Mikronalalitikai kurzus aminosav analízis

Az előadások a következő témára: "Mikronalalitikai kurzus aminosav analízis"— Előadás másolata:

1 Mikronalalitikai kurzus aminosav analízis

2 Az aminosav analízis két fő lépése:
Mikronalalitikai kurzus aminosav analízis Az aminosav analízis két fő lépése: fehérjék/peptidek szabad aminosavakra bontása analitika - az aminosavak minőségi és mennyiségi meghatározása

3 1. Szabad aminosavak előállítása
Mikronalalitikai kurzus aminosav analízis 1. Szabad aminosavak előállítása A peptidkötéseket hidrolizálhatjuk: savakkal bázisokkal szulfonsavakkal enzimekkel. A legelterjedtebb módszer a savas hidrolízis. Ez történhet - folyadék - vagy gőz fázisban.

4 Mikronalalitikai kurzus aminosav analízis
A módszer hátrányai .A hidrofób aminosavak (Ile, Leu, Val) kis hatékonyságú visszanyerése, bizonyos aminosav szekvenciák különösen ellenállóak a hidrolízissel szemben. .A Met és a Tyr alacsony kitermelése .A módszer nem képes kimutatni a Gln, Asn és a Trp aminosavakat. A Cys mennyiségi meghatározása bonyolult.

5 A hátrányok kiküszöbölése
Mikronalalitikai kurzus aminosav analízis A hátrányok kiküszöbölése Növeljük a hőmérsékletet, a HCl mennyiségét vagy a hidolízis idejét. Növeljük a hőmérsékletet, a HCl mennyiségét vagy a hidolízis idejét, használjunk tiszta sósavat. Enzimatikus emésztés, szulfonsavas, vagy bázikus hidrolízis. .Hidrolízis előtti alkilálás.

6 Mikronalalitikai kurzus aminosav analízis
2. Analitika A szabad aminosvak minőségi és mennyisége meghatározásának lépései: származékképzés – detektálás elválasztás előtt (precolumn derivatizálás) elválasztás után (postcolumn derivatizálás) analitika - kromatográfia ioncsere-kromatográfia fordított fázisú HPLC.

7 Származékképző reagensek áttekintése
Mikronalalitikai kurzus aminosav analízis Származékképző reagensek áttekintése

8 Mikronalalitikai kurzus aminosav analízis
Precolumn reagensek