Előadást letölteni
Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon
1
21.09.20161 SDS-PAGE Kísérleti protokoll
2
21.09.20162 1.1Címkézzen meg 1,5 ml-es zárható tetejű mikrocsöveket a halminták neveivel. 1. Minta előkészítés
3
21.09.20163 1.2Mérjen ki 250µl Laemmli minta puffert minden egyes címkézett csőbe. 1. Minta előkészítés
4
21.09.20164 2. Fehérje kivonás 2.1Minden mintához készítsen elő egy darab halizmot (1g), és tegye bele a címkézett mikrocsövekbe.
5
21.09.20165 2.2Rázza fel a cső tartalmát, majd 5 percig szobahőmérsékleten inkubálja a mintákat. 2. Fehérje kivonás
6
21.09.20166 2. Fehérje kivonás 2.3Címkézett, csavaros tetejű csőbe öntsön le 18µl-t a pufferből, ami tartalmazza a kivont fehérjéket. Ne pipettázza át a haldarabot!
7
21.09.20167 95°C 2. Fehérje kivonás 2.4Melegítse 5 percig 95°C-on a hal, illetve aktin és miozin mintákat.
8
21.09.20168 3. Az elektroforézis gél előkészítése 3.1Vágja végig a vonal mentén és vegye ki a gél kazettát.
9
21.09.20169 3. Az elektroforézis gél előkészítése 3.2 A vonal mentén borotvapengével vagy szikével vágja fel a gél kazetta ragasztószalagját, és távolítsa el alsó szalagot.
10
21.09.201610 4.. Az elektroforézis kamra előkészítése 4.1 Rakja a gél kazettát a rövidebb végével befelé fordítva az elektród-kamrába. Rakjon egy másik gél kazettát vagy egy vak kazettát a kamra másik oldalára is. 4.2Nyomja le az elektród állványt, miközben bezárja a szorítókeret két karját. 4.3Eressze le a belső kamrát a mini tankba.
11
21.09.201611 5. A kamra megtöltése pufferrel 5.1Töltse meg a belső kamrát 140 ml TGS elektroforézis pufferrel. 5.2Töltse meg a mini tankot 200 ml TGS elektroforézis pufferrel.
12
21.09.201612 6. A gél feltöltése - A jobb és a bal nyílás üresen marad. - A maradékot töltse meg a következőkkel: - 10 µl Kaleidoszkóp standard (KS) - 10 µl aktin és miozin standard (AM) - - 10 µl minta (Ügyeljen a protokoll sorrendjére!) -- P1 P2 P3 P4 P5 AM KS --
13
21.09.201613 7. Az elektroforézis végrehajtása Zárja be a gél kamrákat és kezdje meg a gélelektroforézist 200V-on Állítsa le a folyamatot, amikor a Bróm-fenol kék eléri a gél alacsonyabb végét. ( ez kb. 25 percet vesz igénybe.)
14
21.09.201614 8. A gél kivétele 8.1 Távolítsa el a szorító keretet és öntse bele a puffert a konténerbe. A puffer újrahasznosítható! 8.2 Vegye ki a gél kazettát, majd fektesse le a rövidebb felével fölfelé.
15
21.09.201615 8. A gél kivétele 8.3A gél kazetta oldalai mentén vágja el a ragasztószalagot.
16
21.09.201616 9.1 Távolítsa el a gél tabletta tetejét, az alját rajta a géllel tegye bele egy vízzel teli színező tálkába. 9.2A víz alatt válassza szét a gélt a tablettától. 9.3Cserélje ki a vizet 70 ml Coomassie-oldattal, és színezze 1 órán keresztül. 9. A gél színezése
17
21.09.201617 10. A gél újraszínezése 10.1 Egy óra elteltével öntse le a színező oldatot. 10.2 Folyó víz alatt színezze át a gélt. (addig amíg a gél hátulja színtelen nem lesz).
18
21.09.201618 11. A gél vizsgálata 11.1Állapítsa meg az izomfehérjékbeli különbségeket az egyes fajtákban. 11.2Kalibrációs görbe használatával határozza meg a két fehérje molekuláris súlyát.
Hasonló előadás
