GAZDA GRAS: generally recognized as safe Intracelluláris / szekréció Proteázok Termelés, szekréció szinkronizálás Gazda kialakítása.

Az előadások a következő témára: "GAZDA GRAS: generally recognized as safe Intracelluláris / szekréció Proteázok Termelés, szekréció szinkronizálás Gazda kialakítása."— Előadás másolata:

1 GAZDA GRAS: generally recognized as safe Intracelluláris / szekréció Proteázok Termelés, szekréció szinkronizálás Gazda kialakítása

2 VEKTOR Plazmid –RC –Θ, runaway Integrációs –Homológ rekombináció, géncsere –attP/B, int, xis –CRE-lox –transzpozon

3 Szelekciós marker Antibiotikum Food grade –Nisin –Esszenciális gén / hiánymutáns törzs (stabilitás is)

4 Promóter Konstitutív Szabályozható –Ki-be kapcsolás

5 Nagy sejtsűrűségű tenyészet high cell-density culture (HCDC) Limitál az oldott oxigén –Vitreoscilla hemoglobin gén

6

7

8

9

10 Prokarióta expressziós vektor

11 Expresszió optimalizálása E. coli- ban Promóter Transzkripciós terminátor Transzláció iniciáció Transzlációs enhncer (néhány gén nem transzlálódó 5’ régiója) Transzlációs terminátorok UAAu mRNS stabilitása: stem loop 5’ és 3’ végeken Kodon használat Proteolízis: N-end rule

12 Promóterek

13 Sejt kompartmentek

14

15

16

17 Szekréció

18

19 Bacillus subtilis

20

21

22

23 Tejsav baktériumok LAB functional food

24

25

26 LAB, vakcinálásra

27 Integráció DNS-t módosító enzimekkel

28

29

30

31

32

33

34 Pseudomonas

35

36

37

38

39

40 Élesztők

41 Huma -nizált Pichia Enzim Trichoderma reesei-ből

42 five major areas: (i) elimination of initiating a1,6-mannosyltransferase activity; (ii) proper subcellular localization of processing enzymes using combinatorial genetic libraries; (iii) using catalytic domains from several different sources, (iv) assuring the availability of UDP–GlcNAc in the Golgi; (v) rapid screening of large numbers of recombinant glycoproteins for the desired oligosaccharide structure.

43 Y2H

44

45 Integráció kromoszómába CRE-lox

46

47

48 G+ LGB

49

50 Phage-display, baktérium display

51 M13 filamentous phage

52 Phagemid vektorhoz helper fág kell

53

54

55

56 Oligo kazetta mutagenezis, ha a cél aminosavak egymáshoz közel vannak.

57 D N A s h u ff li n g K e v e r é s

58 Szelekció vezérelt evolúció után

59 Drog célpont keresés

60

61 Aspergillus

62 ProteolízisProteolízis

63

64

65