Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

ELVÁLASZTÁSTECHNIKA V. KROMATOFOKUSZÁLÁS KIRÁLIS, ZÁRVÁNY-KOMPLEX KROMATOGRÁFIA IMMOBILIZÁLT FÉMION AFFINITÁSI KROMATOGRÁFIA Dr. Kremmer Tibor EÖTVÖS LORÁND.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "ELVÁLASZTÁSTECHNIKA V. KROMATOFOKUSZÁLÁS KIRÁLIS, ZÁRVÁNY-KOMPLEX KROMATOGRÁFIA IMMOBILIZÁLT FÉMION AFFINITÁSI KROMATOGRÁFIA Dr. Kremmer Tibor EÖTVÖS LORÁND."— Előadás másolata:

1 ELVÁLASZTÁSTECHNIKA V. KROMATOFOKUSZÁLÁS KIRÁLIS, ZÁRVÁNY-KOMPLEX KROMATOGRÁFIA IMMOBILIZÁLT FÉMION AFFINITÁSI KROMATOGRÁFIA Dr. Kremmer Tibor EÖTVÖS LORÁND TUDOMÁNY EGYETEM Budapest

2 KROMATOFOKUSZÁLÁS CHROMATOFOCUSING

3 KROMATOFOKUSZÁLÁS KROMATOGRÁFIÁS ELVÁLASZTÁS IZOELEKTROMOS PONT (pI) ALAPJÁN pH GRADIENS ELŐÁLLÍTÁSA IONCSERE ELVÉNEK FELHASZNÁLÁSA GÉLKROMATOGRÁFIA ELVÉNEK FELHASZNÁLÁSA SLUYTERMAN (1977)

4 KROMATOFOKUSZÁLÁS GRADIENS KÉPZÉS (pH, IONERŐSSÉG, KONCENTRÁCIÓ, POLARITÁS) B A pH V B > A

5 KROMATOFOKUSZÁLÁS - pH-GRADIENS KÉPZÉS

6 KROMATOFOKUSZÁLÁS A pH GRADIENS ALKALMAZÁSÁNAK MÓDJAI IONCSERÉLŐ - GÉLKROMATOGRÁFIÁS TÖLTETBE VEZETETT pH GRADIENS IONOS (IONCSERÉLŐ) TÖLTETEN AMFOLITTAL KIALAKÍTOTT pH GRADIENS INERS HORDOZÓN (GÉLSZEMCSE) KOVALENS KÖTÉSSEL RÖGZÍTETT (IMMOBILIZÁLT) pH GRADIENS

7 KROMATOFOKUSZÁLÁS IONCSERÉLŐ – GÉLKROMATOGRÁFIÁS TÖLTETEN ELŐFELTÉTELEK AZ IONCSERÉLŐ AZ ELVÁLASZTÁS TELJES pH TARTOMÁNYÁBAN ÁLLANDÓ (POZITÍV VAGY NEGATÍV) TÖLTÉSŰ LEGYEN A FEHÉRJÉK BIZTOSAN KIZÁRÓDJANAK A GÉLSZEMCSÉK PÓRUSAIBÓL A pH GRADIENS OPTIMÁLIS SZAKASZA MEGFELELJEN A FEHÉRJÉK IZOELEKTROMOS PONTJÁNAK A FEHÉRJÉK IZOELEKTROMOS PONTJA AZ ELVÁLASZTÁS pH TARTOMÁNYÁNAK KÖZEPÉN LEGYEN

8 pH Áramlás iránya KROMATOFOKUSZÁLÁS - 1 pI 5,0 4,9 (3X)

9 pH Áramlás iránya KROMATOFOKUSZÁLÁS - 2 pI 5,0 4,9 (3X)

10 pH Áramlás iránya KROMATOFOKUSZÁLÁS - 3 pI 5,0 4,9

11 pH Áramlás iránya KROMATOFOKUSZÁLÁS - 4 pI 5,0 4,9

12   pH Áramlás iránya KROMATOFOKUSZÁLÁS - 5 pI 5,0 4,9

13 pH Áramlás iránya KROMATOFOKUSZÁLÁS - 6 pI 5,0 4,9

14 pH Áramlás iránya KROMATOFOKUSZÁLÁS - 7 pI 5,0 4,9

15 KROMATOFOKUSZÁLÁS IONCSERÉLŐ – GÉLKROMATOGRÁFIÁS TÖLTETEN ELŐFELTÉTELEK A FEHÉRJE IZOELEKTROMOS PONTJA AZ ELVÁLASZTÁS pH TARTOMÁNYÁNAK KÖZEPÉN LEGYEN AZ IONCSERÉLŐ AZ ELVÁLASZTÁS TELJES pH TARTOMÁNYÁBAN ÁLLANDÓ (POZITÍV VAGY NEGATÍV) TÖLTÉSŰ LEGYEN A FEHÉRJE BIZTOSAN KIZÁRÓDJON A GÉLSZEMCSÉK PÓRUSAIBÓL A pH GRADIENS OPTIMÁLIS SZAKASZA MEGFELELJEN A FEHÉRJE IZOELEKTROMOS PONTJÁNAK

