Listeria monocytogenes

Slides:



Advertisements
Hasonló előadás
Az élelmiszerek mikrovilága
Advertisements

Kémiai reakciók és energia az élő szervezetekben
OXIDOK TESZT.
Enterobaktériumok, Coliformok, E. coli, és Salmonella kimutatása
Táplálékok, tápanyagok
Karbonát-, foszfát-, nitrátionok
Tisztítás, fertőtlenítés
ACTINOMYCES NEMZETSÉG
Szabad aminosavak termelésének kimutatása a talajmikroorganizmusok tenyészetében.
Antibiotikumok kimutatása a talajból
Vér.
KOMETABOLIZMUS. A fogalom tisztázása Régóta ismert tény, hogy a mikroorganizmusok képesek átalakítani szerves vegyületeket, de a termék felhalmozódik.
SZÉN-MONOXID.
II. divízió: Firmicutes (Gram-pozitív baktériumok)
A nyersanyagban rejlő veszélyek
SÓOLDATOK KÉMHATÁSA PUFFEROLDATOK
A HIDROGÉN.
POLISZACHARIDOK LEBONTÁSA
Sav bázis egyensúlyok vizes oldatban
BAKTÉRIUMOK TENYÉSZTÉSE
Cellulóz Cserés Zoltán 9.c.
V. A vanádium-csoport Nb régen columbium Előfordulásuk, ásványaik
Cellulóz-acetát lágyítása ε-kaprolaktonnal Katalizátortartalom hatása a lágyításra Készítette: Kiss Elek Zoltán Témavezető: Dr. Pukánszky Béla Konzulens:
Egy folyékony mintában valamilyen baktérium koncentrációját szélesztést követően agarlemezes telepszámlálással határozzuk meg. Tízes alapú hígítási sort.
BRUCELLA NEMZETTSÉG.
LISTERIA NEMZETSÉG Jelenleg 7 fajt különböztetnek meg:
A talajtermékenység növelésének új, lehetőségei napjainkban Dr. Biró Borbála 1, P. Angerer Ildikó 1 Magyar Tudományos Akadémia, Talajtani és Agrokémiai.
Élősejtszám meghatározás
Felszíni vizek minősége
48. kísérlet Sók azonosítása vizes oldatuk kémhatása alapján
A cink, a kadmium és a higany
Táplálékaink, mint energiaforrások és szervezetünk építőanyagai.
Második rész III. kationosztály elemzése 2011
SPIROCHAETALES REND
Enzimaktivitási módszerek: celluláz-aktivitás mérése
Spórátlan, fakultatív anaerob, aerotoleráns anaerob baktériumok
Nitrifikáció vizsgálata talajban
Készítette: Zöld Zsófia.  Tengeri malac (Cavia porcellus) › Kis testű (25-30cm; g) › Gyorsan szaporodik › Emlős › Kedvelt tesztállat  Házi egér.
Lipáz enzimaktivtás mérése
Talajvizsgálat kataláz aktivitás méréssel
Cianobaktériumok izolálása és megszámlálása Készítette: Horváth Attila.
Obligát anaerob mikroorganizmusok felszaporítása.
OECD GUIDELINE FOR THE TESTING OF CHEMICALS Soil Microorganisms: Carbon Transformation Test OECD ÚTMUTATÓ VEGYI ANYAGOK TESZTELÉSÉRE Talaj Mikroorganizmusok:
Munkafüzet feladatainak megoldása 29.old.- 31.old.
Első rész III. kationosztály elemzése 2011 Készítette Fogarasi József
Dürer kísérletbemutató
A vegetáriánus táplálkozás megítélése
A K V A R I S Z T I K A Főbb témakörök - a víz - a hal
Az App jelentősége ma Dr. Sárközi Rita SZIE-ÁOTK, Járványtani és Mikrobiológiai Tanszék Budapest, november 22.
Vas-kobalt-nikkel A periódusos rendszer VIII/B csoportja
Állandóság és változás környezetünkben
BAKTERIÁLIS SZENNYEZÉS
Páciens fertőzések eredetének meghatározása. Összefüggés A fertőzött beteget a kórházban ápolták egy műtétet követően. Az ápolás során minden nap más.
Bakteriális azonosítási folyamat
FLAVOBACTERIUM OKOZTA MEGBETEGEDÉS HAZAI HALFAJOKBAN
Általános kémia előadás Gyógyszertári asszisztens képzés
CAMPYLOBACTER campylo= görbe pálca poláris csilló
Mikrobák mennyiségi meghatározása
BAKTÉRIUMOK.
22. lecke A szénhidrátok.
Szervetlen vegyületek
Tejsav előállítása Lactobazillus Delbrueckii által
Gennykeltő baktériumok
Citokróm oxidáz.
SPIROCHAETALES REND
Különböző spéci mikroszkópok és festési eljárások
Pulyka az egészséges táplálkozásban
GYAKORLATI ÚTMUTATÓ A TESZTELÉS FOLYAMATA
Analitikai számítások a műszeres analitikusoknak
Antibiotikumok kimutatása a talajból
Előadás másolata:

