AZ ELLENANYAGOK TERÁPIÁS FELHASZNÁLÁSÁNAK LEHETŐSÉGEI Az ellenanyagok jellegzetességei, funkciói Poliklonális és monoklonális ellenanyagok Monoklonális.

Az előadások a következő témára: "AZ ELLENANYAGOK TERÁPIÁS FELHASZNÁLÁSÁNAK LEHETŐSÉGEI Az ellenanyagok jellegzetességei, funkciói Poliklonális és monoklonális ellenanyagok Monoklonális."— Előadás másolata:

1 AZ ELLENANYAGOK TERÁPIÁS FELHASZNÁLÁSÁNAK LEHETŐSÉGEI Az ellenanyagok jellegzetességei, funkciói Poliklonális és monoklonális ellenanyagok Monoklonális ellenanyagok előállítása Passzív immunizálás Monoklonális és poliklonális ellenanyagok terápiás felhasználása Módosított ellenanyagok, kiméra antigén receptor

2 AZ ELLENANYAGOK EFFEKTOR FUNKCIÓI neutralizáció antigén kijelölése az effektor mechanizmusok számára

3 Az ellenanyagok effektor funkciói hízósejt aktiválás

4 Humán Immunglobulin Osztályok IgG - gamma ( γ ) nehézláncok IgM - mü ( μ ) nehézláncok IgA - alfa ( α ) nehézláncok IgD - delta ( δ ) nehézláncok IgE - epszilon ( ε ) nehézláncok könnyűlánc típusok kappa ( κ ) lambda ( λ ) Izotípusok!

5 Az ellenanyag izotípusok jellemzése

6 Antigén – ellenanyag kötődés Valencia és aviditás kapcsolata Valencia: az antitestnek az antigénnel kialakított kapcsolatainak száma Affinitás: egy adott antigén és antigénkötő hely kapcsolatának erőssége Aviditás: az adott antitest összes kötőhelye affinitásainak „eredője” (nem az összege) sztérikus hatás

7 Ellenanyag izotipusok kapcsolata az effektor funkciókkal A különféle izotípusok jellegzetes eloszlást mutatnak a szervezetben Az Fc rész jelentősége

8 Fc receptorok Fc γR : Fc εR : Fc αR : γ  IgG kötés ε  IgE kötés α  IgA kötés FcRn„neonatális” Fc receptorPlacenta, epittél sejtek, stb.IgG transzfer, IgG megőrzés pIgRpoli Ig receptorepitél sejtekIgA, IgM transzfer és szállító Fc receptorok

9 Epithel sejt J C C S S S S C C S S S S C C ss J C C S S S S C C S S S S C C ss J C C S S S S C C S S S S C C ss A pIgR és az IgA internalizációja A pIgR elhasítása teszi lehetővé az IgA leválását, ami a továbbiak során ezt a receptor darabot mint „szekretoros fragmentumot” hordozza J C C S S S S C C S S S S C C ss Az IgA és pIgR transzcitózissal vezikulákban átkerül az apikális felszínre A szubmukóza B-sejtjei (BALT, GALT) dimer IgA-t termelnek B A “poli Ig receptorok” (pIgR) az epithel sejtek bazolaterális felszínén találhatóak. Az itt található IgA (és IgM) ellenanyagokat szállítják az apikális felszínre pIgR: A SZEKRETOROS IgA TRANSZPORTJA MUCINMUCIN J C C S S S S C C S S S S C C ss J C C S S S S C C S S S S C C ss J C C S S S S C C S S S S C C ss

10 Mit szállít a pIgR (poli immunoglobulin receptor )? J lánccal rendelkező (polimer) izotípusokat: IgA, IgM (ez a J lánc nem összekeverendő a VJ/VDJ átrendeződés J régiójával!!!) Hova szállít? epiteliális (bél- és légzőrendszeri) felszínek szekrétumok (nyál, anyatej) J lánc nélkül is kialakulhat pentamer v. hexamer IgM, de az nem szállítódik. A hexamer IgM nagyságrendekkel jobb komplement aktivátor.

