Győri Edit Lelle Kocsis Kinga Komplex biolab qPCR Győri Edit Lelle Kocsis Kinga
c-kit = CD117, egy sejtfelszíni tirozin kináz receptor / proto-onkogén Receptor tyrosine kinase protein citokinek megkötése, jelátvitel indítása növekedést, illetve egyéb tulajdonságokat befolyásol előfordulás: hematopoetikus őssejt; multipotens, myeloid progenitor sejt és stb bizonyos daganatokban mutálódik (pl. GIST) C-Kit17-es exon, ez követően Sanger szekvenálás daganatterápiás szerekre teszik érzékennyé a daganatot https://en.wikipedia.org/wiki/CD117
SYTO 9 SYTO 9 binds to DNA. The resulting DNA-dye-complex absorbs blue light (λmax = 480 nm) and emits green light (λmax = 520 nm).
×40 95oC 1min 95oC 30sec 60oC 30sec 72oC 30 sec Data acquisition Melt curve 50-95oC 20oC 20sec ×40
×6 Master mix: PCR mix: végtérfogat: 10µl 5µl QuestTaq qPCR Premix Templát: 3 µl (×10000, ×1000, ×100 hígítás, Non-templát kontroll, Ismeretlen minta) Primer: 0.5µl RNáz mentes víz: 1.5µl ×6
Ismeretlen minta? ×10000 ×1000 ×100 ×10 Non-Template Control
Non-Template Control
Cél: 11 ng/µl végkoncentrációjú törzsoldat (3µl a PCR mixbe) 1 kópia humán DNS = 3.3 pg ×10000 kópia DNS = 33 ng Cél: 11 ng/µl végkoncentrációjú törzsoldat (3µl a PCR mixbe) 10 µl ismeretlen minta Nanodroppal koncentráció meghatározás Megfelelő hígítás
Jegyzőkönyv: késés jegylevonás edit.gyori@gmail.com 1. A gyakorlat célja és menete 2. Mennyi volt az ismeretlen minta kópiaszáma? (fotó, magyarázat)? 3. Hogyan készítettük a 11 ng/µl végkoncentrációjú ‘templát törzsoldat’? 4. CD117 jellemzése 5. A qPCR gyakorlati felhasználásai