Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

Az előadás letöltése folymat van. Kérjük, várjon

AKTIVÁLT KOMPLEX ES* FUNKCIONÁLIS DOMAIN-EK SZUBSZTRÁT KÖTŐ HELY REGULÁTOR DOMAINEK: Me modulátor (INHIBITOR,AKTIVÁTOR,S,P) Kovalens módositás: foszforilezés.

Hasonló előadás


Az előadások a következő témára: "AKTIVÁLT KOMPLEX ES* FUNKCIONÁLIS DOMAIN-EK SZUBSZTRÁT KÖTŐ HELY REGULÁTOR DOMAINEK: Me modulátor (INHIBITOR,AKTIVÁTOR,S,P) Kovalens módositás: foszforilezés."— Előadás másolata:

1 AKTIVÁLT KOMPLEX ES* FUNKCIONÁLIS DOMAIN-EK SZUBSZTRÁT KÖTŐ HELY REGULÁTOR DOMAINEK: Me modulátor (INHIBITOR,AKTIVÁTOR,S,P) Kovalens módositás: foszforilezés glikozilezés proteolizis Katalitikus domain AKTIV CENTRUM lehetnek azonosak is BIM SB 2001

2 ENZIM MODULÁCIÓ BIM SB 2001

3 INHIBÍCIÓ BIM SB 2001 REVERZIBILIS IRREVERZIBILIS E + S ES E + P + I E I DINAMIKUS EI KOMPLEX LINEÁRIS INHIBÍCIÓ komplett k P NEMLINEÁRIS INHIBÍCIÓ (HIPERBOLIKUS) részleges βk P „csökkent, maradék aktivitás” 1/V - I ábrázolás DIXON ábrázolás

4 1. KOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 1. BIM SB 2001 VERSENGÉS S ÉS I KÖZÖTT AZ E AKTÍV HELYÉÉRT, VAGY..... KÖLCSÖNÖS KIZÁRÁS I szubsztrát analóg alternatív szubsztrát termék MODELLEK I S 1.MODELL: Klasszikus kompetitív inhibíció Az I verseng S-sel ugyanazon aktív hely elfoglalásáért

5 1. KOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 2. BIM SB 2001 MODELLEK S I 2. MODELL: sztérikus gátlásA : I kötődése egy másik kötő helyhez térbelileg gátolja S-nek az aktív helyhez kötését.

6 BIM SB KOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 3. MODELLEK 3. MODELL: sztérikus gátlás B : I és az S verseng egy közös kötő helyért. S I

7 BIM SB 2001 BIM SB KOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 3. MODELLEK 4. MODELL: átlapoló helyek esete :1 és 3 kötő hely képes az i, a 2 és 4 kötő hely pedig az S megkötésére, de egymást kölcsönösen kizárják I S 12 34

8 BIM SB KOMPETITÍV INHIBÍCIÓ MODELL: I kötõdése az enzimhez konformáció változást okoz az enzimen és ez megakadályozza S-nek az aktív centrumhoz kötődését. Ilyen a végtermék gátlás (feed back inhibíció) is. MODELLEK I I S I S S

9 1. KOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 5. BIM SB 2001

10 1. KOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 6. BIM SB 2001

11 1. KOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 7. BIM SB 2001 MÁS: Adott S-nél melyik az az I, amelyik 50%-os inhibíciót okoz?

12 DIXON ábrázolás: 1/V i I        S K 1 V 1 S max S  tg SKV K Imax S S= , tg  =0 -K I

13 1. KOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 8. BIM SB 2001 ALTRNATÍV SZUBSZTRÁTOK : HEXOKINÁZ: glükóz, fruktóz S- analógok KEMOTERÁPIA

14 1. KOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 8. BIM SB 2001 p-NH 2 -benzoesav PABA átalakulás fólsavvá FÓLSAV (baktérium számára szükséges) PABA analóg blokkolja a fólsav szintézist szulfa- metoxazol KEMOTERÁPIA

15

16 kompetitiv inhibició k. termék inhibició alternativ v. versengő szubsztrátok ANALÓGIÁK

