A Zyflamend hatása a gyulladásos mechanizmusokra: rákmegelőzés és terápia Bharat B. Aggarwal, Ph.D. Cytokine Research Laboratory, Department of Experimental Therapeutics, The University of Texas M.D. Anderson Cancer Center, Houston, Texas, U.S.A. 3rd Annual Alan G. Johnson Memorial Conference on Ethnomedicine, Health and Environmental Conservation, Luna Nueva, Costa Rica May 1st, 2009; (40m) 1

szív- és érrendszeri megbetegedések 2-es típusú cukorbetegség A legtöbb betegség kialakulásában fontos szerepet játszanak a gyulladásos mechanizmusok rák szív- és érrendszeri megbetegedések tüdőbetegségek idegrendszeri megbetegedések gyulladás Alzheimer-kór autoimmun betegségek 2-es típusú cukorbetegség izületi gyulladás 25

Dandona P, Aljada A, Bandyopadhyay A. Gyulladás: a kapcsolat az inzulin-rezisztencia, az elhízás és a cukorbetegség között Dandona P, Aljada A, Bandyopadhyay A. Trends in Immunology 2004 Jan;25(1):4-7. 169

A gyulladástól a betegségig és a depresszióig: Mikor az immunrendszer legyőzi az agyat Dantzer R, O'Connor JC, Freund GG, Johnson RW, Kelley KW. Nature Reviews Neurosciences. 2008 Jan;9(1):46-56. 172

Egy orvos a Római Birodalomból (I. század): Mi a gyulladás? Cornelius Celsus, Egy orvos a Római Birodalomból (I. század): hő (calor) fájdalom (dolor) vörösség (rubor) daganat (tumour) 21

vörösség, daganat, hő és fájdalom A gyulladás és a rák vörösség, daganat, hő és fájdalom Rudolf Virchow (1821-1902; 1850-ben) Virchow patológiai laboratóriuma Wurzburg-ban (Németország) A gyulladást kapcsolatba hozta az izületi az érelmeszesedéssel, a reumás izületi gyulladással, a sclerosis multiplex-szel, a rákkal, az asztmával és az Alzheimer-kórral. Forrás: Heidland A et al, History of Nephrology, 2006 22

A gyulladások „itis”-re végződnek Arthritis…………………. Az izületek Bronchitis………………. A hörgők Sinusitis………………… A homloküreg Gastritis………………. A gyomor Esophagitis…………….. A nyelőcső Pancreatitis…………….. A hasnyálmirigy Meningitis………………… Az agy Rhinitis…………………… Az orr Gingivitis………………… A fogíny GYULLADÁSA 23

A feltételezés: A legtöbb betegség esetében a gyulladás kulcstényezője az NF-B aktiválása, az NF-B gátlása megelőzheti/késleltetheti a betegségek kialakulását (az aktivált B sejtek sejtmag faktor kappa-rövidláncú erősítője egy DNS-transzkripciót szabályzó fehérje-komplex) 30

Gyulladásos hálózatok a daganatos betegségekben TNF Túlélés és kemorezisztencia: c-FLIP, Bcl-xL IAP-1, IAP-2, XIAP, survivin Csonttömeg-vesztés RANKL, IL-1, TNF NF-B Áttétképződés Kemokinek sejtburjánzás: Cyclin D1, 5-LOX, COX-2, IL-6 IL-6 STAT 3 Érképződés VEGF Forrás: Aggarwal BB, et al. Inflammation and cancer: How hot is the link? Biochemical Pharmacology, 72, 2006, 1605-21 27

NF-kB által szabályozott gének Kumar A, Takada Y, Boriek AM, Aggarwal BB. Journal of Molecular Medicine 2004;82:434-48. 36

