Listeria monocytogenes

Az előadások a következő témára: "Listeria monocytogenes"— Előadás másolata:

1 Listeria monocytogenes
Gram+ rövid pálca 0,5-1 – 1-2 μm spóra nincs csilló 16 szerotípus

2 Morfológia

3 Előfordulás szaporodni képes: növények szilázs takarmány
talaj (barna erdőtalaj) víz szennyvíz növények szilázs takarmány egészséges állatok és ember bélcsatornája élelmiszerek: nyers hús húskészítmény baromfi tej

4 Fertőzést okozó élelmiszerek
nyerstej lágysajtok camembert, brie hús zöldség

5 Ellenállóképesség Talaj, víz, szennyvíz: hónapokig túlél, sőt szaporodik is!!! >60°C, fertőtlenítőszerek: perceken belül elpusztul 10% NaCl koncentrációig szaporodik Min. pH=4,4 (szerves savak jobban elpusztítják, mint a szervetlenek) Fagyasztást, szárítást jól bírja

6 Tenyésztés Fakultatív anaerob 0-42°C (optimum: 37°C)
20-25°C: csillós, bukfencező mozgás Közönséges agar: apró, kerek. Henry-féle megvilágításban kékesfehér fényű telep. Véres agar (juh, szm., ló): keskeny, β-hemolízises udvar.

7 Dúsító Fraser leves LiCl, nalidixinsav, akriflavin-hidroklorid: gátlóanyagok eszkulin, ammónium-vas(III)-citrát: differenciáló rendszer glükóz-eszkulin → β-D-glükozidáz enzim → glükóz + eszkuletin → eszkuletin + Fe3+ → olívazöld, fekete komplex

8 Fraser leves

9 Szilárd táptalajok Oxford-agar Palcam agar
LiCl, nalidixinsav, akriflavin-hidroklorid, eszkulin, ammónium-vas(III)-citrát Barnászöld, fekete udvarú telepek Palcam agar Polimixin-B, akriflavin, lítium-klorid, Na-ceftazimid, aesculin, mannit Szürkés-zöld, fekete udvarú telepek Ez jóval szelektívebb az Oxford agarnál

10 Oxford & Palcam agar

11 minta + első dúsító (feles erősségű Fraser leves)
A vizsgálat menete minta + első dúsító (feles erősségű Fraser leves) ↓ Inkubálás 30°C, 24±2h ↓ ↓ Szélesztés Palcam és Oxford agarra ,1 ml tenyészet 10 ml második ↓ dúsítóba (Fraser leves) Inkubálás 30, 35 vagy 37°C, ↓ 24±2h (+24h ha szükséges) Inkubálás 35 vagy37°C, 48±2h ↓ ↓ Megerősítés Szélesztés Palcam és Oxford agarra ↓ Inkubálás 30, 35 vagy 37°C, ±2h(+24h ha szükséges) Megerősítés

12 Megerősítés Kataláz próba: + Gram festés: +, karcsú, rövid pálca
Mozgásvizsgálat: telepet leoltani tripton-szója-élesztő levesbe, 25°C, 8-24 óra → 1 csepp tárgylemezre → körkörös, bukfencező mozgás lágy agarba szúrókaccsal mély leoltás, 25 °C 8-24 óra → esernyő formájú növekedés

13

14 Megerősítés - Haemolysis
Hemolízis: juhvéres agaron, 37°C, 24 óra L. monocytogenes: egyenletes, tiszta, világos, keskeny β-hemolízis L. ivanovii: széles, világos β-hemolízis L. innocua: nincs feltisztulás L. seeligeri: gyenge β-hemolízis

15 Haemolysis

16 Haemolyis

17 Megerősítés – CAMP próba
CAMP-próba (Christie, Atkins, Munch, Paterson) Juhvéres agarra oltókaccsal ismert β-hemolízáló Staphylococcus aureus- és Rhodococcus equi-csíkot húzunk → Listeria monocytogenes β-hemolízise felerősíti a Staphylococcus aureus haemolysisét → csésze, ásó alakú feltisztulás (A L. ivanovii ugyanezt csinálja, csak a Rhodococcus equi-vel)

18 CAMP test

19 Megerősítés Henry-féle megvilágítás: 45°-ban alulról világított Petri-csésze kékes szín Savtermelés cukrokból: ramnóz(+) xilóz(-)

