Újdonságok és aktualitások a laboratóriumi vizsgálatok terén Nagy Attila laboratóriumvezető Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft.

Tartalomjegyzék 1. Mikrobiológiai vizsgálatok 2. Fitáz vizsgálatok 3. Aflatoxin vizsgálatok Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

Mikrobiológiai vizsgálatok (PCR) PCR alapú mikrobiológiai gyorsvizsgálatok a legújabb, 2012-ben kifejlesztett készülék és technológia PCR technológia: a sejt DNS-ét sokszorosítjuk és mérjük A jelenleg elérhető vizsgálatok: Salmonella spp, E. coli O157, Listeria spp. (L. monocytogenes, L. seeligeri, L. innocua, L. grayi, L. welshimeri)  Listeria monocytogenes 2013 novembertől Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

Hagyományos PCR Vizsgálati idő Vizsgálati költség Salmonella Mikrobiológiai vizsgálatok (PCR) PCR vizsgálat előnyei gyorsaság, jó ár/érték arány pontosság, robosztusság Hagyományos PCR Vizsgálati idő Vizsgálati költség Salmonella 3 v. 5 nap 1,1 nap 3 000 Ft 4 000 Ft E. coli 2 nap 2 000 Ft 5 000 Ft Listeria 7 v. 11 nap 3-4 000 Ft* Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

Mikrobiológiai vizsgálatok (PCR) Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

Mikrobiológiai vizsgálatok (PCR) A módszer elvi működése DNS sokszorosítás és pirofoszfát képzés Pirofosztát átlakítása ATP-vé ATP bontás luciferáz enzimmel, fény generálás Mérés Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

Mikrobiológiai vizsgálatok (PCR) Pontos, specifikus A fajspecifikus és a patogenitásért felelős DNS szakaszok sokszorozódnak A módszer robosztus (kevésbé érzékeny az inhibitorokra és az interferenciákra) Érzékeny módszer: egy sejtet ill. annak DNS-ét is képes kimutatni Validált módszer (AOAC) Gyors, költséghatékony Gyors DNS sokszorozódás Gyors mérés Egyszerű, üzembiztos készülék és berendezések Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

Összemérési tapasztalatok Mikrobiológiai vizsgálatok (PCR) Összemérési tapasztalatok Minta eredmény mintaszám hagyományos PCR Bélsár minta pozitív 9 negatív 5 Környezethigiéniai vizsgálat 1 11 Fűszerezett, nyers baromfihús 2 Húspép Összesen 29 Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

Mikrobiológiai vizsgálatok (pcr) Vizsgálati tapasztalatok Salmonella 400 vizsgálat Listeria 150 vizsgálat A partnerek elismerik a módszer előnyeit: Gyorsaság Költséghatékonyság Pontosság Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

Hagyományos Rapid Vizsgálati idő Vizsgálati költség Listeria Mikrobiológiai vizsgálatok (rapid) A Rapid vizsgálatok előnyei gyorsaság, jó ár/érték arány pontos, robosztus, validált (AFNOR) módszerek Hagyományos Rapid Vizsgálati idő Vizsgálati költség Listeria 7 v. 11 nap 3 v 4 nap 3-4 000 Ft* 4 000 Ft S. aureus 3 nap 1 nap 2-3 000 Ft* 2 000 Ft Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

Mikrobiológiai vizsgálatok (2014: a következő lépések) Tempo készülék beszerzése Rapid mennyiségi meghatározás a következő mikrobákra: Clostridium perfringens, Aerob mezofil összes élő csíraszám, Enterobaktériumszám, E.coli-Coliform szám, Penész szám) Víz mintavétele és mikrobiológiai vizsgálata Membránszűréses technológia Pseudomonas aeruginosa, E.coli, Coliform, Enterococcus szám, Aerob mezofil összes élő csíraszám, Clostridium Az új módszerek akkreditálása Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

fitáz vizsgálatok A fitáz enzim vizsgálatának oka A Kaposvári Egyetemmel közös project keretében vizsgáljuk az enzim hatásosságát, működését A takarmány-alapanyagok természetes foszfor-tartalmának nagy része (az inozithez) kötött formában van jelen (ez a fitin), így általában nehezen felvehető az állatok számára A fitáz enzim bontja a fitint, így felszabadítja ezt a foszfort, ezzel elősegíti a takarmány-alapanyagokban lévő természetes foszfor jobb hasznosulását Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

fitáz vizsgálatok A fitinsavas kötéseket a madarak és az emlősök saját enzimjeikkel nem tudják bontani. A fitin-kötésű foszfor és egyéb ásványi anyagok emészthetősége meglehetősen alacsony. A fitinsav bizonyos fehérjékkel is komplexet tud képezni, ami kihat az emésztőenzimek aktivitására és a táplálóanyagok emészthetőségére. Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

fitáz vizsgálatok A fitáz enzim alkalmazásának céljai Gazdasági szerep A takarmányokban lévő foszfortartalom jobb hasznosítása, így a gazdaságosság növelése, a takarmány-értékesülés javítása A fitáz enzim alkalmazásával a hasznosulás mértéke elérheti a 44–46%-ot. Környezetvédelmi szerep: A fitáz enzim alkalmazása révén a trágyával ürített foszfor mennyiségének 20-50 %-kal való csökkentése is megvalósulhat Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

