Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

HLA ellenes antitestek szűrése és nyomonkövetése Dr. Tordai Attila Transzplantációs Immungenetikai Laboratórium vezetője Országos Vérellátó Szolgálat,

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "HLA ellenes antitestek szűrése és nyomonkövetése Dr. Tordai Attila Transzplantációs Immungenetikai Laboratórium vezetője Országos Vérellátó Szolgálat,"— Előadás másolata:

1 HLA ellenes antitestek szűrése és nyomonkövetése Dr. Tordai Attila Transzplantációs Immungenetikai Laboratórium vezetője Országos Vérellátó Szolgálat, Budapest

2 HLA-ellenes antitestek szűrése és nyomon követése Tordai Attila Országos Vérellátó Szolgálat Transzplantációs Immungenetikai Laboratórium XVIII. Debreceni Nephrológiai Napok,

3 TartalomjegyzékTartalomjegyzék A HLA-labor lehetőségei a szervtúlélés javításában:A HLA-labor lehetőségei a szervtúlélés javításában: Logisztika (CIT-csökkentés);Logisztika (CIT-csökkentés); A HLA-egyezés javítása (HLA-tipizálás);A HLA-egyezés javítása (HLA-tipizálás); HLA-ellenes antitest szűrés, azonosítás;HLA-ellenes antitest szűrés, azonosítás; Transzplantáció modellezés (keresztpróba);Transzplantáció modellezés (keresztpróba); A kilökődés immunológiai hátterének vizsgálata;A kilökődés immunológiai hátterének vizsgálata; Változások az Eurotransplant-csatlakozás után.Változások az Eurotransplant-csatlakozás után.

4 A hideg ischémiás idő csökkentése a sürgősségi kivizsgálás átszervezésével

5 A sürgősségi tevékenységek összehasonlító folyamatábrája

6 A hideg ischaemiás idők (CIT) összehasonlítása CIT2 régi rendszer utolsó 10 éve (2000.jan okt.31.) (régió: B, D, S, P) régi rendszer utolsó 10 hónapja (2010.jan okt.31.) (régió: B, D, S, P) új rendszer első 10 hónapja (2011. jan okt.31.) (régió: B, D, S, P) átlag (óra) 21,7 ± 4,0 19,8 ± 3,4 16,0 ± 3,8 esetszám (db) CIT1 régi rendszer utolsó 10 éve (2000.jan okt.31.) (régió: B, D, S, P) régi rendszer utolsó 10 hónapja (2010.jan okt.31.) (régió: B, D, S, P) új rendszer első 10 hónapja (2011. jan okt.31.) (régió: B, D, S, P) átlag (óra)18,7 ± 3,916,5 ± 3,512,4 ± 3,2 esetszám (db) p<0,001 p<0,001 p<0,001 p<0,001

7 HLA-ellenes antitest szűrés, azonosítás

8 TX előtt a preformált (vetélés/szülés, transzfúzió, korábbi TX) antitestek hiperakut rejekciót okozhatnak;TX előtt a preformált (vetélés/szülés, transzfúzió, korábbi TX) antitestek hiperakut rejekciót okozhatnak; TX után antiest-mediált rejekciót okozhatnak.TX után antiest-mediált rejekciót okozhatnak. Miért foglalkozunk a HLA-ellenes antitestekkel? MEGELŐZÉS NYOMON KÖVETÉS

9 Az antitest-kimutatás evolúciója CDC AHG-CDC Virtual XM Flow/Luminex multi- Ag beads FC Lymphocytes ELISA Flow/Luminex/ELISA single-Ag and Donor-specific

10 Terasaki & McLelland: mikro- lymphocyto-toxicitás tipizálásra: 1964:HLA-A,-B,-C 1977:HLA-DR 1984:HLA-DQ 2013:múzeumban. Elve: Sejtpermeabilizáció következik be, ha a HLA sejtfelszíni antigénhez egy arra specifikus, komplement aktivációra képes HLA-ellenes antitest kötődik. A pozitivitás viabilitási festékkel jeleníthető meg. Komplement-dependens citotoxicitás (CDC) Alkalmas: (i) antigén-meghatározás (tipizálás); (ii) antitest-kimutatás; (iii) keresztpróba. Terasaki-tálca: 1 µl szérum!!!!

