RHO/RAC FEHÉRJÉK SZEREPE A FAGOCITÁKBAN. Hall, 1998, Science, 279, 509-514.

Az előadások a következő témára: "RHO/RAC FEHÉRJÉK SZEREPE A FAGOCITÁKBAN. Hall, 1998, Science, 279, 509-514."— Előadás másolata:

1 RHO/RAC FEHÉRJÉK SZEREPE A FAGOCITÁKBAN

2

3

4 Hall, 1998, Science, 279, 509-514.

5 Ridley, Trends Cell Biol 2001,11,471-7

6

7

8 Fc gamma receptor által mediált fagocitózis CR3 által mediált fagocitózis Allen and Aderem, J Exp Med, 1996, 184. 627-637

9 vinculinpaxillin Fc gamma R CR3 kontrol Allen and Aderem, J Exp Med, 1996, 184. 627-637

10 CR3 mediált fagocitózis megindulásához aktiváló tényező kell Fázis kontraszt antiCD11b + PMA Allen and Aderem, J Exp Med, 1996, 184. 627-637

11 Caron and Hall, 1998, Science 282, 1717-21 Fcgamma fagocitózisban Rac és Cdc42 szerepel C3 toxin(myc) N17Rac(myc) N17Cdc42(myc) Anti-myc vvs

12 Caron and Hall, 1998, Science 282, 1717-21 CR3 fagocitózisban Rho szerepel Anti-myc vvs N19Rho(myc) N17Rac(myc) N17Cdc42(myc)

13 Vav részvétele az Fc fagocitózisban Vav F-aktin Vav (zöld) + F-aktin (piros) kontrol FcgammaCR3 vvs Vav F-aktin Vvs (kék) + Vav (zöld + F-aktin (piros) Patel et al. 2002, MBC, 13., 1215-1226.

14 Patel et al. 2002, MBC, 13., 1215-1226 Vav részvétele kell az Fcgamma fagozitózishoz Fc fagocitózis makrofágban Fc fagocitózis COS sejtben CR3 fagocitózis makrofágban

15 Vav csak a Rac-ot aktiválja Patel et al. 2002, MBC, 13., 1215-1226.

16 Patel et al. 2002, MBC, 13., 1215-1226

17 Cougoule, C. et al. J. Biol. Chem. 2006;281:8756-8764 Scr és Syk kinázok szerepe a FcγR indukált Rac-aktiválásban

18 Cougoule et al. JBC 2006, 281. 8756. A Rac aktiválódás modellje FcγR stimulálást követően

19 Figure 1. F-Actin and Arp2/3 Complex Recruitment to Phagosomes in Cells Treated with ROK and MLCK Inhibitors (A and B) Macrophages were incubated with Y-27632 or ML7 prior to the (A) CR or (B) Fc R phagocytic assay. Cells were stained for (a) F-actin and (b) RBC (merged in [b], F-actin in red, and RBC in green) or (c) Arp2/3 complex and (d) RBC (merged in [d], Arp2/3 complex in green, and RBC in red). Arrows indicate the recruitment of F-actin or Arp2/3 complex to phagosomes. (A) Note that, in CR phagocytosis, there is a reduced number of internalized RBC and a reduced recruitment of actin and Arp2/3 complex to phagosomes, in cells treated with Y-27632 or ML7. (B) In contrast, during Fc R phagocytosis, treatment with ML7 cells only reduced internalization and had no effect on the recruitment of actin or Arp2/3 complex. The scale bars represent 10 m. Return to article Return to article Send feedback to ScienceDirect Software and compilation © 2003 ScienceDirect. All rights reserved. ScienceDirect® is an Elsevier Science B.V. registered trademark.feedback Your use of this service is governed by Terms and Conditions. Please review our Privacy Policy for details on how we protect information that you supply.Terms and ConditionsPrivacy Policy Register or Login: Register Passwo rd: Quick Search: Quick Search: within within Olazabal et al. Current Biology, 2002, 12, 1413-18 ROK gátló Miozin-II gátló Vvs: zöld Aktin: vörös CR3 fagocitózisban Rho-kináz és miozin-II szerepel