16 KROMATOFOKUSZÁLÁS IONCSERÉLŐN AMFOLITTAL MULTIFUNKCIÓS ANIONCSERÉLŐ OSZLOP EGYENSÚLYBA HOZVA pH = 7 PUFFERREL ELÚCIÓ (MINTA FELVITEL) MEGFELELŐ pI - TARTOMÁNYÚ AMFOLITOT (AMFOTER POLIELEKTROLIT) TARTALMAZÓ pH = 4,2 PUFFERREL AZ ELUCIÓ SORÁN AZ AMFOLIT MEGTITRÁLJA AZ IONCSERÉLŐT ÉS pH-GRADIENST HOZ LÉTRE, AMELYBEN A FEHÉRJE MOLEKULÁK pI ÉRTÉKÜKNEK MEGFELELŐEN KÖTÖDNEK ÉS KÜLÖNBÖZŐ RETENCIÓVAL OLDÓDNAK LE

17 REFERENCIA FEHÉRJÉK ELVÁLASZTÁSA KROMATOFOKUSZÁLÁSSAL (Cytochrom C – Ribonuclease – Lentil-lectin)

18 L – Aminosav oxidáz izoenzimek elválasztása kromatofokuszálással Mono P oszlopon

19 HAEMOGLOBIN VARIÁNSOK ELVÁLASZTÁSA KROMATOFOKUSZÁLÁSSAL

20 IZOM FEHÉRJÉK ELVÁLASZTÁSA KROMATOFOKUSZÁLÁSSAL

21 TOJÁS FEHÉRJÉK ELVÁLASZTÁSA KROMATOFOKUSZÁLÁSSAL

22 KIRÁLIS ZÁRVÁNY - KOMPLEX KROMATOGRÁFIA

23 Gl i cer in aldeh i d Enantiomer ek A KIRALITÁS ELVE

24 ENANTIOMEREK ELVÁLASZTÁSA KIRÁLIS (ZÁRVÁNY - KOMPLEX) KROMATOGRÁFIÁVAL KÖZVETETT MÓDSZEREK SZÁRMAZÉK KÉPZÉS KOVALENS KÖTÉSSEL, KIRÁLIS VEGYÜLETTEL ELVÁLASZTÁS NORMÁL, VAGY FORDÍTOTT FÁZISON FIZIKAI-KÉMIAI TULAJDONSÁGOK ELTÉRÉSE ALAPJÁN Pl. MARFEY – REAGENS (1-FLUORO-2,4 DINITROFENIL 5 L-ALANIN ELŐNYÖK KÖVETELMÉNYEK REAKCIÓ SEBESSÉG NEM BEFOLYÁSOL, KROMATOGRÁFIA KÖRÜLMÉNYEIVEL JÓL OPTIMÁLHATÓ, SZELEKTIVITÁS, DETEKTÁLÁS NÖVELHETŐ, MINTA ELŐTISZTÍTHATÓ, ANTIPÓDOK KÜLÖN ALKALMAZHATÓK REAGENS OPTIKAI TISZTASÁGA, KROMOFOR CSOPORT IGÉNYE, MINDKÉT ANTIPÓD KELL, REPRODUKÁLHATÓ-KVANTITATÍV REAKCIÓ, STABIL, EGYSÉGES SZÁRMAZÉK-TERMÉK

25 ENANTIOMEREK ELVÁLASZTÁSA KIRÁLIS (ZÁRVÁNY - KOMPLEX) KROMATOGRÁFIÁVAL KÖZVETLEN MÓDSZEREK KIRÁLIS ADALÉKANYAGOK ALKALMAZÁSA CIKLODEXTRINEK - KORONAÉTEREK KOMPLEX - IONPÁR KÉPZŐK EGYÉB LIGANDUMOK AZ ÁRAMLÓ FÁZISBAN (dinamikus módszerek) AZ ÁLLÓ FÁZISON KÖTVE – KIRÁLIS ÁLLÓ FÁZISOK (sztatikus módszerek)

26 KIRÁLIS (ZÁRVÁNY - KOMPLEX) KROMATOGRÁFIA KIRÁLIS ADALÉKANYAGOK ALKALMAZÁSA AZ ÁRAMLÓ FÁZISBAN ZÁRVÁNY KOMPLEX KÉPZŐK CIKLODEXTRIN SZÁRMAZÉKOK, KORONA ÉTEREK TERNER KOMPLEXEK (FÉMION – KIS LIGANDUM - ENANTIOMER) DIASZTEREOMER – IONPÁR KÉPZŐ KOMPLEXEK AZ ÁLLÓ FÁZIS FÁZIS FELÜLETÉN KIRÁLIS ELLENIONNAL (KÁMFOR SZULFONSAV, KININ-KINIDIN, PIRROLIDIN KARBONSAVAK)