A tumorképződés molekuláris folyamata Stressz NF-kappaB Gyulladás Rák 37

Az FDA által engedélyezett rákellenes gyógyszerek Gyógyszer ráktípus target OS (mo) év költség (USD/év) Erbitux (cetuximab) SCCHN, CRC EGFR 1.5 2004 ~144,000 Iressa (gefitinib) NSCLC EGFR 4.3 2003 ~26,000 Tarceva (erlotinib) NSCLC, PC EGFR 6.7, 6.4 2004 ~43,300 Vectibix (panitumumab) CRC, NSCLC EGFR None 2006 ~50,400 Herceptin (trastuzumab) mellrák HER2 None 1998 ~69,500 Tykerb (lapatinib ditosylate) mellrák HER1/2 None 2007 ~44,400 Sutent (sunitinib) GIST, ARCC VEGFR NDA 2006 ~48,000 Nexavar (sorafenib) HCC, RCC VEGFR 10.7 2005/7 ~77,000 Avastin (bevacizumab) CRC, BC, NSCLC VEGF 4.7 2004 ~57,600 Velcade (bortezomib) MM, MCL Proteasome 6 2008 ~43,500 Gleevec (imatinib) BP-CML Bcr-abl 6.5 2001 ~61,000 Sprycel (dasatinib) ALL, CML Bcr-abl N/A 2006 ~47,000 Tasigna (nilotinib) CP-CML Bcr-abl 2007 Celebrex (celecoxib) FAP COX-2 Rituxan (rituximab)* NHL CD20 1.5 1997 ~143,000 Revlimid (lenalidomide) MM TNF, 2006 ~97,200 Thalomid (thalidomide) MM TNF 18 2006 ~11-66,000 BBA-12-9-08

A kemopreventív készítmények szemben támasztott feltételek: Az egészséges emberekben nem fejthetnek ki toxikus hatást. Sok szervben/szövetben nagy hatékonyságúnak kell lennie. Szájon át szedve jó biohasznosulású legyen. Hatásmechanizmusának ismertnek kell lennie. Könnyen hozzáférhető kell legyen. Olcsónak kell lenniük. A legtöbb ember számára elfogadható legyen. BBA-8-24-08

Zyflamend: A varázslatos gyógynövény Szent bazsalikom (12.8%) urzolsav kurkuma (14.1%) kurkumin Curcuma longa Ocimum sanctum gyömbér (12.8%) Gingerol rozmaring (19.2%) rozmaringsav, kámfor, Borneol, Cineol Rosmarinus officinalis Zingiber officinalis Ártéri japánkeserűfű (10.2%) Rezveratrol, Timol zöldtea (12.8%) Epigallocatechin gallate Camellia sinensis Polygonum cuspidatum Kínai aranyfonál (5.1%) Berberin borbolya (5.1%) Berberin Berberis vulgaris Coptis Chinensis bajkáli csukóka (2.5%) Baicalin, Baicalein, Wogonin Oregánó (5.1%) Timol Scutellaria baicalensis Origanum vulgare

A RANKL-indukált osteoclast képződés visszaszorításával a Zyflamend megakadályozhatja a csonttömeg-vesztést RANKL (5 nM) RANKL+ Zyflamend (0.8 mg/ml) Medium 40 80 120 160 - 0.2 0.4 0.8 - 0.2 0.4 0.8 Zyflamend (mg/ml) - - - - + + + + RANKL TRAP+ Osteoclasts (numbers/well)

Inváziós aktivitás (a gátlás egységében kifejezve) A TNF-indukált inváziós aktivitás gátlásával a Zyflamend megelőzheti a tumor áttételek képződését Inváziós aktivitás (a gátlás egységében kifejezve) - + + + + TNF - - 0.01 0.03 0.1 Zyflamend (mg/ml) 0.5 1 1.5 2 2.5

A TNF-indukált apoptózis elősegítésével a Zyflamend javíthatja a kemoterápiát az emberi mieloid sejtekben Kontroll 2 % 15 % Zyflamend + TNF 45 % Zyflamend TNF 12 %

A taxol-indukált apoptózis elősegítésével a Zyflamend javíthatja a kemoterápiát az emberi mieloid sejtekben Kontroll 2 % 10 % Taxol (1 nM) 30 % Zyflamend + Taxol 75 % Zyflamend (0.5 mg /ml)

A doxorubicin-indukált apoptózis elősegítésével a Zyflamend javíthatja a kemoterápiát az emberi mieloid sejtekben Kontroll 2 % 15 % Doxorubicin (300 nM) 25 % Zyflamend+Doxorubicin 80 % Zyflamend (0.5 mg /ml)

Az NF-  B aktiválás gátlásával a Zyflamend gátolhatja a tumorképződést 0 1 0 0.01 0.1 0.5 1 Zyflamend (mg/ ml) NF-B 1 0.8 7.8 7.8 7.8 3.3 1 -szeres gátlás

