Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Disszekciós eljárások 1.Szövet-szeletek 2.Explantátum - biopszia Megőrzött szövet-struktúra (legalább a kiültetés pillanatában) 3. Kézi mikrodisszekció.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "Disszekciós eljárások 1.Szövet-szeletek 2.Explantátum - biopszia Megőrzött szövet-struktúra (legalább a kiültetés pillanatában) 3. Kézi mikrodisszekció."— Előadás másolata:

1 Disszekciós eljárások 1.Szövet-szeletek 2.Explantátum - biopszia Megőrzött szövet-struktúra (legalább a kiültetés pillanatában) 3. Kézi mikrodisszekció

2 Leica LCM=laser captured microdissection Kritikus tényezők: jól választott szövetrész, kivágott szövet „elkapásának” módszere, molekuláris integritás megőrzése friss fagyasztott szöveten alkalmas szelektív sejt-izolálásra; molekuláris összetevők elemzésére

3 Sluka, et al., Progress in Histochemistry and Cytochemistry;2008

4 I. Mechanikus szövet-disszociáltatás Szövet-disszociáltatás: szövetből sejtszuszpenzió Módszer kiválasztása szövet típus – ECM aránya; állaga; - Sejtkapcsolatok típusa, aránya, erőssége szövet kora kinyerendő sejttípus Csak laza – pl. Lép vagy korai embrionális – szövetek esetén 1. A szerv aprítása (~ mm-es darabkák) fiziológiás oldatban 2. Triturálás (szűk [ um] kapilláris-nyíláson át; Emelt viszkozitású (szérum; BSA) fiziológiás oldatban 3. Szűrés (40 – 120 um pórusméretű háló) vagy elkülönítő centrifugálás (sejtek csapadékba ülepíthetők 200 – 400 g 10 min)

5 II. Enzimatikus disszociáltatás Worthington; Ca 2+ gátolja Ca 2+ szükséges Törmelék összetapadását gátolja

6 Sejtszámlálás Sejtszámláló kamra Áramlásos sejtszámoló berendezések

7 Sejtszeparálás fizikai- kémiai paraméterek alapján biospecifikus sajátságok alapján - szűrés - ülepítés - differenciál-centrifugálás - sűrűség-gradiens centrifugálás - elutriáció - áramlási citometria (FACS) - szelektív sejtadhézión alapuló sejtszeparálás: - sejt affinitás kromatográfia, - panning - mágneses elválasztás - sejtszeparálás szelektív lízissel - sejtszeparálás szelektív előnyök biztosításával

8 Sejtszeparálás fizikai- kémiai paraméterek alapján minta Szedimentációs sűrűség-gradiens centrifugálás Egyensúlyi sűrűség-gradiens centrifugálás szeparálás méret és alak alapjánszeparálás sűrűség alapján Idő!! ha túl sokáig centrifugálunk, minden a csapadékba kerül! részecke a rá jellemző sűrűségtartományban marad oldat-rétegek sűrűsége ~ részecskék sűrűsége a részecskék sűrűsége nagyobb, mint az oldat- rétegeké pl vérsejt izolálás emlős sejtek fajsúlya ~ 1,06 g/cm 3

9 mononukleáris sejtek polimorfonukleáris sejtek (granulociták) vvt

10 Centrifugal elutriation: Sedimentation takes place in the presence of field flow. CE is also called counterstreaming centrifugation; counterflow centrifugation ; counterflow centrifugal elutriation (CCE) Centrifugal Elutriation (CE)

11 Mágneses sejt szeparálás

12 Fluorescence Aided Cell Sorter - FACS

13 Side population: Hoechst efflux (ABCG2) Primitív (pluripotens) őssejtet azonosítja

14 BD FACS Vantage SEBD FACSort


Letölteni ppt "Disszekciós eljárások 1.Szövet-szeletek 2.Explantátum - biopszia Megőrzött szövet-struktúra (legalább a kiültetés pillanatában) 3. Kézi mikrodisszekció."

Hasonló előadás


Google Hirdetések