27 KIRÁLIS (ZÁRVÁNY - KOMPLEX) KROMATOGRÁFIA KIRÁLIS ADALÉKANYAGOK ALKALMAZÁSA AZ ÁLLÓ FÁZISBAN KIRÁLIS ÁLLÓ FÁZISOK ZÁRVÁNY KOMPLEX KÉPZŐK (KOVALENSEN KÖTÖTT CIKLODEXTRIN SZÁRMAZÉKOK, KORONAÉTEREK) PIRKLE-TIPUSÚ FÁZISOK (3,5-DINITRO-BENZIL l-AMINOSAV) CELLULÓZ ALAPÚ FÁZISOK (ACETÁT, KARBAMÁT, IZOTIOCIANÁT,BENZOÁT ÉSZTEREK) MAKROCIKLUSOS GLIKOPEPTIDEK (VANCOMYCIN) FORDÍTOTT (REVERSED) AFFINITÁSI KROMATOGRÁFIÁS FÁZISOK - MAKROMOLEKULÁRIS KÖTÖTT LIGANDUMOK (ALBUMIN, AGP, OVOMUKOID, AVIDIN, KIMOTRIPSZIN, STB.) LIGANDUM CSERE ELVÉN ALAPULÓ FÁZISOK

28 ZÁRVÁNY-KOMPLEX KÉPZŐK A KIRÁLIS KROMATOGRÁFIÁBAN KORONA ÉTEREK CIKLODEXTRINEK

29 A KIRÁLIS KÖLCSÖNHATÁSOK 3 PONTOS SZABÁLYA A KIRÁLIS KÖLCSÖNHATÁSOK TIPUSAI DIPOL – DIPOL  -  (SAV-BÁZIS) H – DONOR, AKCEPTOR TÉRIGÉNY GÁTLÁS ZÁRVÁNY KÉPZŐDÉS KOMPLEX KÉPZÉS, LIGANDUM CSERE, KIRÁLIS KÖRNYEZET (HELIX) AROMÁS GYŰRŰ HATÁSOK, MEREV MOLEKULA SZERKEZET

30 CIKLODEXTRINEK (CD)  -CD β-CD  -CD Molekula összetételC 36 H 60 O 30 C 12 H 70 O 35 C 48 H 80 O 40 n (glukóz egység)678 Molekula tömeg (g/mol) I Specifikus optikai rotáció (g/mol) Oldékonyság vizben (súly %, 25 O C) Üregátmérő (Å) Üregtérfogat (A 3 ) Üregtérfogat /g (ml) Víz ekvalens az üregben61117 pK 3 a hidroxil csoportokra Zárvány vegyületBenzolNaftalinAntracén

31 A CIKLODEXTRINEK SZERKEZETE

32 A CIKLODEXTRINEK MOLEKULA SZERKEZETE

33 GABA-RECEPTOR SPECIFIKUS ANALOG VEGYÜLET (rac-NSC 382) enantiomerek (R, S) elválasztása CELLULÓZ-p-METIL BENZOESAV ÉSZTER OSZLOPON (CHIRALCEL OJ, DAICEL) MolnárT, Visy J et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. (2008)

34 1.Fitos, I., Visy, J., Simonyi, M. and Hermansson, J. (1995). Separation of enantiomers of benzodiazepines on the Chiral-AGP column. J. Chromatogr. A, 709, rac-NCS 382 Oxazepam enantiomerek (R, S) királis elválasztása BSA-HPLC oszlopon (0,01M foszfát puffer, pH: 7,0 2% ACN) Fitos I, Visy J, Simonyi M. J. Biochem. Biophys. Methods (2002)

35 rac-NCS 382 rac-Oxazepam és rac-oxazepam hemiszukcinát enantiomerek elválasztása Chiral-AGP oszlopon (0,01M foszfát puffer, pH:7,0 5% ACN) Fitos I, Visy J. et al. J Chromatogr. (1995)

36 KÜLÖNBÖZŐ HIDANTOIN ÉS BARBITURÁT SZÁRMAZÉKOK KIRÁLIS ELVÁLASZTÁSA ChiraSep DN BP6 OSZLOPON (HEXÁN-2-PrOH-ACN)

37 IMMOBILIZÁLT FÉM ION (KELÁT - KOMPLEX) AFFINITÁSI KROMATOGRÁFIA IMAC IMMOBILIZED METAL ION AFFINITY CHROMATOGRAPHY

38 IMMOBILIZÁLT FÉM ION (KELÁT-KOMPLEX) AFFINITÁSI KROMATOGRÁFIA IMAC

39 HUMÁN SZÉRUM AGP IMAC VIZSGÁLATA

40


Letölteni ppt "ELVÁLASZTÁSTECHNIKA V. KROMATOFOKUSZÁLÁS KIRÁLIS, ZÁRVÁNY-KOMPLEX KROMATOGRÁFIA IMMOBILIZÁLT FÉMION AFFINITÁSI KROMATOGRÁFIA Dr. Kremmer Tibor EÖTVÖS LORÁND."

Hasonló előadás


Google Hirdetések