11 Az IgG placentális transzportja: A neonatális Fc  receptor (FcRn) Humán Fc  Rn (Az FcRn és az MHC I molekula szerkezeti rokonságban áll) Humán MHC Class I

12 FcRn, Fc γ Rn IgG és albumin szállítására képes. Különféle sejttípusokban van jelen: -endothel sejtek -epiteliális sejtek (emésztő és légutak) -immunrendszer sok sejttípusa, professzionális APC-k

13 FcRnműködése pinocitózis savas közegben nagy affinitással köti az IgG-t, és megmenekíti a lizoszómális lebomlástól Ha az epitélsejt másik oldalán távozik: transzcitózis Az IgG a szervezet leg különfélébb helyeire kerülhet el a keringésből ilyen módon: vérkeringés  szövetek szövetek  epiteliális felszinek (az urogenitális traktusban, a rektumban és a felső légutak egy részében több az IgG, mint az IgA) anyai keringés  magzati keringés

14 Az FcRn miatt az IgG plazma féléletideje kiugróan magas

15 MONOKLONÁLIS ELLENANYAGOK és POLIKLONÁLIS ELLENANYAGOK A terápiás célra mindkét típust használják

16 Antigén Antigén: amit az immunrendszer felismer, és vele specifikus módon reagál Antigén determinánsok avagy epitopok: az antigén azon részei amihez az antigén receptorok vagy az antigén specifikus ellenanyagok közvetlenül kötődnek

17 AZ ELLENANYAG VÁLASZ Immunszérum Poliklonális ellenanyag B-sejt készlet Aktivált B-sejtek Ellenanyag termelő plazmasejtek Antigén-specifikus poliklonális ellenanyagok (Több klón termékei!) Ag

18 Antigén specifikus ellenanyagokhoz legegyszerűbben immunizált élőlények szérumából juthatunk. Hosszú távon újabb és újabb immunizálást igényel. - Nehezen standardizálható - Limitált mennyiségben áll rendelkezésre Ha fel tudnánk szaporítani valamelyik antigén specifikus B sejtet, ami antigénspecifikus ellenanyagot termel sokkal egyszerűbb volna a helyzet. Monoklonális ellenanyagok előállítása Georges J.F. Köhler, Cesar Milstein (Nobel díj 1984-ben)

19 Antigén Poliklonális ellenanyagok Monoklonális ellenanyagok

20 Monoklonális ellenanyagok egyetlen B-limfocita klón termékei homogének (antigénspecifitás, affinitás, izotípus) előnye a poliklonális ellenanyaggal szemben, hogy a meghatározott specificitású és izotípusú ellenanyagok nagy mennyiségben és azonos minőségben állíthatók elő - „in vivo” patológiás körülmények között is előfordulhat pl. mieloma multiplex esetében egy B sejt klón malignus szaporulata miatt nagy mennyiségű monoklonális ellenanyag lehet jelen a szervezetben osztódóképes – tenyészthető, egyféle ellenanyag termelő sejteket kell hozzá előállítani „immortalizálás”?

21 Lehetőségek? Transzformáció/immortalizálás vírussal - A vírus ott lesz a termékben is EBV – humán B sejteket transzformál/immortalizál - Az antigén specifikus klónok elkülönítése körülményes

22 Lehetőségek? Fúzió immortális sejtvonallal Követelmények a fúziós partnerrel szemben -ne legyen saját ellenanyag termelése -ne befolyásolja a B sejtek ellenanyag termelését -szelektálhatóság: könnyen megszabadulhassunk a felesleges, nem ellenanyag termelő sejtektől Kevés jó fúziós partner létezik: Egér: Sp2/0-Ag14 (SP2) Humán: nincs igazán jó általános fúziós partner! heteromielómákat, triómákat használnak fúziós partnerként: (maga a fúziós partner is 2-3 sejt hibridje - gyakran egér-humán hibrid) CB-F7, K6H6B5, H7NS, NAT-30, HO-323, A4H12