fitáz vizsgálatok Honnan származik a fitáz A növényi magvak is tartalmaznak bizonyos mennyiségű fitáz enzimet, de (a búzát, a tritikálét és bizonyos mértékben az árpát leszámítva) annak mennyisége elhanyagolható. A növényi eredetű fitáz a takarmány emésztése során nem tud hatékonyan érvényesülni, mivel aktivitásának optimuma pH 5,5 Az iparilag felhasznált fitázt többnyire gombákból (Aspergillus niger, Peniphora lycii) állítják elő fermentációs úton A gomba eredetű fitáznak a pH 5,5-en kívül van egy alacsonyabb aktivitási optimuma is, és ezért hatása érvényesülhet a begyben, a mirigyes- és a zúzógyomorban is Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

fitáz vizsgálatok Hogyan vizsgáltuk a fitázt Szabványos módszer: MSZ EN ISO 30024:2010, Először meghatároztuk az alkalmazott fitáz enzim aktivitását pH 1,5-8,5 tartományban.   Az enzim aktivitás vizsgálata során az alábbi definíciót használtuk: Fitáz egység (FTU): 1 FTU az az enzimmennyiség, ami pH 5,5-ön és 37°C-on a Na-fitát szubsztrátumból 1 μmol szervetlen Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

A fitáz aktivitásának pH-függése fitáz vizsgálatok A fitáz aktivitásának pH-függése Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

A fitáz aktivitásának pH-függése (irodalmi adat) fitáz vizsgálatok A fitáz aktivitásának pH-függése (irodalmi adat) Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

A fitáz enzim hatása kukoricában fitáz vizsgálatok A fitáz enzim hatása kukoricában Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

A fitáz enzim hatása szójában fitáz vizsgálatok A fitáz enzim hatása szójában Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

A fitáz enzim által felszabadított foszfor mennyisége és részaránya fitáz vizsgálatok A fitáz enzim által felszabadított foszfor mennyisége és részaránya Teljes foszfor-tartalom Fitinsav eredetű foszfor Fitinsav eredetű foszfor aránya Felsza-badult foszfor (3 óra) kukorica 2,84 g/kg 1,47 g/kg 52 % 1,3 g/kg 88 % szója 7,09 g/kg 2,85 g/kg 40 % 2,0 g/kg 70 % Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

aflatoxin vizsgálatok 1999 óta vizsgálunk aflatoxinokat HPLC-FLD módszerrel a takarmány- és élelmiszeripar részére, az aflatoxinok (B1, B2, G1, G2) mérése a kezdetek óta akkreditált Jelenleg HPLC-FLD és ELISA módszerrel vizsgálunk aflatoxinokat 2012-ben akkreditáltattuk az aflatoxin M1 módszert Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

Az aflatoxinokat az Aspergillus flavus termeli aflatoxin vizsgálatok Az aflatoxinokat az Aspergillus flavus termeli Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

aflatoxin vizsgálatok 1959-ben Angliában 100 ezer pulyka hullott el A takarmány alapanyagként használt földimogyoró dara vékonyréteg kromatográfiás vizsgálatánál négy jól elkülönülő foltot kaptak B1, B2, G1, G2 megkülönböztetéssel (Fluoreszcencia színük alapján: B-blue, G-green) A toxikus darából egy fonalas gombát izoláltak, amely táptalajra oltva is termelte a toxikus anyagokat A gombát Aspergillus flavusként azonosították, a toxikus anyagoknak az aflatoxin nevet adták, a megbetegedést aflatoxikózisnak Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

aflatoxin vizsgálatok Horvátország: aflatoxin termelők azonosítása kukoricáról (2004, 2005) Észak-Olaszország, 2003: Aflatoxint termelő Aspergillus flavus és EU határérték feletti aflatoxin kontamináció detektálása kukoricán Szlovénia, Szerbia: EU limit feletti aflatoxin M1 szint tejben( 2007, 2009) Románia: 1997: minden vizsgált kukoricaminta aflatoxin-mentes volt 2002-2004: a vizsgált tételek 30%-ában delektáltak aflatoxinokat, 20%-ban a határérték felett • Bulgária, Ukrajna (2010) Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

aflatoxin vizsgálatok Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

aflatoxin vizsgálatok Szűrővizsgálat: tesztcsík, fluorimetria, ELISA Megerősítő vizsgálat: HPLC, LC-MS/MS Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

aflatoxin vizsgálatok ELISA gyors, olcsó szűrővizsgálat sok minta dolgozható fel vele a módszer kevésbé pontos határérték kb. feléig alkalmazható egyszerűen kivitelezhető HPLC drágább vizsgálat megerősítő vizsgálat, döntő módszer lassabban kivitelezhető komoly szakértelmet igényel Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

aflatoxin vizsgálatok Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.

aflatoxin vizsgálatok Forrás: Bóly Zrt., Dalmand Zrt., Bonafarm-Bábolna Takarmány Kft., Fiorács Kft.