Ragadozó atka reprodukciós teszt talajban

Az előadások a következő témára: "Ragadozó atka reprodukciós teszt talajban"— Előadás másolata:

1 Ragadozó atka reprodukciós teszt talajban
OECD 226 Készítette: Magai Zsolt

2 Teszt jellemzése A teszt célja, hogy értékeljük a vegyi anyagok hatását a talajban élő atkafajok (Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer) reproduktivitására. Ezáltal becsülhetjük az adott faj növekedési rátáját. Reproduktivitás itt azt jelenti, hogy hány ‘fiatal’ élőlény marad a teszt végén. Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer reprezentálja a tesztben a ragadozó atkákat. Ez a faj, könnyen beszerezhető, tenyészthető a laboratóriumi körülmények között. A teszt végpontja a reprodukciós ráta (utódok száma edényenként). Időtartam: 14 nap

3 A vizsgálat elve Az atkák a vizsgált anyag különböző koncentrációinak vannak kitéve. A teszt elején 10 felnőtt nőstény egyedet juttatnak a teszt edényekbe (szinkrontenyészetből). A hímeket nem használják fel. A tesztben felhasznált nőstények naposak. A vizsgálat 14. napon ér véget (a nőstények talajba tevésétől számítva). Ekkora érik el a ‘fiatalok’ a deutonymph szakaszt fejlődésükben. Amit mérünk az az, hogy hány ‘fiatal’ egyed van egy kísérleti edényben és emellett túlélő nőstények száma. Meghatározzuk az ECx-et (pl. EC10, EC50) vagy a nem megfigyelhető hatást okozó koncentrációt (NOEC). Előbbi meghatározásához 12 mérési pontot veszünk fel.

4 A Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer
A Lealapidae családjába tartozó atkafaj. Mindenféle talajon megélnek és fő táplálékul egyéb atkák, fonálférgek, collembolák szolgálnak. Élelemhiány esetén váltanak kannibalizmusra. Ízeltlábúak, minden lábon tövis és sörte található, utóbbit ásásra használja. 4 pár lába van, ebből az első pár antennaként funkcionál. A hím 0,55-0,65 mm hosszú, és súlya µg. A nőstény 0,8-0,9 mm hosszú, és súlya µg.

5 Az atkák kb. 7 nap alatt fejlődnek petéből lárvává, és 28-35 naposan használjuk fel a teszthez.
Egy nőstény egyed élhet 100 napig is, ezalatt akár 100 tojást is lerakhat.

6 Vizsgált anyag tulajdonságai
Vízben való oldhatóság log Kow (oktanol-víz megoszlási hányados) Gőznyomás Ezek lehetőleg ismertek legyenek. Ami még fontos lehet: A vizsgált anyag sorsa a talajban, biotikus, abiotikus degradáció. A tesztelés során vízben oldható vagy oldhatatlan anyagokat használunk. A teszt nem alkalmazható illékony anyagokra, azaz azokra, amelyeknek a Henry állandója, vagy a levegő / víz megoszlási hányadosa nagyobb mint egy, vagy olyan anyagokra, amelyeknél a gőz nyomása meghaladja a 0,0133 Pa-t 25 ° C-on.

7 A referencia anyag A referencia anyagra meg kell határozni ECx (EC20, EC50) és/vagy a NOEC értékeket annak bizonyításához, hogy a laboratóriumi vizsgálati körülmények megfelelőek, és ellenőrzésként, hogy a vizsgált szervezetek reakciója idővel nem változott. Két referencia anyagot használnak: Dimetoát (CAS ) Bórsav (CAS )

8 A teszt menete Előszőr létrehozzuk a szinkrontenyészetet.
Az optimális tenyésztési hőmérséklet 20 ± 2 ° C. A generációk nagyrészt fedik egymást. A nőstényeket egy edénybe tesszük, majd adjunk hozzá megfelelő mennyiségű táplálékot. Két-három napig lehetővé tesszük, hogy lepetézzenek, majd eltávolítjuk a nőstényeket. 28-35 nappal később kivesszük a szinkron tenyészetből a hasonló korú kifejlett élőlényeket és a tesztedénybe juttatjuk. Összeállítjuk a talajunkat

9 Ehhez a vizsgálathoz egy mesterséges talajt kell használni
Ehhez a vizsgálathoz egy mesterséges talajt kell használni. A mesterséges talaj áll a következő összetevőkből: 5% tőzegmoha 20% kaolin agyag 75% ipari homok Kiszámítjuk, hogy megfelelő-e a talaj maximális víztartó képessége (20-30%-nak kell lennie, és a későbbiekben nem térhet el ennél 10%-nál jobban. ) S = vízzel telített szubsztrát + cső tömege + szűrőpapír tömege T = tára (+ szűrőpapír tömege) D = szubsztrát száraz tömege TESZTELÉS (10 ‘felnőtt’ nőstény atkára és 20 g mesterséges talajra van szükség mintánként, kontrollonként )

10 14 nap után vége a tesztelésnek
Megszámoljuk a túlélő atkákat (külön a lárvákat, ‘fiatalokat’ és külön a ‘felnőtteket’).

11 Vizsgálati edények és eszközök
A vizsgálati edények cm átmérőjű üvegből vagy más, kémiailag inert anyagból készültek. Csavaros fedeleket előnyben részesítik. Olyan fedél kell, mely megakadályozza az atkák elszökését. Eszközök Szabványos laboratóriumi eszközökre van szükség, különösen a következőkre: Szárító szekrény; Sztereomikroszkóp; pH-mérő; Megfelelő pontosságú mérleg; Megfelelő felszerelés a hőmérséklet szabályozásához; Hőmérséklet-vezérelt inkubátor

12 Vizsgálati jelentés tartalma
Vizsgálati anyag azonosítás (név, CAS-szám) fizikai-kémiai tulajdonságok Tesztorganizmusok azonosítása tenyészet leírása, jellemzése (melyik fejlődési szakaszban vannak a tesztorganizmusok) Vizsgálati körülmények eljárás leírása előkészítés leírása talaj maximális víztartó képessége alkalmazott technológia leírása edények mérete, talaj száraz tömege hőmérséklet, fény intenzitás, sötét-világos ciklus hossza pH és víztartalom mérés táplálék fajtája, etetési időpontok Vizsgálati eredmények Fiatal egyedek száma a teszt végén Felnőtt egyedek száma a teszt végén és ebből mortalitás (%) számítása ECx és/vagy NOEC meghatározása

13 A teszt érvényessége A következő kritériumoknak kell teljesülnie:
Az átlagos ‘felnőtt’ nőstény mortalitás nem haladhatja meg a 20%-ot. Az átlagos ‘fiatalok’ száma egy (10 ‘felnőtt’ nősténynél bevezetett) mérésnél min. 50-nek kell lennie a vizsgálat végén. A fiatal atkáknak a száma ne legyen 30% felett a teszt végén.

14 Forrás OECD GUIDELINE FOR TESTING OF CHEMICALS 226 – Predatory mite (Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer) reproduction test in soil; Képek: