A "programozott sejthalál" (apoptosis)

Slides:



Advertisements
Hasonló előadás
Nitrogén vizes környezetben
Advertisements

Logaritmikus keresés Feladat: Adott egy 11 elemű, növekvően rendezett tömb számokkal feltöltve. Keressük meg a 17-es értéket! Ha van benne, hányadik eleme.
A társadalmi tényezők hatása a tanulásra
Királis Technológiákat Fejlesztő Kft Budapest, Rumbach S. 7. Telefon: Fax: web:
dr. BALLA TÜNDE, dr. BORSICS KÁLMÁN
MATEMATIKA Év eleji felmérés 3. évfolyam
AZO-SZÍNEZÉKEK VIZES OLDATÁNAK IMPULZUS- ÉS  - RADIOLÍZIS VIZSGÁLATAI Pálfi T., Takács E., Wojnárovits L., MTA KK Izotóp- és Felületkémiai Intézet.
Pályakezdők munkával való elégedettsége Kiss Paszkál ELTE PPK Társadalom- és Neveléspszichológiai Tasznék.
KÉMIAI SZÁMÍTÁSOK A VEGYI KÉPLET ALAPJÁN
a szülői elégedettségmérés legfontosabb eredményeiről
Peptid alapú radiofarmakonok a diagnosztikában és terápiában
Szervetlen kémia Hidrogén
Az új történelem érettségiről és eredményeiről augusztus Kaposi József.
Utófeszített vasbeton lemez statikai számítása Részletes számítás
Mikronalalitikai kurzus aminosav analízis
A tételek eljuttatása az iskolákba
VÁLOGATÁS ISKOLÁNK ÉLETÉBŐL KÉPEKBEN.
Aszociációs kolloidok, micellaképződés
1. IS2PRI2 02/96 B.Könyv SIKER A KÖNYVELÉSHEZ. 2. IS2PRI2 02/96 Mi a B.Könyv KönyvelésMérlegEredményAdóAnalitikaForintDevizaKönyvelésMérlegEredményAdóAnalitikaForintDeviza.
Anjou-kori könyvfestészet:
FOLYADÉKKROMATOGRÁFIA
Sárgarépa piaca hasonlóságelemzéssel Gazdaság- és Társadalomtudományi kar Gazdasági és vidékfejlesztési agrármérnök I. évfolyam Fekete AlexanderKozma Richárd.
Ma sok mindenre fény derül! (Optika)
Hyperuricaemia és hypertonia Hypertonia Központ Óbuda, Budapest
DRAGON BALL GT dbzgtlink féle változat! Illesztett, ráégetett, sárga felirattal! Japan és Angol Navigáláshoz használd a bal oldali léptető elemeket ! Verzio.
CITRÁTKÖR = TRIKARBONSAV-CIKLUS
Nem esszenciális aminosavak szintézise
Fekete László Született: Csillagjegye: Vízöntő
Híres magyar nők.
A KÉMIAI EGYENSÚLY A REAKCIÓK MEGFORDÍTHATÓK. Tehát nem játszódnak le végig, egyensúly alakul ki a REAKTÁNSOK és a TERMÉKEK között. Egyensúlyban a termékekhez.
Szervetlen kémia Hidrogén
szakmérnök hallgatók számára
Peptidszintézis BIM SB 2001 SZINTÉZIS PROTE(IN)ÁZ BONTÁS -CO-NH- (1901)
A évi demográfiai adatok értékelése
A évi demográfiai adatok értékelése
A évi demográfiai adatok értékelése
Egészségügyi Mérnököknek 2010
Logikai szita Pomothy Judit 9. B.
Logikai szita Izsó Tímea 9.B.
AGY1 Gömbgrafitos öntöttvas szövetszerkezetének jellemzése képelemzés segítségével Szalai Ibolya - DUNAFERR Rt. Innovációs Menedzsment.
A szemcsehatárok tulajdonságainak tudatos módosítása Szabó Péter János BME Anyagtudomány és Technológia Tanszék Anyagvizsgálat a gyakorlatban (AGY 4) 2008.
