Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Animált bemutató, ajánlott bekapcsolni a diavetítést (pl. az F5-öt megnyomni) Léptetés: nyilak, szóköz, egér görgő, PageUp/PageDown.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "Animált bemutató, ajánlott bekapcsolni a diavetítést (pl. az F5-öt megnyomni) Léptetés: nyilak, szóköz, egér görgő, PageUp/PageDown."— Előadás másolata:

1 Animált bemutató, ajánlott bekapcsolni a diavetítést (pl. az F5-öt megnyomni) Léptetés: nyilak, szóköz, egér görgő, PageUp/PageDown

2 A koncentráció meghatározása Valamilyen indikátor mennyiségi jellemzője utal a koncentrációra pl:  szín (abszorbancia, optikai denzitás)  fluoreszcencia  sejtszám (pl. növekedési hormon koncentráció meghatározása) Számszerűsíthető értéket ismert koncentrációjú mintával való összehasonlítás segítségével kaphatunk (standard) A sztenderddel összehasonlítás alapja: Ha két minta abszorbanciája azonos  koncentrációjuk is azonos DE EZ CSAK RÉSZBEN IGAZ!!!!

3 koncentráció Ismeretlen koncentrációjú minta OD A standard hígítási sora (szigmoid görbe) Az optikai denzitás alpján bármelyik lehetne ? Az összehasonlíthatósághoz az ismeretlen mintából is hígításokat kell csinálni! Ez az a tartomány, ami a koncentrációt jellemző értékeket ad Szerencsés esetben, a minta OD-je a lineáris szakaszra esik, és nem kell hígítani.

4 OD Becslés „vonalzóval” standard koncentráció (µg/ml) (felező hígítás (log)) Az a tartomány, ahol az abszorbancia arányos a koncentrációval 2X4X8X16X32X64X128X256X Ismeretlen minta hígításai azonos OD-hoz tartozó pontok A két csőben azonos a koncentráció Az 1.9μg/ml-re hígított standard megfelel a… … 128-szorosra hígított ismeretlen mintának Tehát az (eredeti hígítatlan) ismeretlen minta koncentrációja: 1.9x128 = 243.2μg/ml

5 OD standard koncentráció (µg/ml) (felező hígítás (log)) 2X4X8X16X32X64X128X256X Ismeretlen minta hígításai Ha felírjuk az egyenes szakaszok egyenleteit, eltehetjük a vonalzót, és elővehetjük a számítógépet y std =mx+b Y minta =mx+b Vegyük észre, hogy az x tenglyek eltérő skálázása miatt (piros ill. kék feliratok), a két egyenes nem párhuzamos egymással!

6 Durva hibák Tudatában kell lenni, hogy milyen abszorbancia érték tartományban használhajuk fel az OD értéket, ha egy egyenletbe szeretnénk visszahelyettesíteni, és az alapján koncentrációt számolni! Hígítási görbe Illeszett egyenes, egyenlettel y=mx+b  OD=m(koncentráció)+b OD koncentráció Bármely töménységű oldat kellően nagy hígításának OD-je erre a részre fog esni. Az egyenletbe ezt az OD értéket behelyettesítve, és ez alapján a hígítást is figyelembevéve (visszaszorozva), óriási – hamis! – koncentációt kapunk eredményül Hasonló mondható erről az értékről is A felhasználható OD értékek ebbe a tartományba esnek

7 Hígítási görbe OD koncentráció A felhasználható OD értékek ebbe a tartományba esnek Ne erőltessük az egyenes illesztést ott ahol felesleges hibásan illesztett egyenes Az egyenest is ezekre a pontokra kell illeszteni

8 Vegyük észre, hogy a hígítás/koncentráció tengelye a korábbi ábrákon logaritmikus ábrázolású volt! Ugyanannak a sorozathígítással kapott mérésnek az ábrázolása: Normál (lineáris) hígítási tengellyelLogaritmikus hígítási tengellyel A jó ábrázolás segít a kiértékelésben, segíti megtalálni azokat a pontokat, amikre egyenes illeszthető!

