HLA ellenes antitestek szűrése és nyomonkövetése

Az előadások a következő témára: "HLA ellenes antitestek szűrése és nyomonkövetése"— Előadás másolata:

1 HLA ellenes antitestek szűrése és nyomonkövetése
Dr. Tordai Attila Transzplantációs Immungenetikai Laboratórium vezetője Országos Vérellátó Szolgálat, Budapest

2 HLA-ellenes antitestek szűrése és nyomon követése
Tordai Attila Országos Vérellátó Szolgálat Transzplantációs Immungenetikai Laboratórium XVIII. Debreceni Nephrológiai Napok,

3 Tartalomjegyzék A HLA-labor lehetőségei a szervtúlélés javításában:
Logisztika (CIT-csökkentés); A HLA-egyezés javítása (HLA-tipizálás); HLA-ellenes antitest szűrés, azonosítás; Transzplantáció modellezés (keresztpróba); A kilökődés immunológiai hátterének vizsgálata; Változások az Eurotransplant-csatlakozás után. 3

4 A hideg ischémiás idő csökkentése a sürgősségi kivizsgálás átszervezésével

5 A sürgősségi tevékenységek összehasonlító folyamatábrája

6 A hideg ischaemiás idők (CIT) összehasonlítása
régi rendszer utolsó 10 éve (2000.jan okt.31.) (régió: B, D, S, P) utolsó 10 hónapja (2010.jan okt.31.) új rendszer első 10 hónapja (2011. jan okt.31.) átlag (óra) 18,7 ± 3,9 16,5 ± 3,5 12,4 ± 3,2 esetszám (db) 1673 114 91 p<0,001 p<0,001 CIT2 régi rendszer utolsó 10 éve (2000.jan okt.31.) (régió: B, D, S, P) utolsó 10 hónapja (2010.jan okt.31.) új rendszer első 10 hónapja (2011. jan okt.31.) átlag (óra) 21,7 ± 4,0 19,8 ± 3,4 16,0 ± 3,8 esetszám (db) 1155 95 81 p<0,001 p<0,001

7 HLA-ellenes antitest szűrés, azonosítás

8 Miért foglalkozunk a HLA-ellenes antitestekkel?
TX előtt a preformált (vetélés/szülés, transzfúzió, korábbi TX) antitestek hiperakut rejekciót okozhatnak; TX után antiest-mediált rejekciót okozhatnak. MEGELŐZÉS NYOMON KÖVETÉS

9 Az antitest-kimutatás evolúciója
CDC ELISA Flow/Luminex multi-Ag beads Virtual XM FC Lymphocytes AHG-CDC Flow/Luminex/ELISA single-Ag and Donor-specific 9

10 Komplement-dependens citotoxicitás (CDC)
Terasaki & McLelland: mikro-lymphocyto-toxicitás tipizálásra: 1964:HLA-A,-B,-C 1977:HLA-DR 1984:HLA-DQ 2013:múzeumban. Elve: Sejtpermeabilizáció következik be, ha a HLA sejtfelszíni antigénhez egy arra specifikus, komplement aktivációra képes HLA-ellenes antitest kötődik. A pozitivitás viabilitási festékkel jeleníthető meg. Terasaki-tálca: 1 µl szérum!!!! Alkalmas: (i) antigén-meghatározás (tipizálás); (ii) antitest-kimutatás; (iii) keresztpróba.

11 A CDC-teszt mikroszkópos képe
Negatív Pozitív

12 HLA-ellenes antitest szűrés CDC-vel – panel reaktív antitestek (PRA)
A beteg HLA ellenes antitest-előfordulási gyakorisága %-ban kerül meghatározásra ismert HLA típusú paneltagok limfocitáival (szűrősejtek) szemben. pozitív negatív PRA = 92% A számszerű eredményt befolyásolja, hogy milyen gyakori antigén ellen termelődik antitest.

13 LUMINEX xMAP technológia
Áramlási citometria + szendvics ELISA LUMINEX xMAP technológia A két festék (vörös és infravörös) eltérő arányú keveréke 100-féle gyöngytípust eredményez egyedi spektrális kóddal. Egy reakcióban egyszerre elméletileg 100 féle analit is vizsgálható.

