Proteomika, avagy a fehérjék „játéka”

Az előadások a következő témára: "Proteomika, avagy a fehérjék „játéka”"— Előadás másolata:

1 Proteomika, avagy a fehérjék „játéka”
2011. november 23. Borsodi Vegyipari Napok Készítette: Lukács Fanni, Nagy Viktória

2 Tartalom Honnan jött az ötlet? Proteomika Első kísérlet
Elektroforézis Második kísérlet Fehérjeszintézis + Elektroforézis Felhasználás

3 Tartalom Honnan jött az ötlet? Proteomika Első kísérlet
Elektroforézis Második kísérlet Fehérjeszintézis + Elektroforézis Felhasználás

4 Comenius Projekt „The game of the proteins”
Hamburg Pforzheim

5 Tartalom Honnan jött az ötlet? Proteomika Első kísérlet
Előkészületek, Elektroforézis Második kísérlet Fehérjeszintézis + Elektroforézis Felhasználás

6 Proteomika Mivel foglalkozik? Mivel foglalkoztunk mi?
Minőségi, mennyiségi analízis Fehérjeszintézis Eredet meghatározás Rendszertani besorolás Mivel foglalkoztunk mi? Izomfehérje komplexek tömeg szerinti szétválasztása

7 szarkomer = aktív izom egység
Izomfehérjék izom izomfonalak egy izomfonál szarkomerek szarkomer = aktív izom egység

8 Csúszó filamentum elmélet
szarkomer miozin aktin miozin fej miozin molekula

9 Tartalom Honnan jött az ötlet? Proteomika Első kísérlet
Elektroforézis Második kísérlet Fehérjeszintézis + Elektroforézis Felhasználás

10 makromolekulák keveréke az elektroforézis futási iránya
Elektroforézis  fehérjék irányított vándorlása Kisebb fehérjék  gyorsabbak makromolekulák keveréke elektroforézis az elektroforézis futási iránya porózus gél

11 Vándorlást biztosító közegek
Nátrium-dodecil-szulfát Töltés-tömeg arány azonos Vándorlási sebesség csak M-től függ Hátrány = denaturálja a fehérjét

12 Vándorlást biztosító közegek
2. Poliakrilamid Elválasztandó anyagokkal nem reagál Gélképző Pórus átmérője szabályozható Ellenálló

13 Kaleidoszkóp standard
Segédanyagok Lammli-puffer Másodlagos kötések felbontása pH megtartása Commassie-kék Megfestés  látható fehérje oldat Kaleidoszkóp standard Meghatározhatóvá teszi a fehérje M-ét Kaleidoszkóp standard

14 Gélelektroforézis folyamata I.
Fehérjék denaturálása Elektrolizáló cella előkészítése Puffer oldat beletöltése Gél-rések feltöltése fehérje oldatokkal 200V-ra kapcsoljuk a cellát (kb. 2 óra) puffer-tartály szorító-keret  elektród állvány vakkazetta

15 Gélelektroforézis folyamata II.
Gél színezése Comassie-oldattal Kaleidoszkóppal kalibrálási görbe készítése Fehérje tömegének meghatározása Vándorlási távolság (mm) Kalibrációs görbe Molekula tömeg (KDa)

16 Eredményeink és a mi gélünk
Miozin( 204 KDa) Aktin (42 KDa) Kaleidoszkóp standard

17 Tartalom Honnan jött az ötlet? Proteomika Első kísérlet
Előkészületek, Elektroforézis Második kísérlet Fehérjeszintézis + Elektroforézis Felhasználás

18 Fehérjeszintézis DNS transzkipció mRNS transzláció fehérje

19 Mesterséges fehérjeszintézis
Felhasznált anyagok Aminosavak (például: metionin) Reakció mix RNS polimeráz enzim, faktorok, ATP, koenzimek Puffer oldat GFP kontrol vektor E. coli baktérium Fehérje előállítása után gélelektroforézist végeztünk Megmértük a fehérje vándorlási távolságát, tömegét

20 Tartalom Honnan jött az ötlet? Proteomika Első kísérlet
Előkészületek, Elektroforézis Második kísérlet Fehérjeszintézis + Elektroforézis Felhasználás

21 Felhasználás Sokoldalú felhasználás Fém felületek bevonása
Anyagok elválasztása Festés Betegségek diagnosztizálása

22 Köszönjük a figyelmet!