A Zyflamend azonnal gátolja az NF-B aktiválást 0 30 +30 +15 +5 0 -5 -15 - 30 TNF (min) NF-kB 1 8.1 8.1 8.1 4.3 2.2 1 1 0.8 -szeres gátlás

A Zyflamend gátolja a dohányfüst-indukált NF-B aktiválást az emberi mieloid sejtekben - + - + CSC - - + + Zyflamend NF-B 1 4.5 1.4 2.4 -szeres gátlás

A Zyflamend gátolja az ofantiapoptikus géntermékek expresszióját Kontroll Zyflamend 0 2 4 8 12 24 0 2 4 8 12 24 TNF time (h) IAP1 IAP2 Survivin -actin 0 2 4 8 12 24 0 2 4 8 12 24 TNF time (h) Bfl-1/A1 Bcl-2 -actin 0 2 4 8 12 24 0 2 4 8 12 24 TNF time (h) Bcl-xL cFLIP TRAF1 XIAP -actin

A Zyflamend gátolja az angiogenikus géntermékek expresszióját Kontroll Zyflamend 0 2 4 8 12 24 0 2 4 8 12 24 TNF time (h) VEGF -actin A Zyflamend Avastin lenne?

A Zyflamend Celebrex lenne? A Zyflamend csökkenti a gyulladást okozó géntermékek koncentrációját a mieloid sejtekben Kontroll Zyflamend 0 2 4 8 12 24 0 2 4 8 12 24 TNF time (h) COX-2 -actin A Zyflamend Celebrex lenne?

A Zyflamend gátolja az áttétképző géntermékek expresszióját a mieloid sejtekben 0 2 4 8 12 24 TNF time (h) -actin ICAM-1 MMP-9 0 2 4 8 12 24 Kontroll Zyflamend

A hasnyálmirigyrák kemoszenzibilizálása Zyflamenddel Döntse el, hogy a Zyflamend gátolja-e a hasnyálmirigyrák sejtek sejtburjánzását. Döntse el, hogy a Zyflamend elősegíti-e a hasnyálmirigyrák sejtek gemcitabin-indukált apoptózisát. Döntse el, hogy a Zyflamend gátolja-e a hasnyálmirigyrák sejtek gemcitabin-indukált NF-kB aktiválását. Döntse el, hogy a Zyflamend csökkenti-e a gemcitabine által kiváltott, NF-kB-szabályzott géntermékek koncentrációját a hasnyálmirigyrák sejtekben. Döntse el, hogy a Zyflamend javítja-e a gemcitabine hasnyélmirigyrák ellen kifejtett tumorgátló hatását az ortotóp modellben. Döntse el, hogy a Zyflamend csökkenti-e a rák biomarkerek (NF-kB, COX2, VEGF, Ki-67, cyclin D1, c-myc, ICAM-1, MMP-9, COX2, surviving, bcl-2, bcl-xl, IAP-1, IAP-2, CD31) koncentrációját a hasnyálmirigyrák szövetben az ortotóp modell alapján.

A Zyflamend gátolja az emberi hasnyálmirigyrák sejtek sejtburjánzását Panc1 MIAPaCa-2 100 80 60 40 20 0.01 0.1 0.5 1 Életképes sejtek száma (%, 48 óra után) Colo357 100 80 60 40 20 0.01 0.1 0.5 1 (mg/ml) 100 100 80 80 60 60 AsPC1 BxPC3 40 40 20 20 0.01 0.1 0.5 1 0.01 0.1 0.5 1 Zyflamend

A Zyflamend gátolja a hasnyálmirigyrák sejtek sejtburjánzását 100 400 BxPC3 MIA PaCa-2 2 4 6 PANC-1 Sejtek száma (a kiindulási sejtszám %-ában) 200 300 500 AsPC-1 idő (napok) kontroll 25 g/ml 100 g/ml