11 Negatív A CDC-teszt mikroszkópos képe Pozitív

12 A beteg HLA ellenes antitest-előfordulási gyakorisága %-ban kerül meghatározásra ismert HLA típusú paneltagok limfocitáival (szűrősejtek) szemben. PRA = 92% pozitív negatív HLA-ellenes antitest szűrés CDC-vel – panel reaktív antitestek (PRA) A számszerű eredményt befolyásolja, hogy milyen gyakori antigén ellen termelődik antitest.

13 A két festék (vörös és infravörös) eltérő arányú keveréke 100-féle gyöngytípust eredményez egyedi spektrális kóddal. Egy reakcióban egyszerre elméletileg 100 féle analit is vizsgálható. LUMINEX xMAP technológia Áramlási citometria + szendvics ELISA

14 Recipiens savó ;Recipiens savó ; ismert HLA- antigéneket tartalmazó g yöngyök ;ismert HLA- antigéneket tartalmazó g yöngyök ; Fluoreszcens festékkel konjugált másodlagos an t ites t (anti-humán IgG).Fluoreszcens festékkel konjugált másodlagos an t ites t (anti-humán IgG). HLA-ellenes antitestek kimutatása szolid fázisú (LUMINEX) technikával

15 HLA-ellenes antitest szűrés (LABScreen mix)

16 LABScreen Single Antigen HLA I. osztály HLA-ellenes antitestek azonosítása (single antigen)

17 Donor:DR9,14 DR52,53 DQ9,7 HLA-ellenes antitestek azonosítása (single antigen) LABScreen Single Antigen HLA II. osztály

18 Transzplantáció modellezés (keresztpróba)

19 Kérdés: van-e a recipiens szérumban a donor sejtekre specifikus antitest. Technika: 1.CDC – komplement aktiváló antitestek; 2.FACS (áramlási citométer) – nemcsak komplement aktiváló antitestek, de érzékenyebb. Célsejtek: perifériás vér mononukleáris sejtek vagy lép/ny.cs. sejtek (cadaver). Keresztpróba (cross-match, XM)

20 A kilökődés immunológiai hátterének vizsgálata

21 Donor-specifikus antitest (DSA) Recipiens antitest-profil SA módszerrel + Recipiens antitest-profil SA módszerrel + Donor lehető legrészletesebb (6 lokusz) HLA-tipizálása Donor lehető legrészletesebb (6 lokusz) HLA-tipizálása Hiperimmunizált betegeknél tolerálható antigének előzetes azonosítsa (acceptable mismatch, AM program); Hiperimmunizált betegeknél tolerálható antigének előzetes azonosítsa (acceptable mismatch, AM program); Már transzplantált betegnél DSA nem mindig jelenik meg valamennyi donor-antigénnel szemben – retranszplantáció esélyének növelése; Már transzplantált betegnél DSA nem mindig jelenik meg valamennyi donor-antigénnel szemben – retranszplantáció esélyének növelése; Élő donoros átültetésnél megfelelő donor kiválasztás – „paired donation”. Élő donoros átültetésnél megfelelő donor kiválasztás – „paired donation”. Tx előtt A DSA, ill. nem DSA anti-HLA antitestek elkülönítése + mennyiségi/aviditási információ (átlagos fluoreszcencia intenzitás – MFI); A DSA, ill. nem DSA anti-HLA antitestek elkülönítése + mennyiségi/aviditási információ (átlagos fluoreszcencia intenzitás – MFI); Ha új DSA jelenik meg, vagy nő a DSA-MFI – rossz prognózis; Ha új DSA jelenik meg, vagy nő a DSA-MFI – rossz prognózis; Ha DSA eltűnik vagy csökken a DSA-MFI – eredményes terápia. Ha DSA eltűnik vagy csökken a DSA-MFI – eredményes terápia. Tx után