17 2. NEMKOMPETITÍV INHIBÍCIÓ BIM SB 2001 V = kp(ES) KSKS KSKS KIKI KIKI

18 Az inhibitor az enzimnek egy másik aktív helyéhez kötődik és nem befolyásolja a szubsztrát kötődését -- nem változtatja meg az enzimnek a szubsztráthoz való affinitását. Csak a rapid ekvilibrium körülményei között létezik, K s =K m. BIM SB 2001

19 2. NEMKOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 2. BIM SB 2001 Az inhibitor a látszólagos V max értéket változtatja meg, K s (illetve K m ) értékét nem befolyásolja.

20 BIM SB NEMKOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 3. -K I tg  I K m /V max

21 2. NEMKOMPETITÍV INHIBÍCIÓ: Dixon

22 2. NEMKOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 4. BIM SB 2001 Példák: H + ionok hatása a kimotripszin esetében. Itt az aktív centrumban egy proton akceptor hely van, amely inhibeálható növekvő H + -ion koncentrációval. (A L-B ábrázolás tiszta nemkompetitív inhibíciót mutat, azonban ne feledkezzünk meg a pH-nak komplex enzimbefolyásoló hatásáról ). nehézfém molekulák (-SH reagensek), vagy cianidok. Ezeknél azonban -mint láttuk - gyakran a hatás irreverzibilis Mekkora I duplázza meg a L-B egyenes meredekségét? Mekkora I okoz 50%-os inhibíciót? I = K I

23 ALMASZELET levegőn barnulás o-diphenol oxidase → o-kinon (hasonló enzim: tyrosinase tyrosine → melanin.)tyrosinemelanin ez tovább oxidálódik barna termékekké kompetitiv inhibitor: para-hydroxybenzoesav (PHBA) (B), ugynoda kötődik,mint a katechol nonkompetitive inhibitor: phenylthiourea rézhez kötődik, ami elengedhetetlen az enzimműködéshez

24 3. UNKOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 1 BIM SB 2001 Ks kp E + S ES KsKs kpkp E + P + I ESI I csak az ES-hez kötődik I kötő hely „nem kész” I kötő hely „ kész” S kötő hely eltorzult

25 3. UNKOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 2 BIM SB 2001 mi változott? l.nemkomp.inh. a komp forditottja, K S csökken Egy unkompetitiv I K S és V max értékét ugyanolyan mértékben csökkenti

26 3. UNKOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 3 BIM SB 2001

27 3. UNKOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 4 BIM SB 2001 I 1/V S nő DIXON ábrázolás 1/V = f( I ) minden inh. esetében ismert: LINEÁRIS INH.

28 LINEÁRIS KEVERT TIP. INHIBICIÓ BIM SB 2001 I JELENLÉTE MÓDOSITJA S -NEK ES -RŐL TÖRTÉNŐ DISSZOCIÁCIÓJÁT l. nemkomp!!! DE E + S ES E + P + I EI + S ESI K S  K S K I  K I k P ahol K S =E.S/ES,  K S =EI.S/ESI K I =E.I/EI  K I =ES.I/ESI E ES ESI E EI ESI

29 LINEÁRIS KEVERT TIP. INHIBICIÓ 2 BIM SB 2001 L. NEMKOMP!!!

30 LINEÁRIS KEVERT TIP. INHIBICIÓ 3 BIM SB 2001

31 INHIBICIÓK ÖSSZEFOGLALÁSA BIM SB 2001 S és I kölcsönösen kizárják egymást az enzimről KOMPETITIV S és I egymástól függetlenül kötődnek az enzimre NEMKOMPETITIV mint előző, de az I megváltoztatja az enzim affinitását KEVERT TIPUSÚ I csak a S után kötődik UNKOMPETITIV

32

33 BIM SB /V 1/S 0 1/V 1/S 0 1/V 1/S 0 1/V 1/S 0 KOMPETITIV INHIBICIÓ NEMKOMPETITIV INHIBICIÓ UNKOMPETITIV INHIBICIÓ KEVERT TIPUSÚ INHIBICIÓ I I I I LINEWEAVER-BURK ÁBRÁZOLÁS