20 Aktivált CR3 fagocitózisban Rap1 is szerepel Caron et al. 2000, Curr. Biol. 10, 974-78.

21 CR3 fagocitózist és C-opszonizált vvs kötődését Rap1 önmaga is aktiválja Rap1V12(myc)

22 Schmidt et al. 2001, MCB 21, 438-448. LPS Rap1-en keresztül vált ki integrin-aktivációt antitestek

23 Schmidt et al. 2001, MCB 21, 438-448. LPS integrin-aktivációt kiváltó jelpályája

24 Rac p67 p47 gp91 Rac p67 p47 gp91 A NADPH oxidáz (Phox) alegységei e- NADPH O2O2

25 A fagocita NADPH oxidáz in vitro aktiválása Membrán citokróm b558 Rac Citoszol p47 p67 Rac GTP vagy GTP[S] Amfifil SDS, Arachidonsav, PA + OAG

26 PMN-ben a szuperoxid-termelés Rac2-t igényel Roberts et al. 1999, Immunity, 10. 183. Glogauer et al., 2003, J. Immunol. 170. 5652.

27 RacGTP szükséges az oxidáz fenntartott aktivitásához Működő enzimhez adva Moskwa et al. 2002.

28 Ratio GDP hatása az oxidáz aktivitásra és a GTP[S] kötésre szemirekombináns tisztított min GDP Moskwa et al. 2002.

29 Rac aktiválás: GEF - Vav - P-Rex

30 Rac aktiválás: GEF - Vav - P-Rex Rac dezaktiválás: - Target - GAP

31 Bound 32 P-GTP (%) Time (min) Az oxidáz alegységek hatása a Rac GTPáz aktivitásra + p67 Moskwa et al. 2002.

32 A p67 hatása a Rac GTPáz aktivitásra specifikus Rac 6.5 minRho17.5 min + p47 6.5 min + p6718.0 min + p67 17.0 minCdc42 4.1 min + p47 + p67 17.5 min + p67 4.2 min + p47 + lipids 7.2 minRacA27KG30S 6.0 min + p67 4.5 min T 50 Moskwa et al. 2002.

33 Time (min) Bound 32 P-GTP (%) Bound 3 H-GDP (%) RacRac + FRac + membrRac + membr + F Fluorid hatása a Rac-GAP aktivitásra Wolfl et al. 1996 EJB GTPáz mérésKicserélődés

34 Nucleotide concentration (µM) O 2.- production (nmol x min -1 x mg -1 ) GTP GTP + F GTP[S] A GAP gátlása fokozza az oxidáz aktivitását

35 A GAP activitás és a GTP-indukált O 2.- termelés összefüggése With F -

36 A Bcr GAP hiányának következményei LPS kezelés utáni súlyváltozás bélnekrózis Voncken et al. Cell, 1995

37 Különböző, Rac-al reagáló fehérjék hatása az oxidáz aktiválás alatt vagy után alkalmazva O 2.- production (nmol x min -1 x mg -1 ) Moskwa et al. Biochemistry 2002

38 Működő enimhez adva Moskwa et al. 2002.

39 Rac p67 p47 gp91 Rac p67 p47 gp91 e- NADPH O2O2 GAP1 GAP2 GAP1 GAP2 Hipotézis: Rac-GAP az aktiv Phox komplex része

40 Bcr p190 RhoGAP p50 RhoGAP PMN membrán PMN citoszol patkányagy kivonat Rac-GAPok azonosítása humán PMN-ben Geiszt et al. BJ 2001.

41 PLC béta aktiválása HT és monomer G fehérje segítségével Illenberger, 2003, JBC, 278, 3006-314.

42 Rac és Cdc42 hatása a PLC béta2 enzimre

43 IRODALOM Ridley A., J. 2001. Cell Science, 114. 2713-2722. Hall A., 1998, Science, 279. 509-514. Caron E. and Hall A., 1998, Science, 282. 1717-1721. Patel et al. 2002, Mol.Bio.Cell 13. 1215-1226. Caron et al. 2000, Curr. Biol. 10. 974-978. Cougoule et al. 2006, JBC 281. 8756. Dinauer M.C. 2003. Curr. Op. Hematol. 10. 8-15. DeCoursey T.E., Ligeti E. 2005. Cell. Mol. Life. Sci. 62. 2173-93.

44 R p67 p47 gp91 Core components of NADPH oxidase