Higiénés Bakteriológiai Laboratórium

Az előadások a következő témára: "Higiénés Bakteriológiai Laboratórium"— Előadás másolata:

1 Higiénés Bakteriológiai Laboratórium
Dr. Schweitzer Nóra Samu Péterné dr Juhászné Kaszanyitzky Éva PhD

2 Fő feladatai: -Nemzeti antimikrobiális-rezisztencia referencia laboratórium feladatainak ellátása - monitoring vizsgálatok - rutin antibiotikum-rezisztencia vizsgálatok a szalmonella gyérítéssel kapcsolatos laboratóriumi vizsgálatok Táptalajkészítés valamennyi intézeti osztály számára

3 A monitoring vizsgálatok és az antibiotikumok alkalmazásának szabályozása:
A TANÁCS 2377/90 EGK RENDELETE az állati eredetű élelmiszerekben található állatgyógyászati készítmények maximális maradékanyag-határértékeinek megállapítására szolgáló közösségi eljárás kialakításáról (MRL - maximum residue limits - értékek) AZ EURÓPAI PARLAMENT ÉS TANÁCS 2003/99/EK IRÁNYELVE (2003. November 17.) a zoonózisok és zoonózis-kórokozók monitoringjáról EURÓPAI PARLAMENT ÉS A TANÁCS 1831/2003. EGK Rendelete (2003. Szeptember 22.) a takarmányozási célra felhasznált adalékanyagokról Az 50/2006. (VI. 28.) FVM rendelet az állatgyógyászati készítményekről

4 Antibiotikumok alkalmazása gyógyszer-rezisztencia
Típusai: természetes 2. szerzett 3. kereszt 4. co-rezisztencia Genetikája: Elhelyezkedés: 1. kromoszómában genetikai szigetekben fágokban 2. Plazmidokban kialakulásának lehetőségei: az antibiotikumok szelektív hatásának következtében: saját gének mutációja saját gének közötti átrendeződés: 1. homológ rekombináció 2. transzpozíció 3. integráció baktériumok közötti terjedés: transzformáció 2. transzdukció 3. konjugáció

5 Rezisztencia mechanizmusok
Megváltozik az antibiotikum támadáspontja (targethely-változás) (pl.:riboszóma fehérjék metilálása-MLSB-rezisztencia; DNS-gyrase: quinolonok; PBP2a termelés: oxacillin rezisztencia, stb.) A baktériumsejtben nem alakul ki hatékony koncentráció - a bejutás feltételei csökkennek (porin csatornácskák szerkezete/száma csökken–cephalosporin, polymyxin, aminoglycosidok) - a bejutott hatóanyag eltávolítása fokozódik (efflux-mechanizmus-tetracyclinek, kinolonok, makrolidok) A baktériumok az antibiotikumot enzimek segítségével hatástalanítják (ß-laktamáz, acetil-, adenil-, foszforilil-, nucleotidiltranszferáz stb.) A baktériumok változtatnak azon az anyagcsere-lépésen, amelyre az antibiotikum hat (fokozott DHPS-termelés-szulfonamidok, DHFR-trimetoprim ellen, stb.) A baktériumok nem végzik el azt a változtatást az antibiotikumon, amelytől aktívvá válna (metronidazol csak redukált formában hat)

6

7 Csoport Hatásspektrum Hatóanyag

8 Ciklikus peptidek szűk G+ Bacitracin
Csoport Hatásspektrum Hatóanyag Ciklikus peptidek szűk G Bacitracin

9

10

11

12

13 A rezisztencia-vizsgálat módja
1. Az in vitro érzékenységi vizsgálat és a terápiás eredmények közötti összefüggést befolyásolja: a mintavétel, a szállítás, a tárolás, a feldolgozás módja, a tenyésztési eredmények értékelése, 2. Nemzeti módszertani ajánlások (CLSI, DIN, BSAC, CA-SFM) Hazánkban gyakori a Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) korábban: National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) alkalmazása (M31-A2, 2002; M100-S20, 2010; M45-A, 2006)

14 Néhány panel a rezisztenciavizsgálatokhoz
Salmonella/E.coli Staphylococcus Enterococcus Campylobacter amoxicillin/clav.sav penicillin ampicillin oxacillin erythromycin ceftiofur gentamicin 120 clindamycin 3. Gen.cephalosporinok florfenicol neomycin enrofloxacin cephalothin gentamicin 10 streptomycin 300 nalidixsav chloramphenicol tetracyclin lincomycin vancomycin sulfon/trimethop apramycin novobiocin sztreptomycin 10 sulfonam/trimethop sulfonamidok

