Készítette: Kiss László Biolisztika Készítette: Kiss László
Biolisztika fogalma „Génpuska” (Gene gun) Gének bevitele ép növényi, állati sejtekbe Transzformációs módszer Új keletű technika (kb. 25 éves) Növényi sejtek transzformálására fejlesztették ki
Transzformációs módszerek Mikroorganizmusokra hatékony módszerek: kémiai transzformáció, elektroporáció, protoplaszt Növények - Agrobacterium tumefaciens (Ti plazmid) fertőzés; probléma: egyszikűekre (pl. gabonafélék) többnyire nem alkalmas - Protoplaszt transzformáció; probléma: regeneráció nem működik olyan jól, mint a Gram+ baktériumoknál (pl. Bacillusok)
Génpuska működése A DNS-t (gént) nehézfém (W, Au, Ag) mikrorészecskék felületére viszik fel (d=1μm) Hordozó lemezhez rögzítve nagy sebességre gyorsítják (kb. 500 m/s). Hajtóanyag: nagy nyomású He gáz Rácsnak ütköztetik, csak az apró, nagy sebességű DNS-sel burkolt részecskék repülnek tovább Petri csészén tenyésztett növényi szövetnek (ált. callus-nem differenciálódott totipotens növényi szövet) ütköznek Transzformáció: amerikai fánk-effektus
Génpuska működése
Transzformánsok szelekciója Transzformáns sejtekben membrán, sejtfal regenerálás; DNS leválása a hordozóról, vándorlás a kromoszóma felé, majd beépülés Szelekció valamilyen marker segítségével (antibiotikum rezisztencia, fluoreszcens protein) Szelektált totipotens sejtekből felépíthető (hormonok) a teljes rekombináns növény
Génpuska előnyei Egyszerű, gyors, könnyen kezelhető Mechanikai→ univerzális (sejt típus, méret, alak, sejtfal megléte vagy hiánya nem számít) Hatékony- többszörös találatok egyszerre sok sejten Növények, állatok (ember- jövőbeni klinikai alkalmazások)
Alkalmazások, érdekességek Széles körű alkalmazás, pl.: Rovar (paradicsom gének), só és szárazság (árpa gének) rezisztens rizs Vírus rezisztens papaya Mitokondrium, kloroplaszt is transzformálható ily módon DNS helyett akár organellumok is juttathatók a sejtbe
Köszönöm a figyelmet!