23 Lehetőségek? Mikromanipuláció (műszerigényes) „FuCell”

24 -Előre szelektált antigén specifikus B sejttel történik (antigén segítségével lehetséges szeparálni) -A B sejtet kontaktusba hozzák a fúziós partnerrel -Elektromos tér segítségével történik a fúzió -Mivel nem szükséges szelektálni, jóval többféle humán fúziós partner szóba jöhet (szinte bármely immortális sejtvonal megfelelő) B sejt fluoreszcens/paramágneses jelzés antigén A fúzió folyamata

25  számunkra értékes tulajdonsággal rendelkező, de korlátozott élettartamú immunsejtet kiválasztjuk, és korlátlan ideig fenntarthatóvá, szaporodóvá tesszük.  antigén specifikus immunsejteket fuzionáltatunk korlátlanul szaporodó tumorsejtekkel. A kapott hibridek közül számunkra azok értékesek, amelyek kromoszomálisan stabilak, rendelkeznek az adott immunsejt tulajdonságaival és korlátlanul szaporodnak.  A megfelelő hibrid sejteket többlépéses szelekció végeredményeként, sejtklónok formájában kapjuk meg. Monoklonális ellenanyagok előállítása A leg elterjedtebb: egér SP2 sejtvonallal végzett sejtfúzió alapú „hibridóma” módszert tekintjük át a következőkben A hibridóma technika lényege

26 Monoklonális ellenanyag előállítás menete Vázlatosan - egér/patkány immunizálása (beoltása) az antigénnel - a célsejteket tartalmazó lép vagy nyirokcsomók izolálása, homogenizálása - lépből származó plazmasejtek és B-sejt eredetű egér tumorsejtek (plazmacitóma/ mielóma sejtek) fúziója - Az ellenanyag termelő klónok szelekciója/azonosítása (2 fő lépésben) A létrejövő hibridómák folyamatosan szaporodnak és ellenanyagot termelnek, ami a tápoldatukból kinyerhető

27 lépsejtmielómasejt (SP2) Napok alatt maguktól elpusztulnak Szaporodó sejtek Antigén specifikus ellenanyagot termelő hibridek nem megfelelő hibridek Hibridóma előállítás fő lépései PEG, Sendai virus, mikromanipulátor+nagyfrekvenciás elektromágneses mező

28 mielómasejt (SP2) Megszabadulás a felesleges szaporodó sejtektől Szelektív tápfolyadék („HAT”) érzékeny HGPRT + TK + lépsejt 1. fő szelekciós lépés HGPRT - TK -

29 Antigén specifikus ellenanyagot termelő hibridek Nem antigén specifikus ellenanyagot termelő, vagy ellenanyagot nem termelő hibridek 2. Szelekciós lépés: Az ellenanyag termelő sejtek kiválasztása Vannak a sejtkultúrában az antigénnel reagálni képes ellenanyagok. Nincs jelen az antigénnel reagálni képes ellenanyag. Eldobjuk Tovább tenyésztjük, sejtklónozzuk.

30 A sejtklónozás célja Különféle monoklonális ellenanyagokat termelő B sejt hibridóma klónok közül a nagy affinitású, antigénre specifikusakra van szükségünk (ellenőrzés pl. ELISA módszerrel ) A kapott hibridómák összessége még poliklonális ellenanyag keveréket termel, melyek között kevés lehet a nagy affinitású antigén specifikus ellenanyag

31 Technikai nehézségek: A transzformált sejtvonalak sajnos gyakran genetikailag instabilak. Ez a létrehozott hibridómákra is igaz. Rendszeresen ellenőrizni kell az ellenanyag termelésüket és az antigénspecificitásukat – adott esetben újraszelektálás, újraklónozás szükséges.

32 A „HAT” szelekció biokémiája Hipoxantin, Aminopterin, Timidin tartalmú tápfolyadék nukleotid prekurzor gátlószer A szelektív tápfolyadék:

33 ”de novo” útvonal ”salvage” útvonal aminopterin nukleozid trifoszfátok DNS ”elemi” építökövek, egyszerü szerves anyagok, aminosavak, cukrok egyéb enzimek nukleinsav lebontási termékek felhasználása, purinok, hipoxantin, timidin HGPRT, TK (hipoxantin guanin foszforibozil transzferáz, timidin kináz) A „HAT” médium és a DNS szintézis két fő útja Az SP2 mielóma sejtekben csak ez az útvonal működőképes!

