Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Génmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikák A P elem technikák: enhanszerek és szupresszorok azonosítása.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "Génmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikák A P elem technikák: enhanszerek és szupresszorok azonosítása."— Előadás másolata:

1 Génmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikák A P elem technikák: enhanszerek és szupresszorok azonosítása

2 Klasszikus mutagenezis kísérletek korlátai Egy adott biológiai folyamatban részt vevő, vagy azt szabályozó gének közül nem mindegyiket lehet azonosítani klasszikus mutagenezis kísérletekben nyilvánvaló fenotípus hiánya anyai hatás Több biológiai folyamatban is szerepet játszó gének esetében csak az első eszenciális funkció tanulmányozható Az egyik lehetséges módszer a klasszikus mutagenezisben nem található gének azonosítására az enhanszerek és szupreszorok izolálása. Másik alkalmazott módszer erre amutációk fenotípusának analízise szomatikus, vagy mitótikus klónokban.

3 Enhanszerek és szupresszorok azonosítása P promóter Hsp70 terminátor szekvencia Gal4 mini-white ori amp E B eyeless 5xUAS vizsgált gén gén Gal4

4 Génmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikák A P elem technikák: helyspecifikus rekombináció

5 Szomatikus klónok előállítása Flp rekombinázzal FRT Flp rekombináz leánykromatídák G2 M Homozigóta mutáns klón Vad típusú iker klón m m m m m m Flp rekombináz helyspecifikus rekombinációt indukál FRT szekvenciák között Élesztőkben a 2μ plazmid replikációjában vesz részt Kiválóan működik Drosophilában FRT helyeket hordozó transzgénikus legyekben mitótikus klónokat lehet létrehozni Flp-függő rekombinációval Centromer közeli FRT helyeket hordozó transzgénikus törzseket állítottak elő minden kromoszómára Előnyei:F1 szűrés létfontosságú gének szövetspecifikus fenotípusa tanulmányozható

6 m P(ovo D ) balanszer X P(ovo D ) m FRT Flp rekombináz m m P(ovo D ) FRT Homozigóta mutáns ivarsejt klón iker klón elpusztul m m P(ovo D ) m Nem rekombináns elpusztul m/m +Flp Domináns nősténysteril technika összefoglalása

7 FRT m Flp m P(w + ) m m m Ikerfolt sötét piros Homozigóta klón fehér Nem rekombináns piros FRT m Flp m P(w + ) M M m m m Ikerfolt elpusztul Homozigóta klón fehér Nem rekombináns piros M M M Szem-specifikus FLP/FRT technika összefoglalása Szem-specifikus FLP expresszió Szem-specifikus

8 A CD E Példák mitótikus klónok analízisére Flp expresszió lárvákban 1. az imágókorongok növekedését és diferenciálódását nnérintő mutációk azonosítása tumoros növekedést okozó mutációk azonosítása tumorszupresszorok azonosítása 2. Integrin adhéziós komplex azonosítása Flp szövetspecifikus expressziója 3-4. Axon növekedési mintázat kialakulását szabályozó gének azonosítása 5. Méret szabályozásban szerepet játszó gének azonosítása

9 Génmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikák A P elem technikák: irányított génszupresszió

10 RNS interferencia  RNS interferencia (RNAi) egy evolúciósan konzerválódott védekezési mechanizmus  Poszt-transzkripciós szinten hat  Kettősszálú RNS szupresszálja a génexpressziót mRNS-ek szekvencia specifikus degradációján keresztül  Egy reverz genetikai módszerré fejlődött a génfunkció tanulmányozására  Gyógyászati felhasználása óriási lehetőségeket rejt magában és most van kibontakozóban

11 Az RNS interferencia mechanizmusa Kettősszálú RNS indukálja a folyamatot Egy Rnáz III enzim (Dicer) kis, nukleotid hosszú RNS duplexeket (siRNA) hoz létre A kis RNS-ek fehérjékkel endonukleáz aktivitással rendelkező ribonukleoprotein komplexeket alkotnak (RISC). A RISC komplex a kis RNS-sel komplementer mRNS-hez kötődik A RISC komplex endonukleáza (Slicer) elhasítja a mRNS molekulát A mRNS által kódolt fehérje nem termelődik

12 Hsp70 TATASV40 termwhite intron2 5xUAS CCTAGGTGAGTTTTTGAAACTCAGCTAGC Avr II Nhe I SD hely SA hely 3’P 5’P white pWIZ Spe I ACTAGT Avr II CCTAGG Nhe I GCTAGC Xba I TCTAGA Spe I Avr II Nhe I Xba I A pWIZ RNS interferencia vektor felépítése

13 Irányított génexpresszió a Gal4 moduláris rendszerben - 1 Gal4 mini-white ori amp E B enhanszer 5xUAS gén Gal4 Duplaszálú „hairpin” RNS molekulák

14 white dsRNS-t expresszáló transzgénikus egyedek fenotípusa vad típus white transzgén egy kópiában white - white transzgén két kópiában T1 T2 T3 T3T4


Letölteni ppt "Génmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikák A P elem technikák: enhanszerek és szupresszorok azonosítása."

Hasonló előadás


Google Hirdetések