Listeria monocytogenes Gram+ rövid pálca 0,5-1 – 1-2 μm spóra nincs csilló 16 szerotípus

Morfológia

Előfordulás szaporodni képes: növények szilázs takarmány talaj (barna erdőtalaj) víz szennyvíz növények szilázs takarmány egészséges állatok és ember bélcsatornája élelmiszerek: nyers hús húskészítmény baromfi tej

Fertőzést okozó élelmiszerek nyerstej lágysajtok camembert, brie hús zöldség

Ellenállóképesség Talaj, víz, szennyvíz: hónapokig túlél, sőt szaporodik is!!! >60°C, fertőtlenítőszerek: perceken belül elpusztul 10% NaCl koncentrációig szaporodik Min. pH=4,4 (szerves savak jobban elpusztítják, mint a szervetlenek) Fagyasztást, szárítást jól bírja

Tenyésztés Fakultatív anaerob 0-42°C (optimum: 37°C) 20-25°C: csillós, bukfencező mozgás Közönséges agar: apró, kerek. Henry-féle megvilágításban kékesfehér fényű telep. Véres agar (juh, szm., ló): keskeny, β-hemolízises udvar.

Dúsító Fraser leves LiCl, nalidixinsav, akriflavin-hidroklorid: gátlóanyagok eszkulin, ammónium-vas(III)-citrát: differenciáló rendszer glükóz-eszkulin → β-D-glükozidáz enzim → glükóz + eszkuletin → eszkuletin + Fe3+ → olívazöld, fekete komplex

Fraser leves

Szilárd táptalajok Oxford-agar Palcam agar LiCl, nalidixinsav, akriflavin-hidroklorid, eszkulin, ammónium-vas(III)-citrát Barnászöld, fekete udvarú telepek Palcam agar Polimixin-B, akriflavin, lítium-klorid, Na-ceftazimid, aesculin, mannit Szürkés-zöld, fekete udvarú telepek Ez jóval szelektívebb az Oxford agarnál

Oxford & Palcam agar

minta + első dúsító (feles erősségű Fraser leves) A vizsgálat menete minta + első dúsító (feles erősségű Fraser leves) ↓ Inkubálás 30°C, 24±2h ↓ ↓ Szélesztés Palcam és Oxford agarra 0,1 ml tenyészet 10 ml második ↓ dúsítóba (Fraser leves) Inkubálás 30, 35 vagy 37°C, ↓ 24±2h (+24h ha szükséges) Inkubálás 35 vagy37°C, 48±2h ↓ ↓ Megerősítés Szélesztés Palcam és Oxford agarra ↓ Inkubálás 30, 35 vagy 37°C, 24±2h(+24h ha szükséges) Megerősítés

Megerősítés Kataláz próba: + Gram festés: +, karcsú, rövid pálca Mozgásvizsgálat: telepet leoltani tripton-szója-élesztő levesbe, 25°C, 8-24 óra → 1 csepp tárgylemezre → körkörös, bukfencező mozgás lágy agarba szúrókaccsal mély leoltás, 25 °C 8-24 óra → esernyő formájú növekedés

Megerősítés - Haemolysis Hemolízis: juhvéres agaron, 37°C, 24 óra L. monocytogenes: egyenletes, tiszta, világos, keskeny β-hemolízis L. ivanovii: széles, világos β-hemolízis L. innocua: nincs feltisztulás L. seeligeri: gyenge β-hemolízis

Haemolysis

Haemolyis

Megerősítés – CAMP próba CAMP-próba (Christie, Atkins, Munch, Paterson) Juhvéres agarra oltókaccsal ismert β-hemolízáló Staphylococcus aureus- és Rhodococcus equi-csíkot húzunk → Listeria monocytogenes β-hemolízise felerősíti a Staphylococcus aureus haemolysisét → csésze, ásó alakú feltisztulás (A L. ivanovii ugyanezt csinálja, csak a Rhodococcus equi-vel)

CAMP test

Megerősítés Henry-féle megvilágítás: 45°-ban alulról világított Petri-csésze kékes szín Savtermelés cukrokból: ramnóz(+) xilóz(-)

