Folyadék-kromatográfia Mozgófázis: folyadék (eluens) Állófázis: szilárd v. folyadék Csoportositás : Állófázis geometriája szerint Oszlop-kromatográfia.

Az előadások a következő témára: "Folyadék-kromatográfia Mozgófázis: folyadék (eluens) Állófázis: szilárd v. folyadék Csoportositás : Állófázis geometriája szerint Oszlop-kromatográfia."— Előadás másolata:

1

2 Folyadék-kromatográfia Mozgófázis: folyadék (eluens) Állófázis: szilárd v. folyadék Csoportositás : Állófázis geometriája szerint Oszlop-kromatográfia Réteg-kromatográfia - HPLC - Vékonyréteg-krom. (TLC), - Papír-kromatogr. (PC) - OPLC Fázisrendszer halmazállapota szerinti csoportosítás: - LLC (folyadék-folyadék krom.), - LSC (folyadék-szilárd krom.) Elválasztás mechanizmusa szerint: - Megoszlásos krom., - Adszorpciós krom., - Ionpár kromatográfia (IPC), - Ioncsere kromatográfia (IEC), - Gélkromatográfia (GPC v. EC), - Affintitás kromatográfia

3 Adszorpciós kromatográfia Synder-féle kompetitív modell V S – egységnyi tömegű adszorbens által megkötött mozgófázis térfogat,  ’ – adszorbens aktivitási koefficiense, S o i – komponens megkötődő képessége,  o M – oldószer erősség, A i – komponens adszorpciós felületigénye Adszorbensek apoláris: aktív szén, polimer poláris savas: szilikagél bázikus:  -Al 2 O 3

4 OldószerHexán2-klór- propán Diklór- metán AcetonitrilMetanol  o (SiO 2 ) 0.00.2240.3260.50.735  o (Al 2 O 3 ) 0.00.290.420.650.95 Oldószererősség

5 Megoszlásos folyadék-kromatográfia v i – a kompones móltérfogata  - oldhatósági (Hildebrandt) paraméter Hordozó: diatomaföld, szlilikagél, polimer Állófázis: pl.: Carbowax 400,  -  oxidipropio- nitril, stb. Eluens: apoláris szerves oldószerek, alko- holok, víz, stb. Kémiailag kötött folyadék állófázisok (BPC)

6 Állófázis: RP-C18 1 – benzil-alkohol, 2 – fenol, 3 – 3-fenil-propanol, 4 – 2,4-dimetil-fenol, 5 – benzol, 6 – dietil- o -ftalát

7 Ionpár kromatográfia Fordított fázisú (RP) fázisrendszerben a gyenge savak és bázisok visszatartás nélkül haladnak át az oszlopon. Retenció előidézése lehetséges ionpár képzéssel.

8 Retenciót befolyásoló járulékos tényezők: - Ionpárképző koncentrációja, - Eluens pH.

9 Ioncsere kromatográfia

10 El – ellenion (H + ; OH -,HCO 3 - )

11 Álófázis: Kationcserélő gyanta Szupresszor: Anioncserélő gyanta Állófázis: Anioncserélő gyanta Szupresszor: Kationcserélő gyanta Ionok kromatográfiás elválasztása

12 Gélkromatográfia (Kizárásos kromatográfia) Elválasztás: a komponensek molekulamérete alapján. Állófázis: porózus szilárd anyag. V R – bruttó retenciós térfogat, V 0 – áramlással átöblíthető ürestérfogat, V S – pórustérfogat. A pórusokba behatolni nem képes nagyméretű komponensek esetében V R = V 0. Így K = 0. Kis méretű, az összes pórusba behatoló kom- ponensek esetében V R = V 0 + V S. Így K =1. Minél nagyobb a komponens mérete, annál kisebb mértékű a retenciója.

13 Gélkromatográfiás elválasztás

14 Affinitás kromatográfia Y – térspecifikus (kulcs-zár) komplex kép- zésre képes, állófázis mátrixhoz kötött makromolekula (antitest, fehérje, stb.) Szelektív komplexképzés Az oszlop csak a komplexet képző szubsztrátot tatja vissza.

15 HPLC berendezés felépítése

16 HPLC berendezés Gynkotek M 480 gradiens pumpa : 0.1 – 10 ml/min (0.01 ml/min) Rheodyne 8125 injektor (20  l) TOSOH TSK 6040 UV detektor: 200 – 700 nm (1 nm) Thermo Separation Products RefractoMonitor IV (RI detektor)

17 Folyadék-kromatográfiás pumpák

18 Injektor

19 UV-detektor

20 RI-detektor

21 BIONISIS OPLC 50