Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

CELLULÁRIS SZÍV- ELEKTROFIZIOLÓGIAI MÉRÉSI TECHNIKÁK Dr. Virág László.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "CELLULÁRIS SZÍV- ELEKTROFIZIOLÓGIAI MÉRÉSI TECHNIKÁK Dr. Virág László."— Előadás másolata:

1 CELLULÁRIS SZÍV- ELEKTROFIZIOLÓGIAI MÉRÉSI TECHNIKÁK Dr. Virág László

2 Intracelluláris mikroelektród technika Voltage clamp technika Patch clamp technika

3 Intracelluláris mikroelektród technika

4

5

6

7  m Ag/AgCl 3 M KCl R e ~ MOhm

8

9 anyag 60 perc20-60 perc60 perc 0 mV 20 mV 100 ms APA RP APD 50 APD 90 90% 50% V max kimosáselőinkubáció

10 Két mikroelektródás voltage clamp parancsjel (voltage command) “makroszkópikus” nátrium-áram holding potenciál teszt potenciál

11 A voltage clamp áramkör felépítése

12 Patch clamp: a voltage clamp egy speciális esete

13 Sejt (1) Szívjunk be egy kis membrán darabot a mikropipetta hegyének belsejébe (átmérő ~ 1 µm)

14 Patch clamp: a voltage clamp egy speciális esete Sejt (2) “Gigaohm-seal” R > 1 GOhm

15 Sejt (3) Kapcsoljuk a kívánt potenciálra az elektróda belsejét és tartsuk konstans értéken a voltage clamp módszert használva. Patch clamp: a voltage clamp egy speciális esete

16 zárt nyitott Sejt + (3) Kapcsoljuk a kívánt potenciálra az elektróda belsejét és tartsuk konstans értéken a voltage clamp módszert használva. Patch clamp: a voltage clamp egy speciális esete

17 zárt nyitott Sejt (3) Kapcsoljuk a kívánt potenciálra az elektróda belsejét és tartsuk konstans értéken a voltage clamp módszert használva. Patch clamp: a voltage clamp egy speciális esete

18 Nátrium csatornák tulajdonságai parancsjel (voltage command) 10 msec

19 Nátrium csatornák tulajdonságai 1.A csatornák vagy nyitott vagy zárt állapotban vannak

20 Nátrium csatornák tulajdonságai 1.A csatornák vagy nyitott vagy zárt állapotban vannak 2.A csatornanyitások csak rövid rövid események a makroszkopikus nátrium áramhoz viszonyítva. “makroszkópikus” nátrium áram

21 Nátrium csatornák tulajdonságai 1.A csatornák vagy nyitott vagy zárt állapotban vannak 2.A csatornanyitások csak rövid rövid események a makroszkopikus nátrium áramhoz viszonyítva. 3.A csatornanyitások időtartama és latenciája nagyon változó és előfordul, hogy a csatorna ki se nyílik “makroszkópikus” nátrium áram

22 Nátrium csatornák tulajdonságai 1.A csatornák vagy nyitott vagy zárt állapotban vannak 2.A csatornanyitások csak rövid rövid események a makroszkopikus nátrium áramhoz viszonyítva. 3.A csatornanyitások időtartama és latenciája nagyon változó és előfordul, hogy a csatorna ki se nyílik 4.A csatornák nyitási valószínűsége hasonló a makroszkópikus áramhoz “makroszkópikus” nátrium áram 300 felvétel szummája

23 Nátrium csatornák tulajdonságai 1.A csatornák vagy nyitott vagy zárt állapotban vannak 2.A csatornanyitások csak rövid rövid események a makroszkopikus nátrium áramhoz viszonyítva. 3.A csatornanyitások időtartama és latenciája nagyon változó és előfordul, hogy a csatorna ki se nyílik 4.A csatornák nyitási valószínűsége hasonló a makroszkópikus áramhoz 5.A csatornák inaktivációja miatt a másodszori nyitás nagyon ritka “makroszkópikus” nátrium áram 300 felvétel szummája

24 Slowly inactivating K current channel (Ram & Dagan, 1987) 1.A csatornák vagy nyitott vagy zárt állapotban vannak. 2.A csatornanyitások csak rövid rövid események a makroszkopikus áramhoz viszonyítva. 3.A csatornanyitások időtartama és latenciája nagyon változó és előfordul, hogy a csatorna ki se nyílik 4.A csatornák nyitási valószínűsége hasonló a makroszkópikus áramhoz 5.A csatornák többször is kinyílhatnak, ha nincs inaktiváció

25 On- Cell Cell-Attached Patch clamp technika konfigurációi

26 On- Cell Inside- out patch Patch clamp technika konfigurációi

27 Whole Cell On- Cell Patch clamp technika konfigurációi

28 Whole Cell Patch clamp technika konfigurációi

29 Whole Cell outside- out patch Patch clamp technika konfigurációi

30

31 Whole cell konfiguráció RsRs CmCm RcRc

32

33 Run-down jelenség ATP-függő kálium áram

34 Run-down jelenség L típusú kalcium áram

35 Patch clamp technika konfigurációi Whole Cell Whole Cell, perforated patch - amphotericin-B - nystatin

36 Run-down jelenség L típusú kalcium áram

37 Sejtizoláció - Ca 2+ - mentes perfúzió - emésztés (kollagenáz...) - mechanikai agitáció

38 L típusú kalcium áram

39

40

41

42

43

44

45 anyag 5-10 perc3-5 perc10-15 perc kimosáselőinkubáció Áram-feszültség (I-V) karakterisztika


Letölteni ppt "CELLULÁRIS SZÍV- ELEKTROFIZIOLÓGIAI MÉRÉSI TECHNIKÁK Dr. Virág László."

Hasonló előadás


Google Hirdetések