércsepp szétfutva egy vékony réteget képez 5 Kész is  !

May-Grünwald-Giemsa festés Vérkenet festésére alkalmas módszer A festés a festékmolekulák és a festendő molekulák közötti elektrosztatikus kölcsönhatáson alapul. May-Grünwald: metilénkék, eozin Giemsa: azúr Savanyú festék (anionokban gazdag): eozin→citoplazma, kollagén, izomrostok Bázikus festék (kationokban gazdag): metilénkék, azúr→DNS és RNS negatív foszfátcsoportjait (sejtmag; DER) Festés eredménye: Kék színű: fehérvérsejtek sejtmagjai, citoplazmájuk halványkék a kis mennyiségű RNS miatt; illetve a bazofil granulocyták granulumai Piros színű: vörösvértestek, eozinofil granulocyták granulumai

Festés menete Frissen készített vérkenetet szobahőmérsékleten hagyjuk megszáradni (kb. 5 perc) May-Grünwald oldatból, pasteur pipetta segítségével kb. 1 ml-t viszünk fel a lemezekre, és 3 percig állni hagyjuk A felvitt May Grünwald oldatot desztillált vízzel (1:1 arányban) hígítjuk és 3 percig állni hagyjuk Desztillált vizes mosás Kihígított Giemsa-t (2 ml desztvízbe 3 csepp Giemsa oldat) viszünk fel a lemezekre és 20 percig rajta hagyjuk Desztvizes mosás Szobahőmérsékleten szárítás Lefedés (kanadabalzsammal) Kiértékelés

Baleset és egészségvédelem Lehetőleg mindenki csak a saját vérével dolgozzon! Ha a társunknak segítség kell, a segítőnek gumikesztyű használata kötelező! A vérvételhez steril és egyszer használatos eszközöket szabad alkalmazni! Az ujjbegyet előtte le kell fertőtleníteni! A használt tűket erre a célra szolgáló merev falú hulladékgyűjtőbe kell dobni! A véres papírvattákat a kommunális hulladéktól szintén elkülönítve kell gyűjteni!

Források: http://elte.prompt.hu/sites/default/files/tananyagok/SzovettaniEsSejttaniVizsgaloModszerek/book.pdf Humán szövettan könyv (Dr. Nemeskéri Ágnes, Dr. Lukáts Ákos, Dr. Németh Anna, Dr. Kocsis Katalin) Wikipedia, Google: http://www.femina.hu/egeszseg/verkeringes_kepek?img=0&code=0000140499011986015dn578qt5kt#kepescikk http://www.szimpatika.hu/cikkek/3995/a_verszegenyseg_sulyos_betegseget_is_jelezhet/ http://www.hazipatika.com/napi_egeszseg/sziv_es_errendszeri_betegsegek_megelozese/cikkek/amit_a_keringesrol_tudni_kell/a_folyekony_szovet/20120813121057

KÖSZÖNÖM A FIGYELMET!