34 foszforibozil pirofoszfát, glutamin IMP dGTP dATP purinok, pl. hipoxantin dCTP dTTP DNS aszparaginsav, karbamoil foszfát OMP dCDP dTMP timidin ”de novo” útvonal ”salvage” útvonal TK HGPRT HAT  Hipoxantin, Aminopterin, Timidin Ezen az ábrán „ugyan az” van, mint az előzőn, csak kissé részletesebben: aminopterin IMP – inozin monofoszfát OMP – orotidin monofoszfát HGPRT – hipoxantin-guanin foszforibozil transzferáz TK – timidin kináz

35 Monoklonális ellenenyagok felhasználási lehetőségei a klinikai gyakorlatban DIAGNOSZTIKA Vércsoport meghatározás (anti-A, anti-B, anti-D ellenanyagokkal) Komplex antigén keverékek analizálása (szérum, liquor) Sejttípusokra jellemző markerek azonosítása Immunhisztokémia Limfómák tipizálása CD markerek segítségével TERÁPIÁS LEHETŐSÉGEK (több száz regisztrált készítmény létezik már) Sejtek elválasztása CD34+ csontvelői őssejtek gyűjtése autológ/allogén transzplantációhoz perifériás vérből Sejtfelszíni és oldott molekulák funkcionális vizsgálata Sejt aktiváltsági állapotának vizsgálata Tumorterápia (pl. célzott kemoterápia) CD20+ B-sejtek elleni antitestek B-sejtes Non-Hodgkin limfómában Szervátültetés utáni kilökődés megakadályozása célzott T-sejt gátlással Sejtfunkciók terápiás gátlása a receptor vagy a ligandum neutralizációjával Tumorterápia, Immunszuppresszió

36 Monoklonális antitestek, mint beadható gyógyszerek? Az egérben termelődő antitestek emberbe oltva - fajidegen fehérjeként - immunválaszt indukálhatnak. Hogyan kerülhető meg a probléma? Terápiás célú ellenanyagok

37 A monoklonális antitestek evolúciója Egér / Patkány Kiméra Humán Humanizált A humanizált ellenanyagok glikozilációja még továbbra is a termelő sejttípus sajátságainak megfelelő. Létrehozhatók valódi humán monoklonális ellenanyagok humán hibridómák segítségével.

38 - Tumorterápia Lehetővé tették a célzott, szelektív kemoterápia következő lépcsőfokának elérését (Sejttípus-specifikus, de még mindig nem csak a malignus sejtekre specifikus!) -Immunszuppresszió Sejttípusra specifikus immunszuppresszió lehetősége, receptor antagonisták, ligand neutralizáció Gyógyszerként leggyakrabban alkalmazott monoklonális ellenanyagok

39 Monoklonális ellenanyagok a tumorterápiában 2.konjugált antitest Anti-CD20 + yttrium-90 izotóp (ibritumomab- Zevalin) Anti-CD20 + jód-131 (tositumomab – Bexxar, kiméra!) 1.„Naked MAb”, nem konjugált antitest Anti-CD20 (rituximab – Mabthera/Rituxan, humanizált): B-sejtes Non-Hodgkin lymphoma Anti-CD52 (alemtuzumab – Mabcampath, humanizált): chronicus lymphoid leukaemia (3. vonalban, chlorambucil és fludara rezisztens esetekben) Anti-ErbB2 (trastuzumab – Herceptin, humanizált): emlőtumor Anti-VEGF (bevacizumab – Avastin, humanizált): colorectalis tu. (+ Lucentis!) Anti-EGFR (cetuximab – Erbitux, kiméra): colorectalis tu. (+ Vectibix, rekomb. humán!)

