Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Közönséges trágyalégy fejlődésére gyakorolt toxikus hatás vizsgálat Készítette: Ladoneczki Gábor2010.11.29. OECD 228 teszt.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "Közönséges trágyalégy fejlődésére gyakorolt toxikus hatás vizsgálat Készítette: Ladoneczki Gábor2010.11.29. OECD 228 teszt."— Előadás másolata:

1 Közönséges trágyalégy fejlődésére gyakorolt toxikus hatás vizsgálat Készítette: Ladoneczki Gábor OECD 228 teszt

2 2 Bevezetés  Ez a teszt vegyi anyagok trágya-függő kétszárnyú fajokra gyakorolt hatását méri  Két fő indikátorfajt alkalmaz rovarirtók toxicitásának vizsgálatára, a hatások előrejelzésére ( többnemzedékes, könnyen tenyészthető, rövid életciklusú rovarok ): Scathophaga stercoraria Musca autumnalis  A fauna védelmét szolgálja a trágya szennyezettségétől nagy érzékenységű indikátorfajok segítségével  Ez a két faj nem reprezentálja az összes trágyalakó élőlényt

3 3 A tesztorganizmusok – Scathophaga stercoraria Forrás: Kerry S. Matz (2005) Forrás: Tim Nichols (2004)

4 4 A tesztorganizmusok – Musca autumnalis Forrás: BioImages (2007) Forrás: James K. Lindsey (2006)

5 5 A teszt alapelve  Trágyához köthető életciklusokban történő fejlődést gátló, befolyásoló hatásokat méri  Marhatrágyába jutatott vegyi anyagot vizsgál  A trágyába petéket (S. stercoraria) illetve lárvákat (M. autumnalis) helyezünk tesztelés céljából  Lehetséges hatások vizsgálata a tesztorganiz- musok kifejlődésére (viszonyítás a negatív kontrollhoz)  Végpontok kontrollált körülmények közti mérése

6 6 Lehetséges mérési végpontok  Kifejlődött legyek száma és neme  Fejlődésgátlás, a fejlődési rátával kifejezve  Alaktani változások: testméret változása fejlődési rendellenességek stb.  Származtatott végpontok: NOEC EC x

7 7 A tesztvegyület tulajdonságai  Erősen javasolt a következők ismerete: vízoldhatóság, K ow, gőznyomás, tesztvegyület lebomlási ideje.  Szükséges még a teszt- és referenciavegyületek eredetének, Mennyiségének és tisztaságának ismerete.  Ez a teszt vízoldható vagy gyengén vízoldható anyagokhoz használható

8 8 Referenciaanyag  Ivermectin javasolt referenciaanyagként  Rendszeresen tesztelendő: EC x meghatározása évi 1-2 alkalommal vagy Párhozamosan a vizsgált vegyi anyaggal (javasolt)  Új legyek első vizsgálata esetén a referenciaanyag mindig újra tesztelendő Forrás:

9 9 Érvényesség  A teszt érvényesnek tekinthető ha a kontroll mintákban: az elhelyezett lárvák kikelése a petékből ≥ 70% (S. stercoraria) felnőtt egyedek kialakulása a kikelt lárvákból ≥ 70% (S. stercoraria) felnőtt egyedek kialakulása az elhelyezett petékből ≥ 60% (M. autumnalis) a felnőtt egyedek kifejlődése elkezdődik 18 ± 2 nap (S. stercoraria) illetve 13 ± 2 nap alatt (M. autumnalis)  Ellenkező esetekben a teszt nem érvényes (kivéve indokolt esetekben)

10 10 A szükséges felszerelés  Megfelelő méretű edények  Pamut anyag a szellőzés biztosítására  Szárítószekrény  Sztereomikroszkóp  Ecset a lávák/peték elhelyezéséhez  pH-mérő, fényerősségmérő  Hitelesített mérleg  Megfelelő eszköz a hőmérséklet szabályozására  Megfelelő eszköz a páratartalom szabályozására

11 11 Trágya kiválasztása és begyűjtése  Dokumentált állatorvosi kórtörténettel rendelkező szarvasmarha-állományból származó,  nem szennyezett ( gyűjtést megelőzően minimum 8 hétig gyógyszerészeti készítmény, illetve minimum 5 hónapig féregirtó használatának mellőzése ) marhatrágya.  A trágya közvetlenül az állatból vagy a földről (2 órásnál frissebb) gyűjthető.  A trágya fagyasztható.  A minták víztartalma és pH-ja meghatározandó. Forrás:

12 12 A tesztállatok kiválasztása és előkészítése  A trágyalegyek ismert laboratóriumi tenyészetből szerzendők be.  A fajok azonosítása szükséges.  Az egyedek forrása és eredete dokumentálandó.  A frissen rakott petéket/lárvákat (12 óránál fiatalabbak) kell a tesztekhez felhasználni.

