Különböző spéci mikroszkópok és festési eljárások Mikroszkópia Különböző spéci mikroszkópok és festési eljárások Készítette: Rajnai Tamás

Mikroszkópia története mikron = kicsi szkopein = nézni Mikroszkópia: szemmel láthatatlan tárgyak mikroszkópos vizsgálata Első mikroszkóp: ~ 1600: Hans Lippershey, Hans Janssen, Zacharias Janssen

Mikroszkópok fajtái: Optikai elméletet használó: Mintán áthaladó/visszaverődő sugarakat egy optikai rendszer felnagyítja Binokuláris/szimpla Fajtái: összetett fénymikroszkópok (max kb. 1500X, elméleti felbontóképesség 0,2 mikrométer ), szetereomikroszkópok, Elektronmikroszkópok (vákuum kell)

Sztereomikroszkóp Elektronmikroszkóp

Mikroszkópok fajtái Speciális fénymikroszkópok: Ultraibolya-mikroszkóp Ultramikroszkóp Fáziskontraszt-mikroszkóp Lumineszcencia-mikroszkóp Konfokális pásztázó mikroszkóp Polarizációs mikroszkóp Binokuláris mikroszkóp Sztereomikroszkóp

Mikroszkópok fajtái Elektronmikroszkópok: Pásztázó elektronmikroszkóp Transzmissziós elektronmikroszkóp

Elektronmikroszkóp

Mikroszkópok fajtái: Pásztázószondás mikroszkópok mikroszkopikus sugárszondát használnak a felület feltérképezésére : szondasugár + detektor: kölcsönhatás alapján: Atomerő mikroszkóp Elektrosztatikus mikroszkóp Mágneses erőmikroszkóp Alagútelektron-mikroszkóp Közeli mező optikai mikroszkópia Pásztázó elektronmikroszkóp Egyéb: akusztikus mikroszkóp: Hanghullámmal, minta hangvezetését méri

Fénymikroszkópia Látható fény segítségével Optikai lencse használatával Felfogó: szem, fotolemez, digitális képalkotó eszköz Korlátok: sötét vagy erős fényvisszaverésű vizsgálandó felület kell Diffrakció miatt: max felontóképesség 0,2 mikrométer Fókuszsíkól kieső pontok csökkentik a kép tisztaságát

Egy eljárás menetének bemutatása mikroorganizmusokra: 1. Tárgylemez tisztítása: zsírtalanítás 96%-os alkohollal, majd hőkezelés (max 60-70 °C-on) 2. Preparátum rögzítése (sejtek megtapadása a tárgylemezen) Sok rögzítési eljárás ismeretes; egyik legegyszerűbb: hővel való rögzítés Megjegyzés: finom ultracellulális részletek vizsgálatakor nem alkalmazható, mert a sejt ezen részében durva változásokat okoz a hő 3. Festés: egyszerű vagy összetett festési eljárással Pozitív vagy negatív festés Egyszerű: Polikróm festés, mikroanalitikai festések és indikáló festések Összetet: Differenciáló festések

Festési eljárások Láthatóbbá tehetőek velük a minták Fluoreszcens festékek: Immunfestés Zöld fluoreszcens fehérje pH alapján (mikroorganizmusok festéséhez): Bázikus színezőanyagok (metilénkék, fukszin, malahitzöld, kristályibolya, neutrálvörös) Savas színezőanyagok (eozin) Semleges színezőanyagok (rhodamin B)

Gram-pozitív baktérium: Gram-negatív baktérium:

Konkrét alkalmazás: mikroorganizmusok kimutatása: Bacillus cereus és Pseudomonas fluorescens A megfelelően előkészített tárgylemezre 1 csepp vizet cseppentünk Ebben szuszpendálunk 1-1 kacsnyit az előre kitenyésztett baktériumtenyészetekből (Bacillus cereus és Pseudomonas fluorescens) Alapos elkeverés, és a tárgylemezen minél vékonyabb rétegben történő szélesztés után a készítményt láng felett rögzítjük. Kihűlés után a festést az alábbi séma szerint végezzük: Festés genciánibolya-oldattal 1 percen át Vizes öblítés Pácolás Lugol-oldattal 1 percen át Színtelenítés 96 %-os alkohollal 0,5 percen át Kontrasztfestés szafraninnal 1 percen át Vizes öblítés, szárítás

A készítményt immerziós objektívvel vizsgáljuk. Benne a Bacillus cereus baktériumok kék színű (Gram-pozitív), a Pseudomonas fluorescens sejtek pedig piros színű (Gram-negatív) pálcikaként mutatkoznak. A preparátum értékelésekor tekintettel kell lenni arra a tényre,hogy a festés eredménye függ a tenyészet korától is. Gram-pozitív baktériumok idősebb tenyészete néha Gram-negatív jelleget mutathat. Bacillus cereus Pseudomonas fluorescens

Források: Írott források: Bruno P. Kremer – A mikroszkóp használata, Geobook Hungary Kiadó, 2008. Öveges József- A mikroszkóp és használata http://www.hefop.u_szeged.hu/hefop_kk/documents/Tananyag/EKF/Okologiai_es_kornyezetelemzesi_komplex_terepgyak.pdf http://hu.wikipedia.org/wiki/Mikroszk%C3%B3pia http://www.taki.iif.hu/hungarian/soilbio/halbrittera/mikro.html picasso.elte.hu/microscopy/pozsgai2005.ppt

Források: Képek: archive.microbelibrary.org textbookofbacteriology.net makszutov.hu auroscience.hu alphaoptika.hu mikroszkop.network.hu elektro-optika.hu mokkka.hu sirbuday.hu