A Zyflamend gátolja négy különböző típushoz tartozó emberi hasnyálmirigyrák sejtek sejtburjánzását in-vitro (laboratóriumi körülmények között) (g/mL) 0. nap 2. nap 4. nap 6. nap --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- AsPC-1 0 100.00 ± 1.61 165.27 ± 3.40 260.77 ± 1.47 394.86 ± 11.18 25 100.00 ± 0.86 161.81 ± 1.71 219.74 ± 3.60 327.83 ± 3.88 100 100.00 ± 0.56 116.83 ± 1.48 124.92 ± 4.23 197.73 ± 2.97 BxPC-3 0 100.00 ± 2.58 171.96 ± 3.90 260.89 ± 3.74 326.94 ± 3.85 25 100.00 ± 2.86 152.75 ± 1.60 201.83 ± 1.90 287.91 ± 1.68 100 100.00 ± 0.64 118.89 ± 2.43 104.81 ± 2.59 131.85 ± 4.84 MiaPaCa-2 0 100.00 ± 2.00 211.70 ± 1.36 307.92 ± 2.95 477.74 ± 5.86 25 100.00 ± 2.30 194.70 ± 3.65 277.65 ± 2.96 361.74 ± 2.10 100 100.00 ± 0.66 103.83 ± 1.53 116.86 ± 2.03 123.75 ± 2.33 PANC-1 0 100.00 ± 1.86 200.81 ± 2.46 317.81 ± 2.83 455.87 ± 3.53 25 100.00 ± 0.80 181.93 ± 3.83 271.89 ± 1.84 421.69 ± 5.67 100 100.00 ± 2.09 115.73 ± 1.85 145.97 ± 3.30 185.89 ± 0.81

A Zyflamend javítja a gemcitabine apoptózist kiváltó hatását az emberi hasnyálmirigyrák sejtekben in-vitro (észteráz-festéses módszerrel) 100 BxPC-3 AsPC-1 Kontroll 80 Zyflamend 60 40 Gemcitabine 20 Zyflamend + Gemcitabin Apoptózis (%) 100 MIA PaCa-2 PANC-1 80 60 40 20

(DNS-megkötéses módszerrel) Fig. 3 A Zyflamend gátolja a fontos szerepet játszó NF-kB aktiválást az emberi hasnyálmirigyrák sejtekben in-vitro (DNS-megkötéses módszerrel) 0 25 100 (g/ml) NF-B

Fig. 4 A Zyflamend gátolja az emberi hasnyálmirigyrák sejtek NF-kB által szabályozott, sejtburjánzásos, antiapoptózisos, gyulladást okozó, ér- és áttétképző géntermékeinek expresszióját 0 25 100 g/ml Cyclin D1 c-Myc -actin COX-2 0 25 100 g/ml CXCR4 VEGF MMP-9 ICAM-1 0 25 100 g/ml Bcl-2 IAP-1 Survivin 0 25 100 g/ml

Injekció (MIA PaCa-2, luc) Egy állatkísérlet vizsgálati protokollja Injekció (MIA PaCa-2, luc) 1 X 106 sejt/egér Kontroll Naponta 1 g/kg Zyflamend; gyomorszondán át; Gemcitabine 25 mg/kg; ip hetente kétszer Zyflamend + Gemcitabine véletlenszerűsítés Kezelés leállítása A vizsgálati állatok felboncolása D -7 D 0 D 28 D 31 I II III IV

Az állatkísérlet eredményei Napok száma 29 22 16 7 Zyflamend Kontroll Gemcitabin Zyflamend + Gemcitabin

Az állatkísérlet eredményei C 1 2 3 4 5 6 7 8 2 4 6 8 10 12 14 Vehicle Gemcitabine Zyflamend Zyfla + Gem * Kontroll Gemcitabine Zyflamend Zyfla + Gem Tumor térfogat foton/cm2/sec/steradian x 104 Tumortérfogat (cm3) * *P<0.001 7 16 22 29 napok száma

Immuno Hisztobiokémia? Fig. 5 NEXT Immuno Hisztobiokémia?

