Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Üledék–víz toxicitási teszt féreggel (Lumbriculus) (OECD 225) Készítette: Barta Kinga MSc, környezetmérnök hallgató Budapesti Műszaki és Gazdaságtudományi.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "Üledék–víz toxicitási teszt féreggel (Lumbriculus) (OECD 225) Készítette: Barta Kinga MSc, környezetmérnök hallgató Budapesti Műszaki és Gazdaságtudományi."— Előadás másolata:

1 Üledék–víz toxicitási teszt féreggel (Lumbriculus) (OECD 225) Készítette: Barta Kinga MSc, környezetmérnök hallgató Budapesti Műszaki és Gazdaságtudományi Egyetem

2 A teszt áttekintése Üledék környezettoxikológiai tesztje –cél: toxicitás mértékének meghatározása –mód: toxicitás élő állatra gyakorolt hatásának megfigyelése, a letalitás mérése élőállat eltérő koncentrációjú toxikus környezetbe helyezése –mérési végpont: állatok túlélése –környezet: különböző koncentrációban szennyezett mesterséges üledék mesterséges víz –a vizsgálat időtartalma: 28 nap

3 Lumbriculus variegatus Kaliforniai feketeféreg (max. 10 cm hosszúak) Édesvízi, üledékben lakó féreg Vízi oligochaeta családjába tartozik Egyike az ökotoxikológiában használt tesztorganizmusoknak A féreg számos úton ki van téve a szennyezésnek (anyagtól függ, hogy melyik út/utak a releváns/ak) –táplálék: üledék (pl.: Erős adszorpciós anyagokra K ow >5, vagy olyan anyagokra, melyek kovalens kötéssel kötődnek, az elfogyasztás a szignifikáns) –élőhely: érintkezik az üledékkel és a vízzel is

4 Üledék Mesterséges üledék –ok: természetes szennyezőanyagoktól mentes üledék nem mindig beszerezhető –kicsi a változékonysága az üledéknek, és azonos fauna jellemzi Összetétel –4-5%-os (száraz tömeg) sphagnum tőzeget (tőzegmoha) –20 ± 1%-os (száraz tömeg) kaolin agyag –75-76% (száraz tömeg) kvarchomok –ioncserélt víz (az üledék 30%-nak mértékében) –vegyi tisztaságú kalcium-karbonát a pH beállításához –az összes szerves széntartalom (TOC) az üledék száraz anyagának 2%-a (± 0,5%) –táplálék Dokumentálni kell –összetevők és ezek forrása –teljes C-tartalom –pH –víztartalom –granulátumok mérete

5 Az üledék szennyezése Szennyezőanyag előkészítése –szennyezőanyag oldhatóvá tétele szerves oldószerrel (aceton, n-hexán, ciklohexán) –a szennyező anyag kiporciózása –kvarc homok hozzáadása (0,20–0,25 mL/g) –szárító szekrényben szárítása Hígítási sor elkészítése –a kiszárított anyag azonnali összekeverése az üledékkel a megadott hígítási sornak megfelelő koncentrációban Szennyezett mesterséges környezet előállítása –hígítási sor tagjainak tesztcsövekbe helyezése, majd felöntése mesterséges vízzel –ülepítés (ülepedési idő: szennyezőanyag függő; akár 2 nap, de 5 hét is lehet) Párhuzamos méréssel a teszt pontosságának ellenőrzése

6 A felöntéshez használt víz Mesterséges víz –már a férgek tenyésztését is mesterséges vízben kell végezni Természetes víz –csak abban az esetben használható, ha bizonyított, hogy minden szennyezőanyagtól mentes Dokumentálni kell –pH (6-9) –oxigén tartalom –keménység ( mg CaCo 3 /l) –mikroszennyező anyagok (nem kötelező, ajánlott)

7 A mérés előkészítése Hígítási sor –koncentrációk becslése próba méréssel –legnagyobb koncentráció értéke max. kétszerese legyen a legkisebb koncentráció értéknek (5 koncentrációs érték kiválasztása) –a toxicitás alulbecsülésének kizárása érdekében a teszt megkezdésekor táplálék hozzáadása az üledékhez Tesztállatok –kiválasztás azonos helyről származó, hasonló korú, méretű és fizikai állapotú, egészséges állatok felnőtt, fizikai elváltozásoktól mentes egyedek –felhasználás a kiválasztott tesztállatokat a mérés előtt 10–14 napos időszakra el kell különíteni azon egyedeket kell felhasználni, melyek fizikai stimulálás hatására élénk mozgásba kezdenek –táplálás külön táplálásra nincs szükség (az üledék már tartalmazza a szükséges tápanyagot)

