Arabidopsis thaliana tip120/cand1 T-DNS inszerciós mutáns jellemzése.

Az előadások a következő témára: "Arabidopsis thaliana tip120/cand1 T-DNS inszerciós mutáns jellemzése."— Előadás másolata:

1 Arabidopsis thaliana tip120/cand1 T-DNS inszerciós mutáns jellemzése

2 A TIP120 fehérje szerepe a transzkripcióban

3 A fehérjeszintézis fő lépései Fehérje DNS RNS Transzkripció Transzláció

4 Az eukarióta gének transzkripciója Három fő lépés: iniciáció iniciáció elongáció elongáció termináció termináció

5 INICIÁCIÓ A transzkripció megindításához szükséges fehérjefaktorok egy komplexet hoznak létre transzkripciós iniciációs komplex A transzkripció megindításához szükséges fehérjefaktorok egy komplexet hoznak létre transzkripciós iniciációs komplex A komplex kapcsolatba lép a gén promóter régiójával, ezáltal lehetővé teszi az RNS szintézist A komplex kapcsolatba lép a gén promóter régiójával, ezáltal lehetővé teszi az RNS szintézist

6 Hat általános fehérjefaktor vesz részt a transzkripciós iniciációban: TFIID TFIID TFIIA TFIIA TFIIB TFIIB TFIIE TFIIE TFIIF TFIIF TFIIH TFIIH

7 Transzkripciós iniciációs komplex TFIID TATA-box TFIIA TFIIB Polimeráz II TFIIF

8 A TIP120 fehérje TBP-vel kölcsönható faktor TBP-vel kölcsönható faktor 1230 aminosavból álló polipeptidlánc 1230 aminosavból álló polipeptidlánc A polimeráz II és a TFIID TBP alegységét köti össze A polimeráz II és a TFIID TBP alegységét köti össze

9 TBP RNS-polimeráz II TIP120

10 Arabidopsis tip120 gén a gén expressziója igen alacsony a gén expressziója igen alacsony elsősorban osztódó szövetekben aktív elsősorban osztódó szövetekben aktív

11 A CAND1 fehérje szerepe a fehérjebontásban

12 Az ubiquitin erősen konzervált erősen konzervált 76 aminosavból áll 76 aminosavból áll globurális fehérje globurális fehérje Az ubiquitin számos sejtfolyamat,pl. endo- citózis,transzkripció, DNS hibajavítás előfeltétele. Az ubiquitin számos sejtfolyamat,pl. endo- citózis,transzkripció, DNS hibajavítás előfeltétele.

13 ubiquitin E1 E2 E3 célfehérje

14 SCF-komplex Négy alegység: Skp1 Skp1 Cullin/Cdc53 Cullin/Cdc53 F-boksz fehérje ! F-boksz fehérje ! Rbx1/Hrt1/Roc1 Rbx1/Hrt1/Roc1

15 CUL1 Az SCF-komplex összeszerelődését szabályozza Az SCF-komplex összeszerelődését szabályozza Nagy része a TIP120-szal alkot komplexet Nagy része a TIP120-szal alkot komplexet TIP120 a fő cullin kötő fehérje TIP120 a fő cullin kötő fehérje

16 CAND1 Cullin-Associated Nedd8-Dissociated protein1 TIP120=CAND1 TIP120=CAND1

17 A TIP120/CAND1 fehérje tehát részt vesz A TIP120/CAND1 fehérje tehát részt vesz -a transzkripció iniciációjában -a fehérjedegradáció szabályozásában

18 Mutáns növények fenotípusának jellemzése Törpe növés Törpe növés Kisebb virág, kései virágzás Kisebb virág, kései virágzás Redukált szaporítóképesség Redukált szaporítóképesség Gyökérnövekedés intenzitása a normálisnál kisebb Gyökérnövekedés intenzitása a normálisnál kisebb

19

20 A PCR reakció stratégiája T-DNS LB21 H911BH911A5’3’

21 PCR reakció várható eredménye T-DNS inszerció nincs Heterozigóta mutáns Homozigóta mutáns H911A+H911B primerek + + _ H911B+LB21 primerek _ + +

22 H911A+H911B primerekkel végzett reakció eredménye H911B+LB21 primerekkel végzett reakció eredménye dwhet col T-DNS inszerció nincs Heterozigóta mutáns Homozigóta mutáns H911A+H911 B primerek + + _ H911B+LB21 primerek _ + +

23 Összefoglalás Törpenövés, redukált szaporítóképesség Törpenövés, redukált szaporítóképesség T-DNS inszerció tip120/cand1 génben T-DNS inszerció tip120/cand1 génben Gyökérnövekedés kisebb Gyökérnövekedés kisebb Homozigóta inszerció törpe fenotípus Homozigóta inszerció törpe fenotípus