Gélelektroforézis Molina Csaba.

Az előadások a következő témára: "Gélelektroforézis Molina Csaba."— Előadás másolata:

1 Gélelektroforézis Molina Csaba

2 Gélelektroforézis Elektroforézises eljárások:
Méret szerinti elválasztására alkalmazott gyakori módszer A molekulák a töltésüknek megfelelő irányba kezdenek el vándorolni Felhasználható az izoelektromos pont meghatározására Tiselius-elektroforézis (vándorló határfelületek módszere) Zóna-elektroforézis A mintát keskeny sáv formájában visszük be, az elektroforézis előrehaladtával külön sávra különülnek el Tiszta folyadékban a sávok elmosódhatnak, ezért célszerű valamilyen hordozó anyagon végezni az elválasztást.

3 Gélelektroforézis Gélelektroforézis:
állófázisai hálózatos szerkezetű gélszerű anyagok, melyek labirintust képezve a molekulamérettel arányos sebességű áramlást biztosítanak Alkalmazható gélek: keményítő agar-agar poliakrilamid cellulóz-acetát

4 Gélelektroforézis Fehérjék meghatározása: SDS-PAGE
Izoelektromos fókuszálás: agaróz gélben pH gradiens hozunk létre

5 Gélelektroforézis Nukleinsavak elválasztása:
A negatív töltésű nukleinsav molekulák az elektroforézises cella pozitív pólusa felé vándorolnak Az elválasztáshoz szükséges ellentétes irányú visszatartó erőt a gélmátrix térhálós szerkezete adja. A vándorlási sebességet befolyásoló tényezők: fragmens mérete fragmens konformációja gél koncentrációja áramerősség

6 Gélelektroforézis Fragmentek láthatóvá tétele, kiértékelése:
Etídium-bromid: hozzákötődik a DNS-hez és UV fényben fluoreszkál Gyors festés: sample loading dye + fast blast

7 Gélelektroforézis

8 Gélelektroforézis

9 Gélelektroforézis

10 Köszönöm a figyelmet