Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Mikroszkópia Különböző spéci mikroszkópok és festési eljárások Készítette: Rajnai Tamás.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "Mikroszkópia Különböző spéci mikroszkópok és festési eljárások Készítette: Rajnai Tamás."— Előadás másolata:

1 Mikroszkópia Különböző spéci mikroszkópok és festési eljárások Készítette: Rajnai Tamás

2 Mikroszkópia története Mikroszkóp: mikron = kicsi szkopein = nézni Mikroszkópia: szemmel láthatatlan tárgyak mikroszkópos vizsgálata Első mikroszkóp: ~ 1600: Hans Lippershey, Hans Janssen, Zacharias Janssen

3 Mikroszkópok fajtái: Optikai elméletet használó:  Mintán áthaladó/visszaverődő sugarakat egy optikai rendszer felnagyítja  Binokuláris/szimpla  Fajtái: összetett fénymikroszkópok (max kb. 1500X, elméleti felbontóképesség 0,2 mikrométer ), szetereomikroszkópok, Elektronmikroszkópok (vákuum kell)

4 SztereomikroszkópElektronmikroszkóp

5 Mikroszkópok fajtái Speciális fénymikroszkópok:  Ultraibolya-mikroszkóp  Ultramikroszkóp  Fáziskontraszt-mikroszkóp  Lumineszcencia-mikroszkóp  Konfokális pásztázó mikroszkóp  Polarizációs mikroszkóp  Binokuláris mikroszkóp  Sztereomikroszkóp

6 Mikroszkópok fajtái Elektronmikroszkópok:  Pásztázó elektronmikroszkóp  Transzmissziós elektronmikroszkóp

7 Elektronmikroszkóp

8 Mikroszkópok fajtái: Pásztázószondás mikroszkópok  mikroszkopikus sugárszondát használnak a felület feltérképezésére : szondasugár + detektor: kölcsönhatás alapján : Atomerő mikroszkóp Elektrosztatikus mikroszkóp Mágneses erőmikroszkóp Alagútelektron-mikroszkóp Közeli mező optikai mikroszkópia Pásztázó elektronmikroszkóp Egyéb: akusztikus mikroszkóp :  Hanghullámmal, minta hangvezetését méri

9 Fénymikroszkópia Látható fény segítségével Optikai lencse használatával Felfogó: szem, fotolemez, digitális képalkotó eszköz Korlátok:  sötét vagy erős fényvisszaverésű vizsgálandó felület kell  Diffrakció miatt: max felontóképesség 0,2 mikrométer  Fókuszsíkól kieső pontok csökkentik a kép tisztaságát

10

11 Egy eljárás menetének bemutatása mikroorganizmusokra: 1. Tárgylemez tisztítása: zsírtalanítás 96%-os alkohollal, majd hőkezelés (max °C-on) 2. Preparátum rögzítése (sejtek megtapadása a tárgylemezen)  Sok rögzítési eljárás ismeretes; egyik legegyszerűbb: hővel való rögzítés Megjegyzés: finom ultracellulális részletek vizsgálatakor nem alkalmazható, mert a sejt ezen részében durva változásokat okoz a hő 3. Festés: egyszerű vagy összetett festési eljárással  Pozitív vagy negatív festés  Egyszerű: Polikróm festés, mikroanalitikai festések és indikáló festések  Összetet: Differenciáló festések

12 Festési eljárások Láthatóbbá tehetőek velük a minták Fluoreszcens festékek:  Immunfestés  Zöld fluoreszcens fehérje pH alapján (mikroorganizmusok festéséhez):  Bázikus színezőanyagok (metilénkék, fukszin, malahitzöld, kristályibolya, neutrálvörös)  Savas színezőanyagok (eozin)  Semleges színezőanyagok (rhodamin B)

13 Gram-pozitív baktérium: Gram-negatív baktérium:

14 Konkrét alkalmazás : mikroorganizmusok kimutatása: Bacillus cereus és Pseudomonas fluorescens A megfelelően előkészített tárgylemezre 1 csepp vizet cseppentünk Ebben szuszpendálunk 1-1 kacsnyit az előre kitenyésztett baktériumtenyészetekből (Bacillus cereus és Pseudomonas fluorescens) Alapos elkeverés, és a tárgylemezen minél vékonyabb rétegben történő szélesztés után a készítményt láng felett rögzítjük. Kihűlés után a festést az alábbi séma szerint végezzük:  Festés genciánibolya-oldattal 1 percen át  Vizes öblítés  Pácolás Lugol-oldattal 1 percen át  Vizes öblítés  Színtelenítés 96 %-os alkohollal 0,5 percen át  Vizes öblítés  Kontrasztfestés szafraninnal 1 percen át  Vizes öblítés, szárítás

15 A készítményt immerziós objektívvel vizsgáljuk. Benne a Bacillus cereus baktériumok kék színű (Gram- pozitív), a Pseudomonas fluorescens sejtek pedig piros színű (Gram-negatív) pálcikaként mutatkoznak. A preparátum értékelésekor tekintettel kell lenni arra a tényre,hogy a festés eredménye függ a tenyészet korától is. Gram-pozitív baktériumok idősebb tenyészete néha Gram-negatív jelleget mutathat. Bacillus cereusPseudomonas fluorescens

16 Források: Írott források:  Bruno P. Kremer – A mikroszkóp használata, Geobook Hungary Kiadó,  Öveges József- A mikroszkóp és használata  uments/Tananyag/EKF/Okologiai_es_kornye zetelemzesi_komplex_terepgyak.pdf  3pia  tera/mikro.html  picasso.elte.hu/microscopy/pozsgai2005.ppt

17 Források: Képek:  archive.microbelibrary.org  textbookofbacteriology.net  makszutov.hu  auroscience.hu  alphaoptika.hu  mikroszkop.network.hu  elektro-optika.hu  mokkka.hu  sirbuday.hu


Letölteni ppt "Mikroszkópia Különböző spéci mikroszkópok és festési eljárások Készítette: Rajnai Tamás."

Hasonló előadás


Google Hirdetések