40 Trifunkcionális ellenanyag

41 Radio-immunotherápia Pl. Zevalin, Bexxar – monoklonális + izotóp Antibody-directed enzyme prodrug therapy (ADEPT) Az antitesthez enzimet kötnek, mely a később szisztémásan bevitt, ártalmatlan prodrug vegyületet lokálisan alakítja a citotoxikus, hatékony metabolittá Immuno-liposzómák Liposzómába csomagolt nukleotidok vagy gyógyszer célzása monoklonális antitestekkel (pl. tumorszuppresszor gének bevitele, szövetspecifikus génbevitel) Nem immunológiai célpontú manipulációk pl. abciximab (ReoPro): thrombocyta-aggregatio gátlása TOVÁBBI LEHETŐSÉGEK MONOKLONÁLIS ELLENANYAGOK FELHASZNÁLÁSÁRA

42 Immunszuppresszív ellenanyagok és receptor-Fc fúziós termékek 1.Anti-TNF-α antitestek infliximab (Remicade): 1998 óta, kiméra adalimumab (Humira): 2002, rekombináns humán 2.Etanercept (Enbrel) – dimer fúziós fehérje, TNF-α receptor + IgG Fc-vég Nem monoklonális antitest, csak IgG Fc-véget tartalmaz féléletidő növelése: FcRn Anti-TNF-α terápia indikációi: Rheumatoid arthritis Spondylitis ankylopoetica (SPA - M. Bechterew) Plakkos psoriasis, arthritis psoriatica Crohn-betegség, colitis ulcerosa (általában - még - nem 1. vonal!)

43 -Muromonab-CD3 (OKT-3) egér! IgG2a CD3 pan-T sejt antigén ellen, szervátültetést megelőzően vagy követően alkalmazott immunszupresszív kezelésre; ma már ritkán használják (fajidegen fehérje!); humanizált változatával I-es típusú diabetes mellitusban folynak vizsgálatok -Omalizumab (Xolair): IgE elleni humanizált IgG1k monoklonális antitest Ind.: allergiás asthma, Churg-Strauss szindróma -Daclizumab (Zenapax): IL-2 receptor elleni, humanizált antitest. Indikáció: transzplantációt követően kilökődési reakció ellen (T-limfocita aktivitás gátlására) -basiliximab (Simulect): mint daclizumab, de kiméra! -efalizumab (Raptiva): anti-CD11a, humanizált, ind.: psoriasis IMMUNSZUPPRESSZÍV ELLENANYAGOK 2. Az immunszuppresszív ellenanyagok mellékhatásai hasonlóak lehetnek az immundefficienciák tüneteihez! (pl. opportunista fertőzések megjelenése)

44 TERÁPIÁS MONOKLONÁLIS ANTITESTEK NEVEZÉKTANA TERÁPIÁS MONOKLONÁLIS ANTITESTEK NEVEZÉKTANA A gyógyszerként használt monoklonális antitesteket generikus névvel (nem igényel tulajdonjogot) illetik. A nevezéktan sémáját a WHO határozza meg. Például: Abciximab  ab- + -ci(r)- + -xi- + -mab, egy kardiovaszkuláris megbetegedésekben használt monoklonális kiméra ellenanyag.

45 virus-v(i)--vi(r)- miscellaneous tumor-tu(m)- prostate tumor -pr(o)- melanoma-me(l)- mammary tumor-ma(r)- ovarian tumor-go(v)- testicular tumor-go(t)- colonic tumor -t(u)- -co(l)- toxin-tox(a)--toxa- bone-s(o)--o(s)- rat/mouse hybrid-axo- nervous system-n(e)-*-ne(u)(r)- chimeric/humanized hybrid -xizu-*musculoskeletal system—-mu(l)- humanized-zu-immune system-l(i)--li(m)- chimeric (human/foreign)-xi-inflammatory lesions—-le(s)- human-u-interleukin-k(i)--ki(n)- mouse-o-fungus-f(u)--fu(ng)- primate-i-circulatory system-c(i)--ci(r)- hamster-e-bacterium-b(a)--ba(c)- rat-a-angiogenesis (inhibitor)—-anibi- variable meaning newold Source substemTarget substemPrefix 'Suffix' (stem) -mab

46 VÉDETT EGYÉN szérum ellenanyag Humán immunglobulin transzgenikus egér immunizálás egér monoklonális ellenanyagok immunizálás humán monoklonális ellenanyagok humanizált, egér monoklonális ellenanyagok (rekombináns módszerekkel) Passzív immunizálás VESZÉLYEZTETETT EGYED Az immunrendszer nem a szokásos módon aktiválódik Azonnal hat Átmeneti védelem/hatás Immunoglobulin lebomlás!

