Az első észleléstől az intenzív osztályig Diagnosztikus lehetőségek

Az előadások a következő témára: "Az első észleléstől az intenzív osztályig Diagnosztikus lehetőségek"— Előadás másolata:

1 Az első észleléstől az intenzív osztályig Diagnosztikus lehetőségek
Tirczka Tamás, Tóth Ákos OEK Bakteriológia I. 17. Országos Védőoltási Továbbképző Tanfolyam

2 Mikroszkópos vizsgálat
A festés rendszerint Gram-szerint történik. A vizsgálat érzékenysége többek között függ a kórokozó baktérium típusától és a liquorban levő koncentrációjától. Ha a baktérium csíraszáma 103/ml-nél nem nagyobb, a vizsgálat érzékenysége mindössze 25%- os, 105/ml csíraszám felett már 90%-os. Azon beteganyagban, amelyik kórházba kerülés előtt már kapott valamilyen antibiotikumot, a liquor direkt mikroszkópos vizsgálatának az érzékenysége 60% vagy az alatti. Bakteriális meningitis gyanújánál a liquor üledék kb. 10 percig tartó átpásztázása az a minimális idő, ami után a negativitásról nyilatkozhatunk. Alacsony a direkt mikroszkópos vizsgálat érzékenysége Listeria meningitisben is. Cryptococcus neoformans által okozott meningitisben a tusfestéses vizsgálat érzékenysége 50-75%, AIDS-es betegekben ennél magasabb is lehet. 17. Országos Védőoltási Továbbképző Tanfolyam

3 Tenyésztés Kezeletlen esetekben jó technikai feltételek mellett, valamint a klinikai és mikrobiológiai osztály rendszeres együttműködésével a tenyésztés érzékenysége elérheti a 90%-ot, antibiotikummal már előkezelt esetekben a 60%-ot. A tenyésztés specificitása: elméletileg a vérben előforduló baktériumok mindegyike megtapadhat az agyhártyákon. A liquorból kitenyészett minden baktérium kóroki szerepe mérlegelendő. Meningitis tuberculosa kezeletlen eseteiben a tenyésztés érzékenysége nem nagyobb 80%-nál. Bakteriális meningitisekben célszerű a liquor cerebrospinális tenyésztését hemokultúrával kiegészíteni. A középfülből és a sinusokból származó, valamint – nem megfelelő fertőtlenítés esetén – lumbálpunkció során baktériumok bekerülhetnek a liquortérbe így a liquorból kitenyészett minden baktérium kóroki szerepe mérlegelendő. A bakteriológiai (vagy mikológiai) tenyésztés pozitivitása mögött a klasszikus meningitisek mellett még számos klinikai szituáció állhat: trauma, postoperativ neuroinfekciós komplikációk, cranialis, spinális, epiduralis abscessus, subduralis abscessus, a sinusok szeptikus thrombophlebitise, stb. 17. Országos Védőoltási Továbbképző Tanfolyam

4 Antigén detektáló tesztek
A liquorban levő szolubilis antigének immunszerológiai, illetve bakteriális DNS direkt kimutatása valamilyen molekuláris biológiai technikán alapuló módszerrel. Az antigén detektáló tesztek a meningitist okozó baktériumok és gombák poliszacharid természetű antigénjeit mutatják ki a vérben, liquorban, vizeletben és egyéb testnedvekben. 17. Országos Védőoltási Továbbképző Tanfolyam

5 Szerotipizálás A vérből, liquorból izolált törzsek szinte minden esetben szerotipizálhatók (vagyis rendelkeznek tokkal). A felső légutakból kitenyészett törzsek többnyire a tok alapján nem csoportosíthatók. Meg kell jegyezni, hogy a vérből illetve liquorból izolált törzsek szilárd táptalajokon is igen gyorsan elveszíthetik poliszacharid tokjukat, ezért a szerotipizálást lehetőleg friss, órás tenyészetből kell elvégezni. A meningicoccus membránproteinek (segítségével tapad meg a sejtek felszínén, majd hatol be a szövetekbe. A poliszacharid tok ebben megakadályozza, ezért mielőtt letapadna a felső légutak epithel sejtjeihez, elveszíti a tokját. A szervezetbe hatolva viszont ezt a tokot újraképzi, mert az biztosítja számára a fagocitózis elleni védelmet. Ezzel magyarázható, hogy a vérből, liquorból izolált törzsek szinte minden esetben szerotipizálhatók (vagyis rendelkeznek tokkal), addig a felső légutakból kitenyészett törzsek többnyire a tok alapján nem csoportosíthatók. 17. Országos Védőoltási Továbbképző Tanfolyam

6 Neisseria meningitidis és a Streptococcus pneumoniae specifikus génszakaszának kimutatása invazív mintákból Real-Time PCR eljárással (OEK-ben alkalmazott metodika) Ismert tény, hogy a meningococcus kitenyésztése a beteg vizsgálati anyagából nem mindig sikeres. Új, érzékenyebb diagnosztikai lehetőség a N. meningitidis (és a S. pneumoniae) vérből és liquorból történő direkt kimutatása PCR technikával. A méréseink kalibrálásánál a legalacsonyabb kimutatható baktériumkoncentráció, ami reprodukálható is volt, 15 CFU/ml-nek adódott. Ismert tény, hogy a meningicoccus kitenyésztése a beteg vizsgálati anyagából nem mindig sikeres. Új, érzékenyebb diagnosztikai lehetőség a N. meningitidis (és a S. pneumoniae) vérből és liquorból történő direkt kimutatása PCR technikával. Más 91, invazív mintákban előforduló kórokozó örökítő anyagával nem ad keresztreakciót az erre a szakaszra tervezett polimeráz láncreakció. Mi teljes egészében a manchesteri Meningococcal Reference Unit által kidolgozott módszert állítottuk be. Vizsgálataikból kiderül, hogy a módszer érzékenysége 88,4 %, ami minden más korábbi rendszernél jobb. A megfelelően elkészített primerpárokon kívül a felamplifikálodó szakaszra tervezett Taqman próba is biztosítja a reakció specifikusságát. A méréseink kalibrálásánál a legalacsonyabb kimutatható baktériumkoncentráció, ami reprodukálható is volt, 15 CFU/ml-nek adódott. A vizsgálat a baktérium örökítő anyagának kimutatására irányul, aminek koncentrációja nem ad pontos információt a mintában található életképes baktériumok számára. Így, bár quantitatív mérésről van szó, nem ismertetjük az eredményben a mért koncentrációt, csak azt, hogy mekkora annak érzékenysége. 17. Országos Védőoltási Továbbképző Tanfolyam

7 Az első tünetek jelentkezésekor megkezdett antibiotikum terápia tovább növelheti a hagyományos tenyésztéses eljárással nem diagnosztizálható meningococcus/pneumococcus fertőzések számát. A vérből/liquorból történő PCR vizsgálat még az antibiotikum terápia megkezdése után három- kilenc nappal is alkalmas lehet a meningococcus/pneumococcus nukleisav kimutatására. 17. Országos Védőoltási Továbbképző Tanfolyam

8 A módszer jelentősége A PCR módszer ily módon segítséget jelent az etiológiai diagnózis felállításához, valamint a járványügyi helyzet nyomon követéséhez. 17. Országos Védőoltási Továbbképző Tanfolyam

9 Köszönöm a figyelmet! 17. Országos Védőoltási Továbbképző Tanfolyam