20 Henry-féle megvilágítás

21 Azonosítás Fajok Hemo-lízis Savtermelés CAMP-teszt ramnóz xilóz
S. aureus Rh. equi L. monocytogenes + - L. innocua V L. ivanovii L. seeligeri (+) L. welshimeri L. grayi subsp. grayi L. grayi subsp. murray V: változó reakció; (+): gyenge reakció; + : >90%-ban pozitív reakció; - : nincs reakció

22 Campylobacter jejuni Gram-, S-alakú, hajlott pálca 0,2-0,8 – 0,5-5 μm,
öreg tenyészetben coccoid 0,2-0,8 – 0,5-5 μm, spórátlan Dugóhúzó-szerű mozgás poláris flagellum a sejt egyik v. mindkét végén

23 Campylobacter jejuni

24 Campylobacter jejuni

25 Általános tulajdonságok
Microaerophil (3-5% O2 és 2-10% CO2) 30,5-45°C (optimum: 42°C – generációs idő még itt is hosszú: ~ 1 óra) Energiát aminosavak, trikarboxi-savak bontásából nyer, szénhidrátokat nem bont Kataláz+, Oxidáz+

26 Általános tulajdonságok
Metilvörös-, Voges-Proskauer- Indol-, lipáz-, lecitináz- Zselatint, keményítőt, kazeint nem bontja Nitrátredukció+ Fumarátot redukálja szukcináttá Hippurát-hidrolízis+ (csak C. jejuni!) Rezisztencia: nalidixsav- cephalotin+

27 Előfordulás Állatok, ember bélcsatornájának természetes lakója; madarak tűnnek a természetes rezervoárnak; környezetben nem bizonyított, de feltételezhető a túlélése Közvetítő: főleg baromfihús (csirke), de más élelmiszerek (tej, víz) közvetítő szerepe is lehetséges

28 Fertőzési források (fontossági sorrendben)
Rosszul hőkezelt baromfi Nyers baromfi feldolgozása Háziállatokkal való érintkezés Utazás, kirándulás Nyerstej fogyasztása

29 Ellenállóképesség Élelmiszerekben hűtve sokkal jobban túlél, mint szobahőmérsékleten Felületeken, kézen ~1 óráig túlél Fagyasztás sem pusztítja el teljesen Vákuumcsomagolást jól bírja, oxigénre érzékenyebb 55°C-on hamar elpusztul Szárítást nem bírja, de bizonyos (alacsony) hőmérsékleten így is túlél Sózásra, savanyú pH-ra érzékeny

30 Tenyésztés 1. lépés: dúsítás 42°C-on, 24-48 óráig
2. lépés: izolálás szelektív agaron 42°C-on, óráig, microaerophil körülmények között 3. lépés: megerősítés

31 Dúsítók Preston leves: Bolton leves:
Fe(II)-szulfát, Na-metabiszulfit, Na-piruvát, vér: oxigén-gyökök megkötése Polymyxin-B Bolton leves: a ketolgutársav, Na-metabiszulfit, Na-piruvát, Na-karbonát Lóvér Cycloheximide, cefoperazone, vancomycin, trimethoprim

32 Táptalajok Mikroaerofil tenyésztés!!!
Skirrow agar, Butzler agar, Preston agar, Blaser-Wang agar: hasonlók, a különbség a szelektív adalékokból adódik: (vancomycin, polymyxin, thrimethoprim, bacitracin, cycloheximide, colistin-sulphate, cephazolin-sodium, novobiocin, cephalotin, amphoterecin B, stb.) Karmali agar: aktív szén, haematin mCCDA agar: modified charcoal cefoperazone deoxycholate agar: az oxigén megkötését az aktív szén végzi; telepek: cseppszerűek, színtelenek v. szürkék

33 mCCDA

34 Megerősítés 1. Kataláz+ 2. Oxidáz+ 3. Gram-festés: - 4. Natív kenet,
függőcsepp-készítmény: dugóhúzó-szerű mozgás

35 Megerősítés 5. Hippurát-hidrolízis: 0,4 cm3 Na-hippurát-oldat beoltása → 37°C, 2 óra → + 1 csepp ninhidrin-reagens → 5 perc 100°C → +: lila szín Csak C. jejuni + 6. Tenyésztés 25°C-on: nem nő 7. Rezisztencia- (érzékenység-) vizsgálat: nalidixinsavas korong → rátenni egy szelektív komponenseket nem tartalmazó, a vizsgált tenyészettel beoltott agarra → 42±1°C, óra → pozitív esetben gátlási zóna figyelhető meg. A C. jejuni mindig érzékeny a nalidixinsavra!