9 hígítás: hígítás 2 x : =

10 A jó ábrázolás segít a kiértékelésben Próbáljuk meg meglátni a hígítási sorozatokban a „szigmoid görbe” megfelelő részeit, akkor is, ha a függvényben nem ábrázolódik teljesen, és ennek megfelelően illeszteni az egyenest

11 A gyakorlatban csak ritkán adatik meg, hogy szép sztenderd hígítási görbével dolgozhassunk. Az ismeretlen mintából sem szokás teljes szigmoid görbét kiadó hígítási sorozatot készíteni. Általában csak 2-3 féle hígítást készítünk belőle. 1x2x4x8x16x32x64x128x OD standard (1x: 100  g/ml) hígítás az ismeretlen minta hígításai hígítás1x10x100x OD érzékenységi küszöb körüli érték 2.1 kb. 5 (a pontos érték kiszámításához pl. a két pont közti egyenes egyenletét lehetne felhasználni) 100/5 = 20  g/ml az ismeretlen 20x10 = 200  g/ml

12 Ebben a példában a hígítatlan (1x) ismeretlen minta OD értéke valószínűleg nem lett volna használható. 1x2x4x8x16x32x64x128x OD standard (1x: 100mg/ml) hígítás az ismeretlen minta hígításai hígítás1x10x100x OD A 4.0 OD érték körüli érték a legtöményebb sztenderd hígítási pont! Lehet, hogy a sztenderd hígítási görbe valójában más lefutású! pl. ha a hiányzó 2x hígítás ide esik Ez a szigmoid görbe felső plató része! Felhasználjuk-e a megmaradt adatpontot?

13 A kiadott példák megoldásához szükségünk lesz valamilyen spreadsheet / táblázat kezelő programra (pl. OpenOffice, MS Excel)

14 Számoljuk ki az ismeretlen minta anti-BSA tartalmát! A standard minta koncentrációja 100μg/ml.

15 Írjuk be a következőket: a hígítás logaritmusát,… a párhuzamos standardok átlagát,… és a párhuzamos minták átlagát kiszámoló képletet!

16 Jelöljük ki a képleteket tartalmazó sort, és a kijelölés jobb alsó sarkában levő kis négyzetet megfogva húzzuk (másoljuk) le a többi sorba. Kattintsunk a diagramm varázslóra

17 Válasszuk ki a „Pont (XY)” diagramtípust Válasszuk az adatsor fület Hozzáadás

18 Írjuk be az ábrázolandó adatsor nevét Adjuk meg a hígítás értékeit Jelöljük ki a hígítás értékeit Adjuk meg a standard OD értékeit Jelöljük ki a standard OD értékeit

19 Végezzük el ezeket a műveleteket az ismeretlen minta adataival is

20 A standard pontjaira és az ismeretlen pontjaira egyenes illeszthető

21 A standard lineáris szakaszának adatai Az ismeretlen lineáris szakaszának adatai Ezeket az adatokat felhasználva ábrázolni tudjuk a lineáris részt, pl. az előzőekben bemutatott módon egy külön diagrammon. (Vigyázzunk, hogy a megfelelő hígítási értékeket válasszuk ki az adatok ábrázolásánál!) ! !

22 (A jobb egérgombbal) Kijelölve az egyenest kiválsztjuk a trendvonal illesztése pontot

23 Lineáris trendvonal Egyenlet megjelenítése (Egyebek)

24 A standard egyenlete Ugyan ezt megcsináljuk az ismeretlennel is (vegyük észre, hogy azonos hígítási lépések mellett a vonalak meredeksége elvileg azonos)

25 ismeretlen: y = x standard: y = x pl. OD 1.5  x=3.85OD 1.5  x=6.78 Az =491 –szeres hígítású ismeretlen felel meg… …az =54830 –szoros hígítású standardnak. Az egyenletekkel kiszámíthatjuk, hogy egy adott OD érték mellé milyen hígítások tartoznak Az ismeretlen 54830/491= kb.112x hígabb a 100µg/ml-es standardnál 0.89 μg/ml

26 Megjegyzés A bemutatott számítás egy demonstratív példa! Ennél egyszerűbben is eljuthatunk a megoldáshoz! (pl. elég a standard hígítási egyenes egyenletét kiszámolni, és ezt összevetni egy megfelelően kiválasztott ismeretlen minta OD értékével)


Letölteni ppt "Animált bemutató, ajánlott bekapcsolni a diavetítést (pl. az F5-öt megnyomni) Léptetés: nyilak, szóköz, egér görgő, PageUp/PageDown."

Hasonló előadás


Google Hirdetések