Henry-féle megvilágítás

Azonosítás Fajok Hemo-lízis Savtermelés CAMP-teszt ramnóz xilóz S. aureus Rh. equi L. monocytogenes + - L. innocua V L. ivanovii L. seeligeri (+) L. welshimeri L. grayi subsp. grayi L. grayi subsp. murray V: változó reakció; (+): gyenge reakció; + : >90%-ban pozitív reakció; - : nincs reakció

Campylobacter jejuni Gram-, S-alakú, hajlott pálca 0,2-0,8 – 0,5-5 μm, öreg tenyészetben coccoid 0,2-0,8 – 0,5-5 μm, spórátlan Dugóhúzó-szerű mozgás poláris flagellum a sejt egyik v. mindkét végén

Campylobacter jejuni

Campylobacter jejuni

Általános tulajdonságok Microaerophil (3-5% O2 és 2-10% CO2) 30,5-45°C (optimum: 42°C – generációs idő még itt is hosszú: ~ 1 óra) Energiát aminosavak, trikarboxi-savak bontásából nyer, szénhidrátokat nem bont Kataláz+, Oxidáz+

Általános tulajdonságok Metilvörös-, Voges-Proskauer- Indol-, lipáz-, lecitináz- Zselatint, keményítőt, kazeint nem bontja Nitrátredukció+ Fumarátot redukálja szukcináttá Hippurát-hidrolízis+ (csak C. jejuni!) Rezisztencia: nalidixsav- cephalotin+

Előfordulás Állatok, ember bélcsatornájának természetes lakója; madarak tűnnek a természetes rezervoárnak; környezetben nem bizonyított, de feltételezhető a túlélése Közvetítő: főleg baromfihús (csirke), de más élelmiszerek (tej, víz) közvetítő szerepe is lehetséges

Fertőzési források (fontossági sorrendben) Rosszul hőkezelt baromfi Nyers baromfi feldolgozása Háziállatokkal való érintkezés Utazás, kirándulás Nyerstej fogyasztása

Ellenállóképesség Élelmiszerekben hűtve sokkal jobban túlél, mint szobahőmérsékleten Felületeken, kézen ~1 óráig túlél Fagyasztás sem pusztítja el teljesen Vákuumcsomagolást jól bírja, oxigénre érzékenyebb 55°C-on hamar elpusztul Szárítást nem bírja, de bizonyos (alacsony) hőmérsékleten így is túlél Sózásra, savanyú pH-ra érzékeny

Tenyésztés 1. lépés: dúsítás 42°C-on, 24-48 óráig 2. lépés: izolálás szelektív agaron 42°C-on, 24-48 óráig, microaerophil körülmények között 3. lépés: megerősítés

Dúsítók Preston leves: Bolton leves: Fe(II)-szulfát, Na-metabiszulfit, Na-piruvát, vér: oxigén-gyökök megkötése Polymyxin-B Bolton leves: a ketolgutársav, Na-metabiszulfit, Na-piruvát, Na-karbonát Lóvér Cycloheximide, cefoperazone, vancomycin, trimethoprim

Táptalajok Mikroaerofil tenyésztés!!! Skirrow agar, Butzler agar, Preston agar, Blaser-Wang agar: hasonlók, a különbség a szelektív adalékokból adódik: (vancomycin, polymyxin, thrimethoprim, bacitracin, cycloheximide, colistin-sulphate, cephazolin-sodium, novobiocin, cephalotin, amphoterecin B, stb.) Karmali agar: aktív szén, haematin mCCDA agar: modified charcoal cefoperazone deoxycholate agar: az oxigén megkötését az aktív szén végzi; telepek: cseppszerűek, színtelenek v. szürkék

mCCDA

Megerősítés 1. Kataláz+ 2. Oxidáz+ 3. Gram-festés: - 4. Natív kenet, függőcsepp-készítmény: dugóhúzó-szerű mozgás

Megerősítés 5. Hippurát-hidrolízis: 0,4 cm3 Na-hippurát-oldat beoltása → 37°C, 2 óra → + 1 csepp ninhidrin-reagens → 5 perc 100°C → +: lila szín Csak C. jejuni + 6. Tenyésztés 25°C-on: nem nő 7. Rezisztencia- (érzékenység-) vizsgálat: nalidixinsavas korong → rátenni egy szelektív komponenseket nem tartalmazó, a vizsgált tenyészettel beoltott agarra → 42±1°C, 16-24 óra → pozitív esetben gátlási zóna figyelhető meg. A C. jejuni mindig érzékeny a nalidixinsavra!