BIOTECHNOLÓGIA D MsC gyakorlat

Az előadások a következő témára: "BIOTECHNOLÓGIA D MsC gyakorlat"— Előadás másolata:

1 BIOTECHNOLÓGIA D MsC gyakorlat
Tervezési feladat

2 oriV: szűk gazdaspecificitás
Deléciós mutagenezis a leolvasási keret sértése nélkül Ar1 oriV oriT oriV: szűk gazdaspecificitás Ar: antibiotikum rezisztencia oriT oriV Ar1 vad típus mutáns poláris hatás ?

3 A FELADAT ÁLTALÁNOS MEGFOGALMAZÁSA
A LEOLVASÁSI KERET MEGSÉRTÉSE NÉLKÜL KI KELL ÜTNI EGY GÉNT EGY BAKTÉRIUMBAN ÉS HELYETTE UGYANEBBEN A BAKTÉRIUMBAN KELL TERMELTETNI A KIÜTÖTT GÉN TERMÉKÉT FÚZIÓS FEHÉRJE FORMÁJÁBAN

4 MEGOLDÁSI SÉMA 1. A megadott célgént tartalmazó genomi lókusz letöltése, a célgén és a környező gének pozíciójának kijelölése Eszköz: internet, adatbankok pl. NCBI, Genbank

5

6

7

8

9

10 Ekkor a gén 3 043 bp-nál kezdődik és 1 485 bp-nál ér véget
complement( ) Csak a – régió kell Ekkor a gén bp-nál kezdődik és bp-nál ér véget Complement!

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

22

23

24

25

26

27

28

29

30

31

32

33

34

35

36 oriV: szűk gazdaspecificitás
Deléciós mutagenezis a leolvasási keret sértése nélkül Ar1 oriV oriT oriV: szűk gazdaspecificitás Ar: antibiotikum rezisztencia oriT oriV Ar1 vad típus mutáns poláris hatás ?

37 DE! A két szakasznak nagyjából egyforma hosszúnak kell lennie,
Hogy azonos legyen a rekombinációs valószínűség bp bp

38 A VEKTOR KIVÁLASZTÁSA Szempontok:
Az adott feladathoz szabad-e, kell-e replikálódnia a vektornak a célsejtben Olyan antibiotikum rezisztenciát hordozzon, mely antibiotikumra a sejt érzékeny Milyen módon lehet bejuttatni a célsejtbe DNS-t

39

40

41

42

43 PROKARIÓTA EXPRESSZIÓS VEKTOR ELEMEI
SZF TSZE Fúziós partner GS Pr  SD kódoló szekvencia TT -35 -10 STOP kodon UAAU UGA UAG TTGACAN17TATAAT START kodon AUG GUG UUG 5’ UAAGGAGGN(3-11) AR ORI Pr: promóter TT: transzkripciós terminációs szignál, SZF: szabályozó fehérje,, TSZE: transzlációt szabályozó elemek, SD: Shine-Dalgarno szekvencia, AR: antibiotikum rezisztencia, ORI: replikációs origo GS: gazdasejt