22 A pre-TX donor specifikus antitestek hatása a graft-túlélésre Lefaucheur J Am Soc Nephrol

23 Antitest- mediált rejekció (AMR) Lefaucheur J Am Soc Nephrol AMR nélküli alcsoport n=370

24 A single antigen (SA)-vizsgálat lehetőségei Nagy immunológiai kockázatú betegeknél; Nagy immunológiai kockázatú betegeknél; Deszenzitizációt követően az antitest újratermelődés kimutatására; Deszenzitizációt követően az antitest újratermelődés kimutatására; Immunológiai rejekció gyanújakor; Immunológiai rejekció gyanújakor; Rejekció elleni terápia nyomon követésére. Rejekció elleni terápia nyomon követésére. Túlzott érzékenység – esetlegesen klinikailag nem jelentős antitestek; Túlzott érzékenység – esetlegesen klinikailag nem jelentős antitestek; A nem komplement-aktiváló antitesteket is kimutatja (fagyasztva tárolt cadaver sejtekkel utolagos XM-mel eldönthető; A nem komplement-aktiváló antitesteket is kimutatja (fagyasztva tárolt cadaver sejtekkel utolagos XM-mel eldönthető; A reagens (gyöngyök) antigén-készlete nem tükrözi a helyi populációra jellemző HLA-eloszlást; A reagens (gyöngyök) antigén-készlete nem tükrözi a helyi populációra jellemző HLA-eloszlást; Nem ismert a gyöngyökhoz kötött antigének sűrűsége és konformációja; Nem ismert a gyöngyökhoz kötött antigének sűrűsége és konformációja; Költséges. Költséges. Hátrányok

25 Változások az Eurotransplant- csatlakozás után

26 Speciális programok: (i) gyermek; (ii) acceptable mismatch (AM); (iii) sürgősségi;Speciális programok: (i) gyermek; (ii) acceptable mismatch (AM); (iii) sürgősségi; EFI-akkreditált HLA-labor (jelenleg Bp, később Debrecen);EFI-akkreditált HLA-labor (jelenleg Bp, később Debrecen); Részvétel az ET szisztematikus mintacsere programjaiban;Részvétel az ET szisztematikus mintacsere programjaiban; A recipiens adatokat a TX-centrumok, a HLA-adatokat pedig a HLA-labor rögzíti az ENIS-programba;A recipiens adatokat a TX-centrumok, a HLA-adatokat pedig a HLA-labor rögzíti az ENIS-programba; Szerv-allokáció az egységes ENIS-program (Leiden) által;Szerv-allokáció az egységes ENIS-program (Leiden) által; Szérumgyűjtés a listán levő betegektől 3 havonként, immunizált betegek mintáinak küldése 30 ET-laborba;Szérumgyűjtés a listán levő betegektől 3 havonként, immunizált betegek mintáinak küldése 30 ET-laborba; Törekvés az antitest-profil részletes előzetes megismerésére – virtuális keresztpróba;Törekvés az antitest-profil részletes előzetes megismerésére – virtuális keresztpróba; Új vesebetegek: kétszeri mintaküldés 2 hét időközzel, folyamatos listára kerülés.Új vesebetegek: kétszeri mintaküldés 2 hét időközzel, folyamatos listára kerülés. A cadaver vese TX program sajátosságai ET-tagként

27


Letölteni ppt "HLA ellenes antitestek szűrése és nyomonkövetése Dr. Tordai Attila Transzplantációs Immungenetikai Laboratórium vezetője Országos Vérellátó Szolgálat,"

Hasonló előadás


Google Hirdetések