Modern Orvostudományi Technológiák a Semmelweis Egyetemen Terápiás modul Molekuláris medicina Balla András, Erdélyi László, Hunyady László Élettani Intézet november 15.
G-protein kapcsolt receptorok aktivációs modelljeinek elemzése
A receptor aktiválódását követően a jelátviteli és a szabályozási mechanizmusok is aktiválódnak. Agonista G-fehérje JELÁTVITEL INTERNALIZÁCIÓ DESZENZITIZÁCIÓ β-arresztin
Endoplazmás retikulum A receptor mutációinak következményei.
G-fehérje JELÁTVITEL INTERNALIZÁCIÓ Antagonista Endoplazmás retikulum Antagoni sta
G-fehérje JELÁTVITEL INTERNALIZÁCIÓ Sel.Ag. Endoplazmás retikulum Sel.Ag.
Elkülöníthető-e a G-fehérje és a β-arresztin aktiválását létrehozó konformáció? Agonista G-fehérje JELÁTVITEL INTERNALIZÁCIÓ DESZENZITIZÁCIÓ β-arresztin
Az AT 1 -receptor aktiválódásának hatásai. G fehérje aktiválás ß-arrestin kötés Internalizáció Stim
SII-AngII G-fehérje JELÁTVITEL INTERNALIZÁCIÓ DESZENZITIZÁCIÓ β-arresztin Jelátvitel szelektív agonista: Sar 1,Ile 4,Ile 8 -Ang II (SII-AngII).
G fehérje aktiválás ß-arrestin kötés Internalizáció Az AngII egyik peptid analógja (Sar 1,Ile 4,Ile 8 -Ang II) nem képes G-fehérjét aktiválni, de létrehozza a receptor internalizációját. Stim Time (sec) ΔBRET Ratio
Nefrogén diabetes insipidus XR öröklött forma 2-es típusú vazopresszin receptor és mutációi: Tünetek: polyuria polydypsia hyposthenuria Vízfogyasztás: ~ 10 l/nap Vazopresszin adásával NEM kezelhető frameshift missense mutáció deléció
Személyre szabott terápia: a betegséget okozó mutáció azonosítása és karakterizálása M.G. beteg, a klinikai kép nefrogén diabetes inspidusra utal II. Sz. Belgyógyászati Klinika Dr. Tóth Miklós, Dr. Patócs Attila, Prof. Dr. Rácz Károly A mutációt azonosítottuk a genomból: Aszparigin-lizin csere a 2-es típusú vazopresszin receptor 321. aminosav pozíciójában (ritka,nem karakterizált mutáció)
A funkcióvesztés mechanizmusa és terápiás lehetőségek Célunk olyan farmakológiai chaperonok azonosítása, melyek segítik a recetor kihelyeződését a plazmamembránba, illetve szelektív agonistaként működve jelátvitelt indíthatnak el, de β-arresztint nem aktiválnak. ER retenció Megváltozott β-arresztin kötés és internalizáció Csökkent cAMP generálás
Az N321K mutáció vizsgálata A mutáció vizsgálatára alkalmas módszerek beállítása: 1.Receptor sejtfelszíni expresszió mérés fluoreszcens fehérjékkel 2.β-arresztin kötés vizsgálata 3.cAMP jel detektálására alkalmas módszer beállítása A cAMP szignál vizsgálata: Epac fehérje szenzort tartalmazó BRET szonda készítése és validálása
EPAC-BRET bioszenzor működése REM VLVLE GEF mV Sluc REM VLVLE GEF mV Sluc cAMP Stim
Az N321K mutáció vizsgálata A cAMP szignál vizsgálata:
Az N321K mutáció vizsgálata A β-arresztin kötés vizsgálata: Fluoreszcensen jelölt β-arresztin detektálása konfokális mikroszkóppal a receptor stimulusa előtt és után Vad típus N321K AVP előtt AVP után
Nem a plazmamembránban elhelyezkedő mutáns receptor Fiziológiás koncentrációban hatástalan AVP Károsodott β-arresztin kötés Következő lépés: olyan peptid- és nem-peptid vazopresszin receptor ligandok azonosítása, amelyek a károsodott receptor működését helyreállítják
Köszönöm megtisztelő figyelmüket!