Élősejtszám meghatározás

Az előadások a következő témára: "Élősejtszám meghatározás"— Előadás másolata:

1 Élősejtszám meghatározás
2. gyakorlat

2 Értékelés Telepszámlálás MPN

3 Telepszámlálás Az inkubálás után megszámoljuk a telepeket
A telepeket valamennyi, legfeljebb 300 telepet tartalmazó, lemezen megszámoljuk Az értékelésben a 10 és 300 közötti telepet tartalmazó lemezek vesznek részt

4 Telepszámlálás Problémák Szétfutó telepek Összefolyó telepek
Lehetséges megoldás a lemez részekre osztása, és az így kapott mikrobaszám extrapolálása

5 Az eredmény kiszámítása
90 mm átmérőjű Petri-csészék használatakor: Maximálisan számolható telep: 300/lemez Ha a Petri-csésze átmérője nem 90 mm (vagy membránt használtunk) a számolható telepek mennyiségét méretarányosan növelni, vagy csökkenteni kell

6 Az eredmény kiszámítása
Két hígításból számolunk, úgy hogy legalább 10 telep legyen egy Petri-csészén A minta mikrobaszámának megadása (N) a következő egyenlettel történik: Ahol SC a két lemezen megszámolt összes telep V az inokulum térfogata (ml) d az első megszámolt lemez hígítási foka (a hígítatlan mintáé 1)

7 Az eredmény kiszámítása
Példa: az első megszámolt hígításban (d=10-2): 168 telep a második megszámolt hígításban: 20 telep Inokulum (V): 1 ml az eredmény: 1,7 x 104 cfu/g(ml)

8 MPN (Most Probable Number) módszer
Meghatározzuk a különböző hígításokhoz tartozó pozitív csövek számát A pozitív csövek száma alapján kulcsszámot képezünk Kulcsszám alapján MPN értéket (táblázatból) határozunk meg MPN alapján a hígítás figyelembe vételével kiszámítjuk a kiinduló sejtszámot

9 Értékelés Példa: hígításonként 3 párhuzamos leoltás
A kulcsszám első tagja az az utolsó hígítás, amelyben még maximális a pozitív csövek száma: 300 A figyelembe veendő hígítás (d): 10-2 Hígítás (d) 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 Pozitív csövek száma 3

10 Értékelés A kulcsszámhoz tartozó MPN érték (táblázatból)
MPNd(300) = 2,3 Kulcsszám MPN 300 2,3 310 4,3 320 9,3 321 15 330 24 331 46 332 110

11 Értékelés A minta sejtszámának (MPN0) kiszámítása a kulcsszám és a hígítás figyelembe vételével: MPN0 = MPNd/d = 2,3/10-2 MPN0 = 2,3 x 102 /g(ml)

12 Értékelés Kategóriák (a kulcsszámok előfordulásának valószínűsége szerint) 1. 2. 0. Figyelembe venni általában csak az 1.és néha a 2. kategóriába tartozó eredményt szabad. A 0. kategóriába tartozó eredmény nem vehető figyelembe!