13 13 A tesztkörülmények  S. stercoraria T = 20°C ± 2°C Relatív páratartalom (RH) > 60% (a teszt első fázisában)  M. autumnalis T = 26°C ± 2°C  16:8 órás világos:sötét ciklusok  A fényintenzitás a teszt elején feljegyzendő

14 14 Eljárás – a trágya előkészítése 1/2  A friss vagy a kiolvasztott trágyát homogenizálni kell ~10 percig  A nedvességtartalom megváltoztatása nem szükséges  A nitrogén- és széntartalmat meg kell határozni, az eljárást fel kell jegyezni

15 15 Eljárás – trágya előkészítése 2/2  A koncentrációkat száraz tömegre kell megadni  Ismert mennyiségű trágya bemérése a keverőbe  A tesztelt és a referenciavegyületeket fel kell oldani vízben vagy szerves oldószerben  Majd 10 percig kevertetni kell a rendszert  Kontrollhoz az oldószer vagy a víz hozzáadása  Oldószer használata esetén minimum 4 óráig (szobahőmérsékleten) állni kell hagyni, hogy elillanjon  Az alkalmazott vegyi anyagok koncentrációját pontosan meg kell határozni

16 16 Eljárás – tesztállatok elhelyezése  100 g (frissen mért) trágyát kell elhelyezni az edényekben úgy, hogy 5—8 cm mély legyen  A peték vagy a lárvák szolgálnak a teszt kezdőpontjaként  A lárvák/peték kis csoportokban helyezendők el  A vizsgálatig a petéket nedvszívó papíron kell tárolni  10 lárvát/petét kell elhelyezni a trágya felületén  A petéket (S. stercoraria) nedvszívó papírra kell rakni, hogy kikeljenek, a kikelést követően belemásznak a trágyába  Amikor a M. autumnalis lárvák elmerülnek a trágyába és már nem láthatóak felitatószerrel (száraz vermikulit) kell betakarni 3 cm vastagon

17 17 Eljárás - megfigyelések  Peték alkalmazása esetén a kikelt lárvák számának meghatározása az elhelyezést követően 48 órával  A tesztidőszak alatt a kifejlett példányok számának, nemének és a túlélésének dokumentálása naponta  Alaktani megfigyelések  Kifejlett állatok eltávolítása naponta  Kikelés: S. stercoraria a 18. napra tehető M. autumnalis a 13. napra tehető  A teszt vége 5 nappal az utolsó felnőtt egyed felbukkanását követően

18 18 A teszt típusa  Hatásos koncentrációtartomány keresése (angolul: Range Finding Test): Ismeretlen toxicitású vegyi anyag esetén Koncentrációk: 0,1; 1; 10; 100 és 1000 mg/kg (trágya száraz tömege) Kontroll és szerves oldószer esetén oldószeres kontroll minta  Határteszt (angolul: Limit vagy Definitive Test): Ha NOEC nagyobb az 1000 mg/kg-nál Jellemzően 1000 mg/kg koncentrációban 8 vegyi anyaggal (plusz 8 kontroll, referencia oldószeres kontroll) OECD 54-es dokumetum alapján

19 19 NOEC és EC x meghatározása  NOEC Minimum 5 koncentrációban mérendő 4 párhozamossal és 8 kontrollal javasolt A koncenrációköz ne haladja meg az 1,8-as faktort  EC x Minimum 12 koncentrációban mérendő Minimum 2 párhuzamos és 6 kontroll javasolt A koncenrációköz 2-es faktornál legyen kisebb, a várt értékeknél  A statisztikai kiértékelés típusa szabadon megválasztható

20 20 Jelentés 2/1 A teszt végeztével összefoglaló jelentést kell készíteni, melynek a következőket kell tartalmaznia:  Tesztvegyület: vegyi anyag, referencia anyag és tulajdonságaik  Tesztorganizmusok: felhasznált fajok és kezelésük, koruk az edényekbe való elhelyezéskor

21 21 Jelentés 2/2  A teszt körülményei: trágya származása és tulajdonságai, a trágyaszint az edényekben, felhasznált eszközök, hígítási sorok és párhozamosok száma, a tesztelt és felhasznált vegyi anyagok előkészítésének folyamata, a teszt körülményei  Eredmények: kifejlett nőstény és hím egyedek száma (db/nap/edény), százalékos eredmények, élettani elváltozások, fejlődési ráták, kikelési ráták, eredmény a referencia anyagra viszonyítva, eredmények numerikus és grafikus formában, végpontok meghatározása  Az eredmények értékelése: érvényesség-vizsgálat, az eredmények értékelése, levont következtetések

22 22 Forrás  OECD Test No. 228: Determination of Developmental Toxicity of a Test Chemical to Dipteran Dung Flies (Scathophaga stercoraria L. (Scathophagidae), Musca autumnalis De Geer (Muscidae))


Letölteni ppt "Közönséges trágyalégy fejlődésére gyakorolt toxikus hatás vizsgálat Készítette: Ladoneczki Gábor2010.11.29. OECD 228 teszt."

Hasonló előadás


Google Hirdetések