15 Az antibiotikum-rezisztenciát figyelő rendszer megszervezése Magyarországon (2001. Január) I. Cél: A baktériumok antibiotikum érzékenységének, a többszörösen rezisztens törzsek megjelenésének jelzése, követése - a patogén - a zoonozist okozó (E. coli, Salmonella, Campylobacter) a jelzőbaktériumok (Campylobacter, Enterococcus, E. coli) vizsgálatával

16 A baktérium törzsek eredete: - az Intézet diagnosztikai anyaga,
II. A baktérium törzsek eredete: - az Intézet diagnosztikai anyaga, megyénként, havonta egy-egy vágóhídon, rendes vágás során elvéreztetett broilercsirke-, sertés- és szarvasmarha-állomány 3 állatából származó vastagbél minta, Az élelmiszerek ellenőrzése során kitenyésztett törzsek (Élelmiszer-és Takarmánybiztonsági Igazgatóság)

17

18

19 A szalmonella gyérítéssel kapcsolatos jogszabályok (harmonizálnak az EU rendeleteivel)
49/2002 (V. 24) FVM rendelet 2008-as módosítása a baromfitífusz elleni védekezésről és a mentesség megtartásáról -180/2009 (XII. 29.) és a 66/2009 (I.4.) FVM rendelettel módosított 2/2008. (I.4.) FVM rendelet a szalmonellózis elleni védekezés egyes szabályairól általános rendelkezések házityúk és pulyka tenyészállomány házityúk tojóállomány házityúk brojler-és hízópulyka-állomány

20 Szalmonella izolálás Módszer: ISO 6579 Annex D
Minták: az állatok hasznosításától és korától függően: 2-5 pár taposóminta, bélsár, szervek (máj, vakbél, vékonybél), meconium, tojás, környezeti minták, takarmány, víz - Hatékonyság: 1%-os előfordulás (prevalencia) mellett, 95%-os megbízhatóság (confidencia) Az ellenőrzések sűrítésével az 1% alatti fertőzöttség is felderíthető

21 EU rendeletben kiemelt szalmonellák:
B csoport: S. Typhimurium C csoport: S. Hadar, S. Infantis, S. Virchow D csoport: S. Enteritidis

22 Az izolálás menete 1. Első nap: Elődúsítás pufferolt peptonvízben
1:10 hígításban Inkubálás: 37°C, 18 óra

23 Az izolálás menete 2. Második nap: Inkubálás: 42°C, 24-48 óra
Dúsítás: kicseppentés MSRV talajra (gátlóanyag: malachitzöld, novobiocin) Inkubálás: 42°C, óra

24 Az izolálás menete 3. Inkubálás: 37°C, 24 óra Harmadik nap:
Kioltás: Rambach, XLD (differenciáló, szelektív) Inkubálás: 37°C, 24 óra

25 Az izolálás menete 4. Negyedik nap: Ha: negatív: levelezés
gyanú: biokémiai tulajdonságok vizsgálata glükóz 100% pozitív indol 99% negatív urea 98% laktóz/szaharóz negatív (arizonea +) Lizin-dekarboxiláz 95% H2S 92% gáz

26 Az izolálás menete 5. Ötödik nap: Összefoglalva:
biokémiai tulajdonságok alapján: negatív-levelezés pozitív: salm. gyanu Szerotipizálás: Kauffmann-White séma szerint az Élelmiszer-és Takarmánybiztonsági Igazgatóságon(ÉTbI) Nemzeti Referencia Laboratórium Összefoglalva: negatív minta: elődúsítás, dúsítás, kioltás, bírálat=4-5nap gyanús minta:biokémiai tulajdonságok vizsgálata+1nap szerotípizálás: kb.: +2 nap (ÉTbI)

27 Az állatok fertőzésektől való védelme, az antibiotikumok hatásosságának megtartása érdekében:
A fertőzések elleni küzdelemben szigorúan az állattartás szabályai szerint járjunk el Antibiotikumokat csak indokolt esetben, terápiás adagban, az alkalmazási előírásoknak megfelelően használjunk Az élelmezés-egészségügyi várakozási időket tartsuk meg A sikeres terápia érdekében szükséges a baktériumok rezisztenciájának alakulását folyamatosan követni.