DNS-alapú immunterápiák Garaczi Edina október 16.

Definíció: DNS vakcinák Olyan DNS-plazmid tartalmú vakcinák, amelyek „in vivo” alkalmazásuk során a kódolt proteint expresszálják.

DNS vakcinák: humán klinikai vizsgálatokban Infekciók – Hepatitis B, C vírus – HIV – Influenza – Malária – HPV – HSV Allergiák – Pollen (Japán cédrus) Tumorok – B-sejtes lymphoma – Emlő – Prostata – Melanoma – Tüdő – Máj, Vese Autoimmun betegségek – IDDM

Immunválasz: exogén antigének, proteinek Antigén prezentáló sejtek proteinek peptidek baktériumok lizoszóma ER, Golgi MHC II endoszóma CD4 Th1 Th2 Th3 Humorális immunválasz IgE IgG IgA IL-4 IFN  TGF 

Immunválasz: endogén antigének, DNS vírus tumor nucleus peptid antigens MHC I Antigén prezentáló sejtek CD8 Tc Sejtes Immunválasz: sejtlízis

CD8+ T-sejt mediált sejtlízis Ther Adv Vaccines, (5) 137–148

DNS vakcinák: celluláris és humorális immunválaszt is kiváltanak Liu és mtsai. Immunological Reviews, 2011.

HCV fertőzés: CHRONVAC-C  Weiland és mtsai. Mol Ther, 2013

Prostata tumor: PROSTVAC-VF  (PSA-TRICOM, fázis II vizsgálat) Kaplan–Meier curve of overall survival Gulley és mtsai. Cancer Immunol Res, 2013

Miért van szükség az allergia vakcinák fejlesztésére? Célkitűzések: Biztonság fokozása: mellékhatások csökkentése (darázs-, méh- venom ) Alkalmazás módja: injekció Hosszú ideig tartó kezelés: 3-5 év Sokszor ismételt kezelések: hetente Hatékonyság fokozása: ételallergia

Allergén vakcinák felosztása: hatóanyag alapján Allergén extractumok: tradícionális tisztított fehérjék (jelenleg elérhető ASIT) Rekombináns peptidek: molekuláris-módszerekkel előállított peptid vakcinák (klinikai vizsgálatokban) DNS vakcinák: DNS plazmidot tartalmaznak ( klinikai vizsgálatokban)

ASIT: allergén extractumok IgE JACI 2007; 119:881-91

Rekombináns peptid vakcinák

OVA- plazmid DNS Th1 immunválasz: – IFN  IgG2a  OVA protein + Alumínium hidroxid Th2 immunválasz  – IL4  – IL5  IgE és IgG1  DNS-vakcinák allergiás állatmodellben: (OVA- modell) Raz és mtsai, PNAS, 1996

Bakteriális DNS plazmid (pC-OVA)

DNS plazmid előállítása, sokszorosítása pc-OVA plazmid kompetens E. coli baktérium növesztése plazmid izolálása ova CMV transzformálás baktériumba + Előállítás: gyors olcsó DNS: stabil, nem szennyezett

BALB/c Allergén: Ovalbumin protein Szenzitizálás: ip. OVA-Alum inj. Provokáció: in. OVA oldat Nazális tünetek meghatározása: 10 percig számolva » tüsszögés » orrvakaró mozgások összege 8-10-hetes BALB/c egér Állatkísérletes modell

Preventív kezelési protokoll Garaczi és mtsai. Nanomedicine, 2013

Nazális tünetek Garaczi és mtsai. Nanomedicine, 2013

OVA-specific IgE Garaczi és mtsai. Nanomedicine, 2013

Citokinek vizsgálata (Th1, Th2) Garaczi és mtsai. Nanomedicine, 2013

Terápiás kezelési protokoll

Allergia vakcinák jellemzői DNS vakcinák (állatmodellek) Előállítás: gyors, olcsó DNS plazmid: stabil, teljes allergén szekvencia Biztonságos Immunogén: sejtes és humorális immunválasz Néhány kezelés, tartós eredmény Allergén extraktumok (ASIT) drága, hosszadalmas instabil, szennyezett fehérje anaphylaxia veszély!! Antitest válasz: IgE, IgG4 3-5 év alkalmazás, sokszor ismételt kezelések

CryJ2-DNA-LAMP plazmid (fázis 1 klinikai vizsgálat) Japán cédrus allergénjét (Cry J2) kódoló DNS vakcina Klinikai vizsgálat: 2012 okt jún. Honolulu év közötti allergiás nő és férfibeteg, valamint nem – allergiás önkéntes im. injekció: 2 hetente ismételve (összesen 4 injekció) Immunomic Therapeutics Inc. NCT Kezelési csoportok Bevonási kritériumDózis 1.nem-allergiás4mg/ inj. 2.allergiás betegek2mg/ inj. 3.allergiás betegek4mg/ inj.

Eredmények: CryJ2-DNA-LAMP Immunomic Therapeutics Inc. NCT

További fejlesztési lehetőségek Immunstimuláló szekvenciák alkalmazása (DNS szekvenciák: CpG motívumok) Adjuvánsok alkalmazása: természetes immunitás fokozása Új beviteli módok: a betegek számára kényelmesebb, elfogadhatóbb (topicalis, epicutan) mRNS vakcinák fejlesztése