47 Poliklonális ellenanyagok terápiás felhasználása immundeficiens, vagy gyenge immunválaszú személyek kezelése (passzív immunizálás) (pl. kisgyerekeknél pl. súlyos mikrobiális fertőzéskor) ellenanyag mediált (pl. II.típusú hiperszenzitivitás) autoimmun folyamatok kezelése (FcRn telítése – autoellenanyagok hamarabb kikerülnek a keringésből) friss fagyasztott plazma vagy IVIG felhasználása Humán terápiás célra a leggyakoribb a véradóktól származó plazmakészítmények alkalmazása

48 Passzív immunizálás II. TípusAlkalmazás Intramuszkuláris (kis mennyiségben jut be, kevésbé hatékony) HBV-Ig; Varicella-Zoster-Ig; Anti-D profilaxis Intravénás (IVIG)Humorális immundefektusok (Bruton-féle agammaglobulinaemia; hypogammaglobulinaemiával járó variábilis és kevert immundefektusok ) Méreg elleni ellenanyagok (pl. kígyómarás) Természetes passzív immunizálás: Placentán átjutó IgG – újszülött védelme az első hónapokban Anyatej: IgA – emésztőrendszer és a felső légutak védelme

49 Passzív immunizálás III. Poliklonális ellenanyagok terápiás felhasználása mérgek elleni antiszérumok (Antivenom) kígyók, skorpiók, pókok, mérges tengeriherkentyűk mérgei elleni antiszérumok Nagyméretű állatok fokozatos hiperimmunizációjával (általában lovak) Tisztított immunglobulin frakció kinyerése a plazmából - csökken az immunizálódás valószínűsége és mértéke a felhasználáskor: A többi szérumfehérje hiányában esetleg többszöri terápiás immunizálás is lehetséges

50 Passzív immunizálás EBOLA fertőzéseknél monolkonális ellenanyag keverékek: In vitro tesztekben és kísérlet állatokban igazoltan hatékonyak voltak. Experimentális vakcinák amiknek a terápiás használatát a történtek miatt engedélyezték. MB-003: humanizált és human–egér kiméra mAb: c13C6, h13F6 and c6D8 ZMAb: három egér mAb: m1H3, m2G4 and m4G7 ZMapp: három kiméra: c2G4, c4G7 (ZMAb), c13C6 (MB-003) A korábbiakban ezek voltak a leghatékonyabba összetevők A mAb géneket virális vektorral agrobaktériumokba viszik. Az agrobaktériumok módosított Ti (tumour inducing) plazmidjaiba inzertálva. Az agrobaktériummal dohány növényt fertőznek. Az ellenanyagokat a növényekből izolálták. A 2014-es fertőzéssorozat kitörésekor csak kis mennyiségben állt még rendelkezésre – kimerültek a készletek. poliklonális szérumok kigyógyult egyedektől Állatkísérletek hiperimmun lószérummal (1991-es évektől) bíztató eredményekkel Humán szérumok felgyógyult donorokból (’90-es évek végétől) Mindkét fajta ellenanyag típusnál vannak bíztató eredmények, de az alacsony esetszám miatt még nem lehet határozott kijelentéseket tenni a hatékonyságról.

51 „Szub-neutralizáló ellenanyagok” fokozhatják a vírus fertőzés hatékonyságát -nem a megfelelő epitoppal reagáló ellenanyagok -kis affinitású ellenanyagok -túl kis mennyiségben jelenlevő ellenanyagok Az ellenanyag nem neutralizál, hanem elősegíti a vírus bejutását a sejtbe. Különösen problematikus olyan vírusoknál amelyeknek a fertőzéskor kifejezetten a fagociták endoszómális környezetetet veszik célba (pl. Dengue vírus), de sok más vírus esetében is vannak adatok ezzel kapcsolatban (HIV, EBOLA) kimutatták: in vitro sejtkultúrában állatmodellekben ‐ majmokban figyeltek meg vírusszám növekedést (de nem súlyosbodott a betegség) ‐ egér modellben - AG129 egértörzsben a szub-letális Dengue fertőzéséből letálisat csinált Antibody-dependent enhancement (ADE)

