Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Medium for slice preparation (1 hour at 4 O C, refrigerator, freshly composed) 1. Gey’s Balanced Salt Solution 100 ml 100% 2. Glucose 45% 1.1ml ~ 5mg/ml.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "Medium for slice preparation (1 hour at 4 O C, refrigerator, freshly composed) 1. Gey’s Balanced Salt Solution 100 ml 100% 2. Glucose 45% 1.1ml ~ 5mg/ml."— Előadás másolata:

1 Medium for slice preparation (1 hour at 4 O C, refrigerator, freshly composed) 1. Gey’s Balanced Salt Solution 100 ml 100% 2. Glucose 45% 1.1ml ~ 5mg/ml Regular medium for long-term culturing (at 37 O C –on 1-2 hétig stabil, 5% CO 2 mellett. +4 C o -on való tárolás esetén is felhasználandó 2-3 héten belül) 1. Eagle Basal Medium (Hanks 50ml 50% (tf) 2. Hanks’ Balanced Salt Solutio 25ml 25% 3. Horse Serum (heat inactivated) 25ml 25% 4. Glucose 45% 1.1ml 5mg/ml 5. L-glutamine 0.2M 500  l 1mM 6. Penicilline-streptomycin mixture 500  l 25  l/ml-25  l/ml Szövet-szelet tenyészetek  m vastag szeletek; Membrán-felszín; Diffúziós átáramoltatás

2 Teljes (whole-mount) embrió „tenyésztés” Whole embryo culture (WEC) ; New, D.A.T.; 1950’ - 6 Napos (+12 órás) egér % frissen centrifugált patkány szérum mg/ml glukóz + O 2 átáramoltatás; Folyamatos lassú rotáció Osumi, Inoue; METHODS 24, 35–42 (2001) doi: /meth , Yokoo T et al. PNAS 2005;102: Hes5 expresszió; Varga B. Felvétele 2007 In vivo In vitro

3 megtermékenyítés 3 nap Fragmentálódó blasztomérák IVF : in vitro fertilization „kompact” embrióKorai blastocysta EB St 1 Korai blastocysta EB St 2 Korai blastocysta EB St 2-3 Tágult blastocysta EB St 4 2 nap Lane, Gardner; Best Practice & Research Clinical Obstetrics and Gynaecology Vol. 21, No. 1, pp. 83e100, 2007 Anyagcsere-igény jelentősen változik; optimális médium????

4 4,5 napos egér 6 nap in vitro

5 Embrioid csomó 10 nap in vitro R1 embrionális törzssejtvonal sejtjeinek in vitro fejlődése Gócza Elen felvételei ES kolónia Oct4, Aktin, DAPI

6 3.5 days old chimera embryo 1.GFB/B2 ES cell line aggregation ES cell chimera chimera new-borns Chimaera-állatok ES sejtek beépítésével Gócza Elen munkája

7 fibroblasztneural stem

8 Sejtvonalak és sejt-klónok Klónozó gyűrűvel való izolálás Sorozatos higítás ½ x Sejtvonal : sokszoros passzázs után fenotípusosan azonos sejtek Sejt-klón : egyetlen sejtből származó populáció; pheno- és genotípusát tekintve is azonos sejtek Klónozás primér tenyészetből, sejtszuszpenzióból

9 Sejt-klónok fenntartása geno-, fenotípus megtartása folytonos osztódások alatt Változás okai: Sejt-kölcsönhatások → fenotipikus változások környezeti hatások → feno- és genotípus változások (!) „Túlnövés” → gyorsan növekvő, sűrű körülmények között életképes sejt-változat szelektálódik Gén-szintű változások : valószínűség ~ Ellenőrzés: Kromoszómaszám meghatározás Növekedési ráta Fenotípus jellegzetességei GFP-4C Recultured GFP-4C MTT

10 General Cell Collection Hybridoma Collection Primary Cells HLA-Typed Collection Human Random Control Collection Human Genetic Collection DNA Products General Cell Collection: C1300 CLONE NA Catalogue No.: Cell Line Name:C1300 CLONE NA Keywords:Mouse neuroblastoma Cell Line Description: CLONE NA is a subclone of Neuro-2a, a clonal line of C1300 mouse neuroblastoma cells. The cells were selected for spontaneous mutations deficient in HGPRT in the presence of 8-azaguanine. This cell line has been mycoplasma eradicated at ECACC. Species:Mouse Tissue:Neural Morphology:Neuronal-like Growth Mode:Adherent Subculture Routine:Split sub-confluent cultures (70-80%) 1:3 to 1:6 i.e. seeding at 2-4x10,000 cells/cm² using 0.25% trypsin/EDTA; 5% CO2; 37°C. Cultures may not form a complete monolayer before subculture is required. Culture Medium:RPMI mM Glutamine + 10% Foetal Bovine Serum (FBS). ECACC – European Collection of Cell Cultures

11 Cell line:PK-15Cell type:pig kidney DSMZ no.:ACC 640 Origin:derived by single-cell cloning of the parent cell line PK-2a in 1957, which was established in 1955 from the kidney of an adult pig; cells were shown to carry an endogenous C-type retrovirus and to be susceptible to various viruses, e.g. viruses causing Hog cholera, African swine fever, and foot and mouth disease References:Pirtle and Woods,, Am. J. Vet. Res. 29: (1968), PubMed ID Armstrong et al.,, J. Gen. Virol. 10: (1971), PubMed ID Todaro et al.,, Virology 58: (1974), PubMed ID Depositor:Dr. C. Uphoff, DSMZ, Braunschweig, Germany ATCC® Number: CRL-2925™ Price: £378.00; € Designations: NE-4C Depositors: E Madarasz Biosafety Level:1 Shipped: frozenBiosafety Level: Medium & Serum: See Propagation Growth Properties:adherent Organism:Mus musculus (mouse) Morphology:neuroepithelialSee Propagation Source:Organ: brain Tissue: neuroectodermal Cell type: neural stem cell Strain: C57Bl/Sv129 Permits/Forms:In addition to the MTA mentioned above, other ATCC and/or regulatory permits may be required for the transfer of this ATCC material. Anyone purchasing ATCC material is ultimately responsible for obtaining the permits.MTAATCC and/or regulatory permits Please click here for information regarding the specific requirements for shipment to your location.click here Antigen Expression:Sox-2, Otx-2, En-1 ATCC – American Type Cell Collection

12 Sejt-fagyasztás Sejt-felvétel


Letölteni ppt "Medium for slice preparation (1 hour at 4 O C, refrigerator, freshly composed) 1. Gey’s Balanced Salt Solution 100 ml 100% 2. Glucose 45% 1.1ml ~ 5mg/ml."