A szemcsehatárok tulajdonságainak tudatos módosítása
Izotóp Intézet Kft. Radiokémiai szennyezők vizsgálata etilén-diamin-tetrametilén-foszfonát (EDTMP) és ón(II)-klorid tartalmú liofilizátumok öregedését.
Andráskó Melinda, Huszár László, Korpás Gábor, Környei József
ŐSZI RADIOKÉMIAI NAPOK 2004
Szerviztevékenység jövedelmezősége Ausztriában Varsányi Gyula GÉMOSZ konferencia, május 20.
LENDÜLETBEN AZ ORSZÁG A Magyar Köztársaság kormánya.
Hidroxiapatit alapú biokompatibilis nanokompozitok előállítása
7. Házi feladat megoldása
1 Konjunktúrajelentés 2009  Az üzleti helyzet és várakozások  A befektői környezet A DUIHK 15. konjunktúrafelmérése Dirk Wölfer április 21.
Megoldások az együttműködés segítségével AGP – Mezőgazdasági Konferencia június Harkány Hogyan reagáljunk a sertéságazatot érintő mai kihívásokra?
ESETISMERTETÉS Semmelweis Egyetem ÁOK, I.sz. Belgyógyászati Klinika
Csurik Magda Országos Tisztifőorvosi Hivatal
A klinikai transzfúziós tevékenység Ápolás szakmai ellenőrzése
Doktorans Konferencia Enantiomer szelektív enzimatikus acilezés vizsgálata gyűrűs alkoholokon Készítette: Tomin Anna Szerves Kémia és Technológi.
A SIKÉRALKOTÓ GLUTENIN ALEGYSÉGEK VIZSGÁLATA BME, 4. Doktoráns Konferencia, február Abonyi Tibor III. évf. PhD hallgató Témavezető: Prof. Dr. Lásztity.
QualcoDuna interkalibráció Talaj- és levegövizsgálati körmérések évi értékelése (2007.) Dr. Biliczkiné Gaál Piroska VITUKI Kht. Minőségbiztosítási és Ellenőrzési.
TÁRSADALOMSTATISZTIKA Sztochasztikus kapcsolatok II.
1. Melyik jármű haladhat tovább elsőként az ábrán látható forgalmi helyzetben? a) A "V" jelű villamos. b) Az "M" jelű munkagép. c) Az "R" jelű rendőrségi.
Szilágyi Petra Ágota PhD hallgató ELTE TTK Magkémiai Tanszék, Budapest CNRS LCC Équipe P, Toulouse (Franciaország) Vaskomplexek és fotodegradációjuk, valamint.
GAZDASÁGI ADOTTSÁGOK ÉS FEJLŐDÉSI IRÁNYOK A délkelet-európai országok Novák Tamás MTA – VKI május 16.
Kvantitatív módszerek
VI/1. dia Az etoricoxib tolerálhatósági profilja.
TÁRSADALMI VERSENYKÉPESSÉG ÉS SIKER A MAGYARORSZÁGI NAGYVÁROSI TÉRSÉGEKBEN BARÁTH GABRIELLA PHD TUDOMÁNYOS MUNKATÁRS KODOLÁNYI JÁNOS FŐISKOLA A MAGYAR.
> aspnet_regiis -i 8 9 TIPP: Az „Alap” telepítés gyors, nem kérdez, de később korlátozhat.
A TÁRSADALMI JÓL- LÉT KÉRDÉSEINEK ÖSSZEHASONLÍTÁSA EGYES SZOLGÁLTATÓ SZEKTOROKBAN Készítette: Folmegné Czirák Julianna
1 Az igazság ideát van? Montskó Éva, mtv. 2 Célcsoport Az alábbi célcsoportokra vonatkozóan mutatjuk be az adatokat: 4-12 évesek,1.
Az ÉMGK tagvállalatainak szakképzési igényei Miskolc, június. 09. Dr. Barkóczi István – ÉMGK elnök.
Szilárd fázisú peptidszintézis
A Fabry terápia fejlődése
Előadás másolata:

A "programozott sejthalál" (apoptosis) in vivo körülmények közötti kimutatását célzó peptid előállítása és jelzése 99mTc-radionukliddal   Szemenyei Erzsébet1, Tóth Géza1, Környei József 2 1MTA SZBK, Biokémiai Intézet, Szeged, 2Izotóp Intézet Kft. Budapest Őszi Radiokémiai Napok Eger 2004

Bevezetés Apoptózis: Programozott sejthalál. A természetes sejthalál egyik formája, a sejtek mindig ugyanazon a helyen és időben genetikailag meghatározott program szerint halnak el. Az elnevezés a régi görög nyelvből származik, ahol falevelek hullását jelentette. Az elhaló sejtek felszínén, a kettős membrán külső odalán megjelennek ezen sejtek felismerését lehetővé tévő molekulák, pl. a foszfatidil-szerin lipid-molekula.

Patrick Raynal, Harvey B. Pollard Bevezetés Annexin V:           • Ca2+ és foszfolipid kötő fehérjék családjának tagja, antikoaguláns tulajdonságokkal           • Nagyrészt a plazmamembrán citoszol felőli részén található          • Az érett annexin V 320 aminosavból áll, 35-36 kDa tömegű       • A fehérje négy ismétlődő rész, síkban ciklikus elrendeződésével alakul ki, az ismétlődő részek öt alfa-helikális szegmenst tartalmaznak Patrick Raynal, Harvey B. Pollard (1994) Biochimica et Biophysica Acta 1197, 63-93.

Merrifield-féle szilárd fázisú peptidszintézis Annexin V fragmentum szintézise Merrifield-féle szilárd fázisú peptidszintézis ANX13: 1. Ala-Gln-Val-Leu-Arg-Gly-Thr-Val-Thr-Asp-Phe-Pro-Gly-OH /AQVLRGTVTDFPG-OH/ 2. Ala-Gln-Val-Leu-Arg-Gly-Thr-Val-Thr-Asp-Phe-Pro-Gly-NH2 /AQVLRGTVTDFPG-NH2/ Alkalmazott gyanták, szintézis módszerek: 1. Merrifield-gyanta, Boc-kémia 2. 4-metil-benzhidril-amin gyanta, Boc-kémia A szintézis lépései: 1. Kapcsolás: 2 ekv. Boc-Xaa, 2 ekv. HOBt, 2 ekv. DCC, DCM 2. Védőcsoport eltávolítás: 50 % TFA/DCM, 10 % DIEA/DCM 3. A következő aminosav(ak) kapcsolása 4. Hasítás: HF(l), anizol, dimetil-szulfid, 0 ˚C

Analitikai adatok Peptidek Mr MS HPLC [M+H+] k`   AQVLRGTVTDFPG -OH 1359,75 1360,75 4,35 AQVLRGTVTDFPG -NH2 1358,68 1359,68 3,17 Tiszítás: (RP-HPLC, gradiens elúció) Vydac 218TP1010 (C18) oszlop, Gradiens:15 %-40 % A /25 perc A: acetonitril, B: víz (0,1% TFA), 4 cm3/perc Analitikai tisztaság vizsgálata: (RP-HPLC) Vydac 218TP54 (C18) oszlop, Gradiens:15 %-40 % A /25 perc A: acetonitril, B: víz (0,1% TFA), 1 cm3/perc Tömegspektrum adatok: Reflex III MALDI-TOF Kitermelés: AQVLRGTVTDFPG -OH: 20,4 % AQVLRGTVTDFPG -NH2: 49,6 %

Stabilitás vizsgálat Ala-Gln-Val-Leu-Arg-Gly-Thr-Val-Thr-Asp-Phe-Pro-Gly-OH, 12 hónap, -18 °C A vizsgálat kezdete 2003. 08. 11. 2003. 11. 14. 2004. 02. 16. 2004. 04. 19. Ala-Gln-Val-Leu-Arg-Gly-Thr-Val-Thr-Asp-Phe-Pro-Gly-NH2, 12 hónap, -18 °C A vizsgálat kezdete 2003. 08. 11. 2004. 04. 19. 2003. 11. 14. 2004. 02. 19. Vydac 218TP54 (250  4.6 mm), 215 nm, gradiens: 15 %-40 % ACN/25 perc, injektálás: 50 μl

CCANX13 szintézise, stabilitás vizsgálata Cys-Cys-Ala-Gln-Val-Leu-Arg-Gly-Thr-Val-Thr-Asp-Phe-Pro-Gly-OH /CCAQVLRGTVTDFPG-OH/ Alkalmazott szintézis módszer, gyanta: Merrifield-féle szilárd fázisú peptidszintézis, Boc-kémia, Merrifield-gyanta Analitikai adatok: Peptid Mr MS HPLC   [M+H+] k` CCAQVLRGTVTDFPG -OH 1565,92 1566,92 7,46 Kitermelés = 59,1 % Hővel szembeni stabilitás vizsgálata: 100 °C-on, fiziológiás sóoldatban hőkezelés nélküli 20 perc 1 óra