52 Model of antibody-dependent enhancement of dengue infection Antibody (Ab)-dependent enhancement of infection occurs when preexisting antibodies present in the body from a primary (first) dengue virus (DENV) infection bind to an infecting DENV particle during a subsequent infection with a different dengue serotype. The antibodies from the primary infection cannot neutralize the virus. Instead, the Ab–virus complex attaches to receptors called Fcγ receptors (FcγR) on circulating monocytes. The antibodies help the virus infect monocytes more efficiently. The outcome is an increase in the overall replication of the virus and a higher risk of severe dengue. Whitehead, S. S. et al. Prospects for a dengue virus vaccine. Nature Reviews Microbiology 5,518–528 (2007). A Dengue vírus az FcR segítségével pont a neki megfelelő helyre irányítódik Fc receptor mediált ADE (FcR-ADE), Komplement receptor mediált ADE (C-ADE) A vírushoz kötődő komplement fehérjék (C1, C3) is részt vehetnek ilyen jellegű folyamatokban (a klasszikus és az alternatív útvonal is érintett lehet) Különféle komplement receptorok (CR) segítik elő a vírus felvételét

53 Módosított monoklonáris ellenanyagok alap típusai A módosításokkal tovább csökkenthető a termék immunogenitása, és növelhető a funkciójának specificitása – felesleges/nem kívánatos effektor funkciókat nem indukál (pepszin)(papain)

54 scFV - single chain variable fragment kétféle elrendezés lehetséges peptid linkerekkel többet összekombinálva növelhető az aviditás (Itt az Fv fragmentek azonos specifitásúak) neutralizációs célokra receptor funkció gátláshoz

55 Bi-specific T-cell engager (BiTE) (di-scFv) („bispecifikus T sejt elfoglaltság teremtő”) két eltérő specificitású scFv

56 hcIgG: tevefélék (Camelidae) teve, dromedár, láma IgG: ember, egér, patkány Nehéz láncú ellenanyag (hevy chain Ig, hcIg) immunoglobulin new antigen receptor (IgNAR): porcos halak, cápák V H H fragment/nanobody antigén (lizozim)

57 sdAb – single domain antibody (V H H fragment/nanobody) Nehézláncú ellenanyagokból állítható elő cápa tevehumán Nem kell a V L és V H doménnel vacakolni Jobban tűri a szélsőségesebb fizikai kémiai viszonyokat

58 Ellenanyag kapocs régió linker VHVH VLVL első-másod-harmadik generációs kiméra antigén receptorok Kiméra Antigén Receptor (CAR) „tumorantigént” felismerő scFV Effektor citotoxikus vagy toxikus citokin termelő helper T sektekbe transzfektálják (scFV konstrukció, Ig kapocs régió, CD3 zéta lánc ic rész) T sejt receptor CD3 zéta lánca és kostimuláló molekulák jelátvivő részei

59 Gyulladási, citotoxikus, vagy az immunválaszt fokozó citokin génjét is mellé tehetik a CAR T sejtben: TRUCK TRUCK (T cells redirected for universal cytokine killing) IL-12 vagy a TNF szisztémásan alkalmazva túl „toxikus” hatású. A TRUCK csak a CAR aktiválás hatására fogja termelni, nagy mennyiségben, lokálisan (NFAT minimal promoter v. IL-2 promoter vezérelt) TNF IL-12 IL-23 IL-27 innate citotoxikus immunválasz fokozása szupesszió feloldása/reprogramozása

60 Erb receptor családnál vagy IL receptor tumorantigének esetében scFV helyett a ligandumot is alkalmazhatják a CAR-ban

61 A tumorantigént felismerő CAR mellé beletehetnek, valamilyen mesterséges szolubilis antigént felismerő CAR-t is, ami az ic részén valamilyen death doménnel van ellátva: A módosított sejtek ennek az antigénnek a szervezetve juttatása után így gyorsan eltűntethetők (apoptózis indukciójával) a szervezetből, ha nincs már rájuk szükség.