8 Tesztkörnyezet (10 tesztorganizmus esetén) Statikus vizsgálat ajánlott –speciális esetekben átfolyásos vizsgálat is megengedett Megfelelő üledék–víz arány –(1:4) Tesztedények –legalább 6 cm átmérőjű üveglombik (vagy más kémiailag inert anyagból készült edény) Üledék –1,5 – 3 cm réteg Fényszükséglet –napi 8:16 órás sötét:világos ciklus – lx fényerősség Hőmérséklet –18–22 °C Levegőztetés –laza 2–4 buborék/másodperc, 2 cm-rel az üledék fölött Használt üledék mennyisége –elegendőnek kell lennie a férgek szaporodásához és táplálkozásához

9 Mérés menete A tesztállatok számának és az üledék mennyiségének meghatározása –a leggyakrabban használt 10 féreg/teszt edény esetén 50–100 mg nedves biomassza  9–17 mg száraz biomassza (17, 1% száraz anyag tartalom esetén)  kb. 43 g üledék/ 10 féreg A konfidencia intervallum szélessége csökkenthető a koncentráció intervallum szűkítésével, ill. a férgek számának növelésével A hígítási sor előállítása és a kontroll minta elkészítése A kiválasztott tesztállatok üledékre helyezése A mérés alatt folyamatosan ellenőrizendő és dokumentálandó értékek –hőmérséklet –oldott oxigén koncentráció –a levegőztetés mértékét –pH –keménység –teljes ammónia tartalom –férgek állapota 28 nap elteltével a teszt kiértékelése

10 A teszt kiértékelése A teszt végén meg kell vizsgálnia a férgek állapotát Az állatok kiemelésének lehetőségei –az üledék 60°C-ra történő felmelegítésének hatására a férgek elhagyják az üledéket –háló segítségével az üledéket eltávolítva hozzáférhetünk a tesztállatokhoz –figyelni kell az állatok épségének megőrzésére Tesztedényenként rögzítendő az élő és az elpusztult állatok aránya –halottak fizikai ingerre nem reagál dekompozíció jeleit mutatja eltűnt állatok Az életben maradt állatok nedves és száraz tömegének megmérése Meghatározás –EC X (EC 50 —többi bizonytalan); LOEC; NOEC értékek A mérés érvényes –a tesztállatok minimum 90%-nak vizsgálata

11 Referenciák a teszthez (3) ASTM International (2000). Standard guide for the determination of the bioaccumulation of sediment-associated contaminants by benthic invertebrates, E a. In ASTM International 2004 Annual Book of Standards. Volume Biological Effects and Environmental Fate; Biotechnology; Pesticides. ASTM International, West Conshohocken, PA. (4) ASTM International (2002). Standard Test Method for Measuring the Toxicity of Sediment- Associated Contaminants with Freshwater Invertebrates, E In ASTM International 2004 Annual Book of Standards. Volume Biological Effects and Environmental Fate; Biotechnology; Pesticides. ASTM International, West Conshohocken, PA. (5) Phipps, G.L., Ankley, G.T., Benoit, D.A. and Mattson, V.R. (1993). Use of the aquatic Oligochaete Lumbriculus variegatus for assessing the toxicity and bioaccumulation of sediment- associated contaminants. Environ.Toxicol. Chem. 12, (6) OECD (2004). OECD Guidelines for the Testing of Chemicals No. 218: "Sediment-water chironomid toxicity test using spiked sediment" (Adopted April 2004). (7) U.S. EPA (2000). Methods for measuring the toxicity and bioaccumulation of sediment- associated contaminants with freshwater invertebrates. Second Edition. EPA 600/R-99/064, U.S. Environmental Protection Agency, Duluth, MN, March (8) Environment Canada (1997). Test for Growth and Survival in Sediment using Larvae of Freshwater Midges (Chironomus tentans or Chironomus riparius). Biological Test Method. Report SPE 1/RM/32. December (9) Hill, I.R., Matthiessen, P., Heimbach, F. (eds), 1993, Guidance document on Sediment Toxicity Tests and Bioassays for freshwater and Marine Environments, From the SETAC-Europe Workshop On Sediment Toxicity Assessment, 8-10 November 1993, Renesse (NL). (10) BBA (1995). Long-term toxicity test with Chironomus riparius: Development and validation of a new test system. Edited by M. Streloke and H.Köpp. Berlin (11) Riedhammer C. & B. Schwarz-Schulz (2001). The Newly Proposed

12 Forrás OECD GUIDELINES FOR THE TESTING OF CHEMICALS Test No. 225: Sediment-Water Lumbriculus Toxicity Test Using Spiked Sediment x/v1n2/s25/p1

13 Köszönöm a figyelmet!


Letölteni ppt "Üledék–víz toxicitási teszt féreggel (Lumbriculus) (OECD 225) Készítette: Barta Kinga MSc, környezetmérnök hallgató Budapesti Műszaki és Gazdaságtudományi."

Hasonló előadás


Google Hirdetések