„Nitrido-jelzés” + + + 1. 2. -intermedier előállítása 15 perc SnCl2 TcO4- + szobahőmérséklet keverés 2. 99mTc-ANX13 -komplex előállítása 1 óra + + CCANX13 100 °C (Oldás: hidroxpropil--cikodextrin jelenlétében)

Vékonyréteg-kromatográfia Analitikai vizsgálatok Vékonyréteg-kromatográfia 99mTc-ANX13-PCN-komplex ET-31 aceton 99mTc-ANX13-PCN-komplex Kieselgel 60, F254 EtOH:víz 1:1 Rf érték: 0,03 100% Rf értékek: 0,02 4,22% 0,66 95,78%

Analitikai vizsgálatok 3 4 99mTcN-intermedier Kieselgel 60, F254 EtOH:víz 1:1 99mTc-PCN-komplex Kieselgel 60, F254 EtOH:víz 1:1 Rf érték:(3) 0,15 100% 5 99mTc-ANX13-PCN-komplex Kieselgel 60, F254 EtOH:víz 1:1 Rf értékek:(4) 0,15 12,97% 0,71 87,03% Rf értékek:(5) 0,15 8,72% 0,73 91,28%

Analitikai vizsgálatok 6 7 99mTcN-intermedier ITLC-SA 0,3 M-os HCl-val telített BuOH 99mTc-PCN-komplex ITLC-SA 0,3 M-os HCl-val telített BuOH Rf értékek:(6) 0,15 27,53% 0,22 48,59% 0,49 4,71% 0,66 19,17% Rf értékek:(7) 0,15 13,99% 0,38 19,91% 0,50 4,84% 0,61 14,22% 0,67 47,05% 8 99mTc-ANX13-PCN-komplex ITLC-SA 0,3 M-os HCl-val telített BuOH Rf értékek:(8) 0,14 11,81% 0,49 41,72% 0,52 31,73% 0,55 14,74%

Összefoglalás Sikeresen előállítottuk a Ala-Gln-Val-Leu-Arg-Gly-Thr-Val-Thr-Asp-Phe-Pro-Gly-OH és Ala-Gln-Val-Leu-Arg-Gly-Thr-Val-Thr-Asp-Phe-Pro-Gly-NH2 peptideket. A stabiltás vizsgálatból kiderült, hogy az –OH végű forma stabilabb, ezért a további vizsgálatokat ezzel végeztük. Elkészítettük a nitrido-jelzéshez szükséges, két ciszteinnel kiegészített ANX13-at, ennek hővel szembeni stabilitás eredménye azt mutatja, hogy a jelzésnél alkalmazhatjuk az 1 órás reakcióidőt. A jelzési reakció után vékonyréteg-kromatográfiával kimutattuk, hogy nincs szabad 99mTcO4- a rendszerben. (ET-31, aceton) A további vizsgálatok azt mutatták, hogy intermedier sincs jelen. (Kieselgel 60, EtOH: víz 1:1) Ugyanakkor, ebben a rendszerben nem válik el egyértelműen a 99mTc-PCN-komplex és a 99mTc-ANX13-PCN-komplex. Egy újabb futtatórendszeren és lapon elvégzett vizsgálatokból egyértelműen látszik, hogy a jelzés sikeres volt. (ITLC-SA, 0,3 M HCl-val telített BuOH) Célunkat elértük, sikerült előállítanunk a 99mTc-ANX13-komplexet, amely jelentős előrelépés egy tervezett radiogyógyszer kifejlesztésének következő fázisához, a preklinikai vizsgálatok megtervezéséhez.

Köszönöm a figyelmüket! Köszönetnyilvánítás Szeretnék köszönetet mondani munkatársaimnak: Tóthné Papp Évának és Papp Jánosné, Andreának valamint Rupert Anikónak és Paál Margitnak a hatékony segítségért. Köszönjük a Nemzetközi Atomenergia Ügynökség támogatását. Köszönöm a figyelmüket!