14 HLA-ellenes antitestek kimutatása szolid fázisú (LUMINEX) technikával
Recipiens savó; ismert HLA- antigéneket tartalmazó gyöngyök; Fluoreszcens festékkel konjugált másodlagos antitest (anti-humán IgG).

15 HLA-ellenes antitest szűrés (LABScreen mix)

16 HLA-ellenes antitestek azonosítása (single antigen)
LABScreen Single Antigen HLA I. osztály

17 HLA-ellenes antitestek azonosítása (single antigen)
LABScreen Single Antigen HLA II. osztály Donor: DR9,14 DR52,53 DQ9,7

18 Transzplantáció modellezés (keresztpróba)

19 Keresztpróba (cross-match, XM)
Kérdés: van-e a recipiens szérumban a donor sejtekre specifikus antitest. Technika: CDC – komplement aktiváló antitestek; FACS (áramlási citométer) – nemcsak komplement aktiváló antitestek, de érzékenyebb. Célsejtek: perifériás vér mononukleáris sejtek vagy lép/ny.cs. sejtek (cadaver).

20 A kilökődés immunológiai hátterének vizsgálata

21 Tx előtt Tx után Donor-specifikus antitest (DSA)
Recipiens antitest-profil SA módszerrel + Donor lehető legrészletesebb (6 lokusz) HLA-tipizálása Tx előtt Hiperimmunizált betegeknél tolerálható antigének előzetes azonosítsa (acceptable mismatch, AM program); Már transzplantált betegnél DSA nem mindig jelenik meg valamennyi donor-antigénnel szemben – retranszplantáció esélyének növelése; Élő donoros átültetésnél megfelelő donor kiválasztás – „paired donation”. A DSA, ill. nem DSA anti-HLA antitestek elkülönítése + mennyiségi/aviditási információ (átlagos fluoreszcencia intenzitás – MFI); Ha új DSA jelenik meg, vagy nő a DSA-MFI – rossz prognózis; Ha DSA eltűnik vagy csökken a DSA-MFI – eredményes terápia. Tx után 21

22 A pre-TX donor specifikus antitestek hatása a graft-túlélésre
Lefaucheur J Am Soc Nephrol 22

23 Antitest-mediált rejekció (AMR) Lefaucheur 2010. J Am Soc Nephrol
AMR nélküli alcsoport n=370 Lefaucheur J Am Soc Nephrol 23

24 A single antigen (SA)-vizsgálat lehetőségei
Nagy immunológiai kockázatú betegeknél; Deszenzitizációt követően az antitest újratermelődés kimutatására; Immunológiai rejekció gyanújakor; Rejekció elleni terápia nyomon követésére. Hátrányok Túlzott érzékenység – esetlegesen klinikailag nem jelentős antitestek; A nem komplement-aktiváló antitesteket is kimutatja (fagyasztva tárolt cadaver sejtekkel utolagos XM-mel eldönthető; A reagens (gyöngyök) antigén-készlete nem tükrözi a helyi populációra jellemző HLA-eloszlást; Nem ismert a gyöngyökhoz kötött antigének sűrűsége és konformációja; Költséges. 24

25 Változások az Eurotransplant-csatlakozás után
25

26 A cadaver vese TX program sajátosságai ET-tagként
Speciális programok: (i) gyermek; (ii) acceptable mismatch (AM); (iii) sürgősségi; EFI-akkreditált HLA-labor (jelenleg Bp, később Debrecen); Részvétel az ET szisztematikus mintacsere programjaiban; A recipiens adatokat a TX-centrumok, a HLA-adatokat pedig a HLA-labor rögzíti az ENIS-programba; Szerv-allokáció az egységes ENIS-program (Leiden) által; Szérumgyűjtés a listán levő betegektől 3 havonként, immunizált betegek mintáinak küldése 30 ET-laborba; Törekvés az antitest-profil részletes előzetes megismerésére – virtuális keresztpróba; Új vesebetegek: kétszeri mintaküldés 2 hét időközzel, folyamatos listára kerülés.

27