GAZDA GRAS: generally recognized as safe Intracelluláris / szekréció Proteázok Termelés, szekréció szinkronizálás Gazda kialakítása
VEKTOR Plazmid –RC –Θ, runaway Integrációs –Homológ rekombináció, géncsere –attP/B, int, xis –CRE-lox –transzpozon
Szelekciós marker Antibiotikum Food grade –Nisin –Esszenciális gén / hiánymutáns törzs (stabilitás is)
Promóter Konstitutív Szabályozható –Ki-be kapcsolás
Nagy sejtsűrűségű tenyészet high cell-density culture (HCDC) Limitál az oldott oxigén –Vitreoscilla hemoglobin gén
Prokarióta expressziós vektor
Expresszió optimalizálása E. coli- ban Promóter Transzkripciós terminátor Transzláció iniciáció Transzlációs enhncer (néhány gén nem transzlálódó 5’ régiója) Transzlációs terminátorok UAAu mRNS stabilitása: stem loop 5’ és 3’ végeken Kodon használat Proteolízis: N-end rule
Promóterek
Sejt kompartmentek
Szekréció
Bacillus subtilis
Tejsav baktériumok LAB functional food
LAB, vakcinálásra
Integráció DNS-t módosító enzimekkel
Pseudomonas
Élesztők
Huma -nizált Pichia Enzim Trichoderma reesei-ből
five major areas: (i) elimination of initiating a1,6-mannosyltransferase activity; (ii) proper subcellular localization of processing enzymes using combinatorial genetic libraries; (iii) using catalytic domains from several different sources, (iv) assuring the availability of UDP–GlcNAc in the Golgi; (v) rapid screening of large numbers of recombinant glycoproteins for the desired oligosaccharide structure.
Y2H
Integráció kromoszómába CRE-lox
G+ LGB
Phage-display, baktérium display
M13 filamentous phage
Phagemid vektorhoz helper fág kell
Oligo kazetta mutagenezis, ha a cél aminosavak egymáshoz közel vannak.
D N A s h u ff li n g K e v e r é s
Szelekció vezérelt evolúció után
Drog célpont keresés
Aspergillus
ProteolízisProteolízis