A vastagbélrák kemoszenzibilizálása Zyflamenddel Döntse el, hogy a Zyflamend gátolja-e a vastagbélrák sejtek sejtburjánzását. Döntse el, hogy a Zyflamend elősegíti-e a vastagbélrák sejtek 5FU-indukált apoptózisát. Döntse el, hogy a Zyflamend gátolja-e az 5FU-indukált NF-kB aktiválást a vastagbélrák sejtekben. Döntse el, hogy a Zyflamend gátolja-e az 5FU által kiváltott, NF-kB –szabályzott géntermékek expresszióját a vastagbélrák sejtekben. Döntse el, hogy a Zyflamend javítja-e az 5FU vastagbélrák ellen kifejtett tumorgátló hatását az ortotóp modell alapján. Döntse el, hogy a Zyflamend csökkenti-e a rák biomarkerek (NF-kB, COX2, VEGF, Ki-67, cyclin D1, c-myc, ICAM-1, MMP-9, COX2, surviving, bcl-2, bcl-xl, IAp-1, IAP-2, CD31) koncentrációját a vastagbélrák szövetekben az ortotóp modell alapján.

Az érképződés visszaszorítása Zyflamenddel Döntse el, hogy a Zyflamend gátolja-e az emberi köldökvéna endotéliás sejtek (HUVEC) sejtburjánzását. Döntse el, hogy a Zyflamend gátolja-e a VEGF-indukált HUVEC sejt-migrációt. Döntse el, hogy a Zyflamend gátolja-e a daganatos sejtek áttétképződését. Döntse el, hogy a Zyflamend gátolja-e a HUVEC sejtek gümőképződését. Döntse el, hogy a Zyflamend gátolja-e a VEGF-indukált HUVEC AKT aktiválását. Döntse el, hogy a Zyflamend gátolja-e a VEGF expressziót a HUVEC sejtekben. Döntse el, hogy a Zyflamend gátolja-e a VEGF-R2 expressziót a HUVEC sejtekben. Döntse el, hogy a Zyflamend gátolja-e a GSK-3b aktiválásátt a HUVEC sejtekben. Döntse el, hogy a Zyflamend gátolja-e a tumor sejtek migrációját, és a pAKT expressziót a HUVEC sejtekben. Döntse el, hogy a Zyflamend gátolja-e az ex-vivo érképződést a CAM -vizsgálatban.

A Hemeoxigenáz (HO1)-1 szabályozása Zyflamenddel Döntse el, hogy a Zyflamend fokozza-e HO-1 képződését. Állapítsa meg, hogy a Zyflamend milyen mechanizmussal fokozza a HO-1 képződését.

A rák egy megelőzhető betegség: jelentős életmódváltoztatásokra van szükség 40 35 30 30 A rák előfordulási gyakorisága (%) 20 14-20 18 10 5-10 7 dohányzás táplálkozás elhízás fertőzések genetikai hajlam környezetszennyezés és sugárzások HK 04-14-2008 18

Khob Khun Krab Thank you! Terima Kasih Kiitos! Gracias! Merci Shalom! Arigato! Shei-shei! Do Jeh! Danke! Gamsa hamnida! Namaste! 159

A hasnyálmirigyrák kemoszenzibilizálása Zyflamenddel (ugyanaz, mint a 27. fólia) Döntse el, hogy a Zyflamend gátolja-e a hasnyálmirigyrák sejtek sejtburjánzását. Döntse el, hogy a Zyflamend elősegíti-e a hasnyálmirigyrák sejtek gemcitabin-indukált apoptózisát. Döntse el, hogy a Zyflamend gátolja-e a hasnyálmirigyrák sejtek gemcitabin-indukált NF-kB aktiválását. Döntse el, hogy a Zyflamend csökkenti-e a gemcitabine által kiváltott, NF-kB-szabályzott géntermékek koncentrációját a hasnyálmirigyrák sejtekben. Döntse el, hogy a Zyflamend javítja-e a gemcitabine hasnyélmirigyrák ellen kifejtett tumorgátló hatását az ortotóp modellben. Döntse el, hogy a Zyflamend csökkenti-e a rák biomarkerek (NF-kB, COX2, VEGF, Ki-67, cyclin D1, c-myc, ICAM-1, MMP-9, COX2, surviving, bcl-2, bcl-xl, IAP-1, IAP-2, CD31) koncentrációját a hasnyálmirigyrák szövetben az ortotóp modell alapján.

A hasnyálmirigyrák kemoszenzibilizálása Zyflamenddel Vizsgálatvezető: Bharat Aggarwal, Ph.D. A téma címe: A hasnyálmirigyrák kemoszenzibilizálása Zyflamenddel Kezdési időpont: 2008. júl. 30. A vizsgálati jelentés elkészültének dátuma: 2009. jan. 14.