34 BIM SB 2001 Hanes – Langmuir ábrázolás NEMKOMPETITIV INHIBICIÓ S/V S 0 S 0 S 0 S 0 -K mapp -K m KOMPETITIV INHIBICIÓ I -K m I -K mapp -K m I UNKOMPETITIV INHIBICIÓ I -K mapp -K m KEVERT TIPUSÚ INHIBICIÓ

35 EADIE- HOFSTEE ábrázolás BIM SB 2001 V/S V V V V V max I KOMPETITIV INHIBICIÓNEMKOMPETITIV INHIBICIÓ V max V maxi V max V maxi I UNKOMPETITIV INHIBICIÓ KEVERT TIPUSÚ INHIBICIÓ V max V maxi I

36 SZUBSZTRÁT INHIBICIÓ -- A szubsztrátnak ahhoz, hogy termékképző átmeneti komplex jöjjön létre, két vagy több helyen kell, hogy az enzimhez kötődjék. Ha sok S molekula van jelen, előfordulhat, hogy egy S molekula az egyik, egy másik S molekula pedig egy másik kötőhelyhez kapcsolódik s így inaktív komplexek jönnek létre (lássuk be, hogy ez is reverzibilis inhibíció). -- A szubsztrátnak ahhoz, hogy termékképző átmeneti komplex jöjjön létre, két vagy több helyen kell, hogy az enzimhez kötődjék. Ha sok S molekula van jelen, előfordulhat, hogy egy S molekula az egyik, egy másik S molekula pedig egy másik kötőhelyhez kapcsolódik s így inaktív komplexek jönnek létre (lássuk be, hogy ez is reverzibilis inhibíció). BIM SB 2001 E - OOC CH 2 - OOC E CH - OOC Succinate Malonate E - OOCCH 2 CH 2 COO - Normal S inhibition

37 BIM SB 2001 ■-- Nagy S koncentrációnál egy S molekula olyan kötõhelyhez is kapcsolódhat az enzimen, amely nem az aktív centrum része, az ilyen kötődés mintegy NEMKOMPETITIV (v. unkompetitiv)módon megakadályozza a normális S kötődést. ■--Az enzim működéshez szükség lehet egy aktivátor molekulára. Ha ez kapcsolódni képes a szubsztráttal, sok S molekula "elvonja" az enzimtől az aktivátort, így csökkentve annak tényleges aktivitását. ■--Két (vagy több) szubsztrátos reakciók esetén az egyik szubsztrát feleslege lekötheti a másik szubsztrát kötő helyeit, megakadályozva a szükséges második szubsztrát kapcsolódását, így megintcsak inaktív komplexek jönnek létre. ■-- Nagy S koncentráció aspecifikus módon is gátolhatja a reakciót, például az ionerősség megnövekedése miatt. SZUBSZTRÁT INHIBICIÓ

38 BIM SB 2001 b és c -- disszociációs állandó megváltozását mérő faktorok egyszeres S kötés esetén, a -- kölcsönhatási együttható rendszerint > 1

39 SZUBSZTRÁT INHIBICIÓ BIM SB 2001

40 SZUBSZTRÁT INHIBICIÓ BIM SB 2001 E + SES E + P Ks kp + S SES Ki Az uncompetitiv inhibició sémájából I=S, tehát ha [S] kicsi ha [S] nagy

41 SZUBSZTRÁT INHIBICIÓ BIM SB 2001 V µmax=0.9,Ks=50,Ki=10 µmax=0.9,Ks=50,Ki=50 µmax=0.9,Ks=50,Ki=100 Szubstrát koncentráció (mg/L)


Letölteni ppt "AKTIVÁLT KOMPLEX ES* FUNKCIONÁLIS DOMAIN-EK SZUBSZTRÁT KÖTŐ HELY REGULÁTOR DOMAINEK: Me modulátor (INHIBITOR,AKTIVÁTOR,S,P) Kovalens módositás: foszforilezés."

Hasonló előadás


Google Hirdetések